甘蓝型油菜子叶原生质体培养及植株再生研究

以甘蓝型油菜中双6号子叶为材料制备原生质体,采用固液结合培养,探讨了其原生质体分离、培养与再生的优化条件,获得了再生植株。结果表明:混合酶液(0.5%纤维素酶+0.1%果胶酶+0.2 mol/L甘露醇+80 mmol/L CaCl2)与SCM溶液按3∶7的比例混合,酶解14 h可获得高产率中双6号子叶原生质体;原生质体在前人设计的B、C固液相结合培养基上培养效果好;最佳分化培养基为E培养基+1.0 g/L 6-BA+0.1 g/L NAA+0.02 g/L GA3+30μmol/L AgNO3;所有再生芽均在无激素的MS培养基上生根。研究结果为建立成熟的甘蓝型油菜原生质体再生体系提供了新的配方与依据。     

甘蓝型油菜与菘蓝原生质体融合及植株再生体系的研究

以甘蓝型油菜(Brassica napus)和菘蓝(Isatis tinctoria)叶片为材料提取原生质体,采用PEG-高钙高pH法融合亲本原生质体,采用固液双层培养法诱导愈伤组织的形成.研究适宜原生质体分离的酶种类及浓度,并考察了激素种类和用量对愈伤组织诱导和分化的影响.结果表明,5 mg/L纤维素酶+3 mg/L离析酶适合甘蓝型油菜和菘蓝的酶解.各培养基中适宜的激素浓度分别为,诱导培养基PellB 1.0 mg/L6-BA+1.0 mg/L NAA+0.25 mg/L 2,4-D;增殖培养基PellC 2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L2,4-D;分化培养基PellE 2.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA+0.02 mg/L 2,4-D.获得了15株再生植株,杂种幼苗叶片均呈深绿色,叶表面覆有厚的蜡质,叶片肥厚,植株在成熟期时株高比甘蓝型油菜矮,开花较晚,雄蕊发育不完全,杂种体细胞染色体数目为48～66.     

葡萄原生质体培养中若干因素的研究

试验结果表明,处于对数生长期、再生能力强的培养细胞有利于原生质体分离和培养。原生质体分离和初期培养的适宜渗透浓度为0.5M;固体包埋法的效果明显优于液体培养,前者分裂率为后者的3.8倍,达13.8%;外源激素浓度以 B_5基本培养基添加 NAA 2.0mg/L,BA 2.0mg/L,原生质体分裂率最高;葡萄糖取代常规稳压剂甘露醇,效果显著,细胞分裂率是后者的2.6倍。     

毕克齐山药离体培养诱导再生植株的研究

分别以毕克齐山药零余子、带节茎段为外植体,通过离体培养研究不同激素、不同浓度MS培养基对诱导再生植株的影响。结果表明:以零余子做外植体时,无附加激素的1/4MS培养基效果最好,再生植株诱导率达到40%。以节间为外植体时,MS+NAA2.0mg/L+KT0.5mg/L培养基再生植株诱导率达到95%。     

醋栗番茄子叶的原生质体培养再生植株

Shahin(1985)报道:番茄的一些品种中,从培养30天左右的幼苗上分离的原生质体再分化能力高,能够顺利地再生植株。笔者为了研究所有番茄品种、番茄属的醋栗番茄种以及那些迄今尚未报道过的番茄属其他种从原生质体再生植株的能力,使用了Shahin(1985)曾用过的一系列基本培养基:TM-2、TM-3和TM-4。结果,从醋栗番茄子叶的原生质体获得了再生植株。     

软化菊苣高效原生质体培养及植株再生

为了进行体细胞杂交和基因工程改造的尝试,采用10mL酶解液处理12h,1g鲜重叶片游离出4.5~5.9×106个原生质体,生活率达78%~85%。原生质体分别用3种培养基进行培养,以软化菊苣种子无菌苗的叶片为起始材料进行了叶肉原生质体分离、培养和植株分化的研究,并建立高频率的植株再生系统。结果表明:最适合培养基为改良KMP,原生质体的分裂率和植板率分别达到48.0%和27.5%。同时对原生质体培养的时间长度与愈伤组织的胚胎发生能力及植株分化频率进行了试验比较,培养时间28~41d为最佳时间,愈伤组织的胚性(81.2%)和分化率(70.9%)最高;培养时间42~55d,胚性愈伤及植株分化的比例分别为55.0%和45.2%;培养时间56~69d,愈伤组织的胚性(22.5%)和分化率(16.5%)较差。原生质体再生植株在不含激素的1/2MS培养基上,部分植株直接生根,未生根植株转至1/2MS+IBA 0.3mg·L~(-1)+0.1%活性碳可以生根。     

草木樨状黄芪A4转化系原生质体培养研究

建立了草木樨状黄芪A4转化系原生质体再生植株的实验体系.以草木樨状黄芪发根农杆菌A4转化系再生植物幼叶为材料,通过酶解法,游离出大量有活力的原生质体,原生质体经培养持续分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗.比较了不同酶解时间、培养密度和培养基对原生质体分裂和再生植株的影响.结果表明,原生质体植板密度为3×105个/mL,采用液体浅层培养,在附加了2.0mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、0.3mol/L甘露醇和2%蔗糖的DPD培养基中,可获得最高分裂频率,达32.4%.原生质体持续分裂形成愈伤组织可高频[(91.75±3.1)%]分化出再生苗.甘露碱纸电泳和PCR分析表明,外源基因T-DNA在原生质体来源的再生植株中仍然存在.     

番茄组织培养与试管苗繁育

[目的]建立番茄的高效再生体系,为下一步进行番茄叶绿体遗传转化研究奠定基础。[方法]通过培养经无菌处理的番茄种子获得无菌苗,切取无菌苗的叶片置于附加有激素组合为3.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA的MS培养基中诱导愈伤组织产生,再利用愈伤组织,比较不同浓度激素组合对番茄愈伤组织分化不定芽与不定芽生根的影响。[结果]MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA+30 mg/L蔗糖培养基对诱导愈伤组织分化不定芽的效果最佳;1/2MS+1.0 mg/L IAA培养基对生根最好。[结论]适宜激素浓度的选择是番茄高效再生体系建立的关键。     

橡胶树热研8—79原生质体培养再生植株

【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1.50%＋果胶酶0.15%＋离析酶0.50%、酶解时间为12 h时,继代培养第5 d的胚性悬浮细胞达最高产量（3.6 ×107个/mL PCV）;用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5 ×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。     

影响银白杨再生体系建立的因素分析

为了获得银白杨离体再生体系的优化方案,通过对离体再生体系中银白杨无菌苗的获得、生芽培养基激素组合及诱导出芽、生根培养基激素组合及诱导生根进行了一系列优化试验。结果显示:影响银白杨植株再生的最主要因素是激素浓度和类型,其次是培养基种类和外植体类型;最利于银白杨再生植株的培养基条件为:芽增殖培养基以MS 6-BA1.0mg/L NAA0.3mg/L IBA0.6mg/L为宜,生根培养基以1/2MS NAA0.05mg/L IBA0.2mg/L为宜。     

橡胶树热研8-79原生质体培养再生植株

[目的]优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础.[方法]以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率.[结果]酶组合为纤维素酶1.50%+果胶酶0.15%+离析酶0.50%、酶解时间为12h时,继代培养第5d的胚性悬浮细胞达最高产量(3.6 ×107个/mL PCV);用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%.原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株.[结论]通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系.     

番茄遗传转化体系的建立

研究以番茄（Lycopersicon esculentum Mill.）栽培品种“中杂9号”、“毛粉802”和“合作908”为试材,通过对番茄茎段的离体培养,研究不同基因型以及不同激素组合对植株再生的影响。结果表明：以茎段为外植体时中杂9号和毛粉802更适合诱导再生植株形成;IAA与IBA比较,IAA利于芽的形成及正常芽的发育。其中中杂9号最适宜诱导愈伤组织和芽分化培养基为MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.1mg/L、MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.4-0.5mg/L,分化率均高达100%,毛粉802最适宜诱导愈伤组织和芽分化培养基为MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.4-0.5mg/L,分化率高达100%。茎段外植体适宜的生根培养基为MS＋IAA0.5mg/L＋6-BA0.6mg/L,生根率高达80.8%。     

青岛大花脱毒种苗快繁技术研究

【目的】探讨啤酒花品种青岛大花脱毒苗植株再生技术,以期获得青岛大花脱毒苗快速繁殖的便捷途径。【方法】以青岛大花脱毒苗的单芽茎段为外植体,分别以不同水质（自来水、凉开水、蒸馏水、当地井水）、不同前茬和简易营养液处理（带芽根茬、带芽根茬+简易营养液、新鲜培养基）及不同激素组合进行芽诱导和植株再生。【结果】在芽诱导及植株再生培养过程中,以当地井水进行外植体培养的效果较好,虽然其诱导芽数、新增芽数、增殖倍数稍低于对照蒸馏水,但生根茎段数、生根率、平均根长、茎粗和株高均最高,其次为凉开水处理;自来水处理的生根茎段数、诱导芽数、新增芽数、增殖倍数、株高等均明显低于蒸馏水对照。在前茬培养基上添加10 mL简易培养液对外植体培养20 d, 其诱导芽数、新增芽数、增殖倍数、株高均明显高于新鲜固体培养基处理,且叶色均浓绿。在不同激素组合中,随着6-BA、IAA浓度的增加,单芽茎段的诱导芽数、生根率、增殖倍数呈先降低后增加的趋势,其中以原继代培养的激素组合6-BA 0.1 mg/L +IAA 0.2 mg/L的诱导芽数、生根率、增殖倍数最高,其次为激素组合6-BA 0.01 mg/L +IAA 0.02 mg/L。【结论】在外植体诱导和植株再生培养中,可用当地井水、凉开水作为培养基介质取代蒸馏水;继续利用前代培养基并留茬、再适量添加简易培养液对外植体进行培养,可有效提高脱毒苗的增殖倍数,且再生苗质量不受影响;可使用含低浓度激素组合（6-BA 0.01 mg/L+IAA 0.02 mg/L）进行脱毒试管苗芽诱导和植株再生培养,从而节省生产成本。     

"保冠一号"番茄子叶与下胚轴的愈伤组织诱导与植株再生

目的:研究不同浓度的CPPU诱导"保冠一号"番茄子叶及下胚轴在培养条件下的植株再生情况,确定CPPU诱导番茄植株再生的最佳浓度.方法:采用CPPU与NAA的不同浓度组合,诱导"保冠一号"番茄子叶及下胚轴的愈伤组织形成、不定芽发生及植株生长.结果:各种浓度在CPPU和NAA组合对"保冠一号"番茄的植株再生有不同的影响.子叶以MS+CPPU 0.05 mg/L+NAA 0.01 mg/L,下胚轴以MS+CPPU 0.025 mg/L+NAA 0.01 mg/L为最佳再生培养基,对愈伤组织的形成和不定芽的分化都有良好的效果;不定芽在1/2MS+IBA 0.5 mg/L和1/2MS+NAA 0.5 mg/L培养基上生根效果最佳.     

番茄子叶、下胚轴植株再生体系的建立

本研究以番茄(Lycopersicon esculentumM ill.)栽培品种“中杂9号”、“毛粉802”和“合作908”为试材,通过对番茄子叶、下胚轴的离体培养,研究不同基因型以及不同激素配比对植株再生的影响。结果表明:以下胚轴为外植体时3种材料均可诱导再生植株,其中中杂9号和毛粉802最适宜诱导愈伤组织和芽分化的培养基为MS 6-BA2.0mg/L IAA0.5mg/L,合作908最适宜诱导愈伤组织和芽分化的培养基为MS 6-BA2.0mg/L IAA0.4 mg/L。以子叶为外植体时毛粉802和合作908均可诱导出再生植株,其中毛粉802诱导愈伤组织及芽分化的最适宜培养基为MS 6-BA1.0mg/L IAA0.2mg/L和MS 6-BA1.0mg/L IAA0.5mg/L,合作908诱导愈伤组织及芽分化的培养基为MS 6-BA0.5mg/L IBA0.5mg/L。两种外植体适宜的生根培养基均为MS IAA0.5 mg/L。     

青花菜非对称体细胞杂交研究

以具有良好再生能力的"玉皇"青花菜下胚轴原生质体为供体、"优秀"下胚轴原生质体为受体,进行非对称体细胞杂交,获得再生植株。结果表明:供体原生质体UV射线的最大辐射剂量为0.10 J/cm;受体原生质体R-6G的最大处理剂量为40μg/mL;PEG-6000 250 g/L,CaCl2.2H2O 1.025 g/L,甘露醇45.5 g/L,山梨醇45.5 g/L,附加15%DMSO,可获得14%的融合率。综合改良的融合体培养基最适激素浓度为:6-BA 0.3 mg/L,NAA 0.2 mg/L,2,4-D 0.5 mg/L。     

中华补血草的组织培养和快速繁殖体系的优化

以中华补血草为试材,通过优化激素配比证明:适宜补血草诱导植株再生的一次成芽培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.1mg/L;对诱导再生植株生根激素的筛选结果表明,最适生根激素为IBA,其适宜浓度为0.1 mg/L;生根培养基为MS+IBA 0.1 mg/L。     

大青杨再生体系的优化

采用正交试验设计,研究不同培养基和不同激素质量浓度配比对大青杨无菌苗叶片植株再生体系的影响,优化大青杨植株再生体系。结果表明:对大青杨不定芽诱导的影响最大为激素NAA,其次是培养基类型,最后是激素6-BA;不定芽增殖的影响最大是NAA,其次是培养基类型,最后是6-BA;对丛生苗生根的影响最大是激素类型,然后是培养基类型;培养基类型和激素的质量浓度对大青杨再生体系有着较明显的影响。最适宜大青杨分化的培养基为:WPM+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA,诱导率达100%;最适宜大青杨丛生芽增殖的培养基为:MS+0.05 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA,芽健壮;最适宜大青杨生根的培养基为:1/2MS+0.1 mg/L IBA,经过14 d生根,生根率达100%。     

宽叶独行菜组培体系的建立和初步优化

以宽叶独行菜(Lepidium latifolium L.)的叶片和茎段为外植体,接种于MS培养基上进行愈伤诱导和植株再生培养,研究不同浓度激素对愈伤和再生苗生长状况的影响。结果表明,当激素浓度为1.5 mg/L2,4-D+1.0 mg/L IAA+0.5 mg/L 6-BA时,再生植株长势最好;当激素浓度为0.5 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L IAA+1.5 mg/L 6-BA时愈伤组织长势最好;适当增加6-BA的浓度,可以促进再生植株根系的生长。     

新疆甜菜组织培养及植株再生研究

[目的]以新疆的两个甜菜品系为研究对象,对培养基激素及浓度配比、外植体的选择及两个基因型的再生能力进行了初步的比较分析,以期建立起适合新疆甜菜品种(系)的组织培养体系.[方法]对不同的灭菌方式、培养基激素组合、不同外植体再生能力、不同基因型甜菜再生能力进行比较.[结果]分别对影响甜菜组织培养及植株再生体系的各个因素进行比较后建立了适合新疆甜菜的组织培养及植株再生体系.[结论]确定采用破除甜菜种壳进行灭菌处理的方法灭菌效果最明显.通过筛选,确定了甜菜叶柄再生的最适培养基激素配比,为MS+6-BA 1.0 mg/L,IAA 0.3 mg/L.对不同外植体再生能力的比较分析发现,叶柄的再生能力高于其他外植体,是较为理想的外植体来源.新甜486与413两种基因型的再生能力无明显差异.