水牛生精上皮细胞的冷冻保存

为探讨水牛睾丸生精上皮细胞冷冻保存的适宜冷冻保护剂及其浓度,在DMEM中分别添加不同浓度的冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)、甘油(G)、丙二醇(PG)和乙二醇(EG),以及10%的胎牛血清(FBS),对3～5月龄水牛生精上皮细胞进行冷冻保存,解冻后台盼蓝染色测定细胞活率.结果显示,当以0%,5%.10%,15%,20%DMSO添加时,10%DMSO组的细胞解冻后活率均显著高于其他各组(P<0.05);当以0%,20%,25%,30%,35%,40%G添加时,35%G组的细胞解冻后活率均显著高于其他各组(P<0.05);当以0%,5%,10%,15%,20%,25%PG添加时,15%～25%PG各组的细胞解冻后活率均显著高于其他各组(P<0.05),但以20%PG组为最高;当以0%,5%,10%,15%,20%EG添加时,5%～20%EG各组的细胞解冻后活率均显著高于0%EG组,但以10%EG组为最高;而对4种冷冻保护剂各最优浓度组的细胞解冻后活率比较,10%DMSO、35%G组的细胞活率均显著高于20%PG、10%EG组(P<0.05).结果表明,以添加10%DMSO或35%G于含10%FBS的DMEM冷冻液中,采用两步慢速冷冻,液氯保存,37℃水浴1 min解冻,是一种具有较高复苏率的冷冻保存水牛生精上皮细胞的方法.     

广西冬季不同日粮对摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精畸形率和活力的影响

为了研究广西冬季不同日粮对摩拉、尼里/拉菲种公牛冷冻精液畸形率和活力的影响,找到冬季饲喂水牛种公牛的最佳日粮,本研究选择广西壮族自治区畜禽品种改良站饲养的(4~15)岁水牛种公牛36头(摩拉20头、尼里/拉菲16头),按照品种相同、年龄结构相仿的原则分为4组,分别饲喂4种不同的日粮。结果显示:摩拉种公牛试验期冻精畸形率分别为26.73%、32.67%、27.13%、16.53%,日粮4冻精畸形率显著低于日粮2(P0.05);4组间冻精活力无显著差异(P0.05)。尼里/拉菲种公牛试验期4组冻精畸形率分别为26.11%、40.89%、18.42%、18.46%,日粮3、日粮4冻精畸形率显著低于日粮2(P0.05);其冻精活力分别为30.90%、28.70%、29.42%、33.81%,4组间冻精活力无显著差异(P0.05)。分别对摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精畸形率与活力进行相关性分析可知,摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精畸形率与活力呈强负相关。综合考虑,水牛种公牛在冬季饲喂精料4kg、苜蓿干草1.5 kg、燕麦干草6.5kg、青贮玉米秸秆5kg日粮搭配方案与精料4kg、苜蓿草1.5 kg、燕麦草4.5 kg、鲜象草20 kg日粮搭配方案均能使摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精的畸形率和活力达到较好的效果。     

五种糖类对犬精液冷冻保存效果的研究

选取8只身体健康、性欲旺盛的比格公犬,采集其精液,对鲜精进行质量检测,主要包括颜色、射精量、精子活率、活力和pH。选取精子活率达到70%以上犬精液用于后续精液冷冻试验。分别将含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖和海藻糖的精液稀释液与精液按照1∶2的比例进行稀释。经冷冻解冻后,进行活率、活力、质膜完整性和顶体完整性的精子质量检测。通过对新鲜精液进行品质检测,结果显示5只合格用犬的平均射精量为2.85 mL,密度为2.01×10~8个/mL,pH为6.56。含有果糖的冷冻稀释液中精子活率和活力最高,分别达59.90%和54.00%;其次是添加葡萄糖和乳糖的稀释液中活率较高,分别为59.21%和56.73%,且两组稀释液中精子解冻后活力均为52.00%。进一步评估精子解冻后质膜完整率,结果显示葡萄糖和果糖组显著高于其他组,分别达48.73%和49.52%;而蔗糖添加组精子质膜完整率最低,为42.21%。稀释液中添加果糖的精子解冻后顶体完整率显著高于其他组,而添加蔗糖组顶体完整率最低。在比格犬的精液冷冻保存中,添加果糖的冷冻稀释液能显著提高精子的活率和活力,从而达到提高冻精质量的效果。     

水牛精液品质的研究

[目的]本研究测定了摩拉水牛、尼里水牛和槟榔江水牛的射精量、精子密度、精子活力和畸形率。[方法]精液品质按照《牛冷冻精液》标准和《牛冷冻精液生产技术规程》进行测定。[结果]结果得出,摩拉水牛公牛的射精量为5.1±2.37ml（n=2688）、精子密度为7.8±3.68亿/ml、原精活力57.4±16.42%;冷冻精液解冻活力平均为36.0±2.13%（n=1680）、畸形率为20.62±11.04%（n=873）;尼里水牛公牛的射精量为5.3±1.99ml（n=1370）、精子密度为8.4±3.54亿/ml、原精活力62.7±12.51%;冷冻精液解冻活力平均36.5±2.43%（n=1102）、畸形率为15.2±5.71%（n=481）;槟榔江水牛公牛的射精量为5.6±2.26ml（n=271）、精子密度为8.6±5.13亿/ml、原精活力65.2±9.19%;冷冻精液解冻活力平均为37.2±2.48%（n=239）、畸形率为19.6±6.08%（n=110）。[结论]本研究获得了水牛精液品质的基础数据。     

云南地区牛冷冻精液质量性状的表现与研究

本研究对云南地区近五年来牛冷冻精液主要质量性状(活力、前进运动精子数、畸形率)进行了检验分析,随机抽取样品455头份,均为云南企业生产的产品,涉及品种有荷斯坦、西门塔尔、安格斯、短角、摩拉、尼里、槟榔江等。应用统计学原理对相关数据进行分析,结果表明:解冻后平均活力为42.0%、每剂量中前进运动精子数为1481万个、畸形率16.3%。品种间比较,活力差异均不显著(P>0.05)。前进运动精子数,肉用牛和水牛均显著高于荷斯坦牛(P<0.05)。畸形率方面,水牛分别高于荷斯坦和肉用牛1.4、1.6个百分点(P<0.05)。不同生产单位间比较,B站水牛、肉用牛的活力分别高于A站1.9、1.3个百分点(P<0.05)。B站水牛前进运动精子数高于A站96万个(P<0.05)。B站畸形率低于A站1.2个百分点(P<0.05)。     

水牛PHB基因克隆与表达模式

本研究克隆水牛PHB(prohibitin)基因并运用生物信息学方法对其进行分析,同时初步探索其表达模式。首先应用RT-PCR技术扩增获得水牛PHB基因片段,应用生物信息学方法分析和预测了其理化性质、蛋白质二级及三级结构。测序结果表明,水牛PHB基因编码区全长948bp,推测编码272个氨基酸,理论蛋白质相对分子质量29 830,等电点为5.58。多重序列比较分析显示,水牛PHB基因核苷酸序列与牛、野猪、羊、黑猩猩、人、小鼠等相应序列相似性分别为99.4%,94.3%,97.8%,92.8%,92.9%,89.6%;系统进化树分析结果推测,PHB基因在不同物种以及进化过程中具有高度的保守性。QRT-PCR分析结果显示,水牛PHB基因在垂体、大脑、肝脏、卵巢、肌肉、肾脏和睾丸组织具有不同程度的表达,其中在肾脏表达量最高,肝脏、睾丸、卵巢和垂体次之,肌肉表达最低。对高、低活率水牛精子样本PHB基因表达进行了定量检测,结果显示高活率精子中PHB基因表达显著高于低活率精子(P0.05)。Western blot分析结果发现,高、低活率精子样品的β-actin蛋白条带清晰一致,PHB蛋白在高、低活率精子样品的表达差异显著,低活率精子样品的PHB蛋白表达下调,这与mRNA水平的检测结果一致。本研究为阐明PHB基因在水牛精子发生过程中的作用及其对水牛精子活率的影响奠定了基础。     

武汉地区种公牛精液质量的影响因素分析

为了探讨气温、品种、采精次数对种公牛精液品质的影响,笔者从2010-2012年连续3年对本站的黄牛和水牛进行观察和试验,以采精量、鲜精活力、密度为指标对生产记录进行统计分析。结果表明,高温对种公牛的鲜精活力影响很大,尤其是影响持续性使得9、10月份鲜精活力平均只有31.42%和37.96%;西门塔尔种公牛年产量最高,但不耐热;对种公牛每头每日采精2次,第2次活力比第1次好。     

用B型超声波导引活体采集奶水牛的卵母细胞

本试验利用B型超声波导引活体采集42头奶水牛的卵母细胞,每头牛每周采卵2次,共采卵96次,卵母细胞回收率67%,可用卵母细胞数平均为3.1,成熟培养的囊胚率平均为24.7%.对水牛的卵巢观察结果表明活采对水牛的健康及生殖机能不产生影响.     

荷斯坦奶牛性控冻精应用效果的研究

对800头健康青年荷斯坦奶牛分两组进行人工授精,400头输性控冻精,剩余400头输常规冻精作为对照。结果:性控组受胎率为67.3%,产活率为84.2%,妊娠天数为275.8±4.4 d,母犊率为88.5%,平均初生重为37.0±4.48 kg(n=295);对照组受胎率为77.5%,产活率为90%,妊娠天数为276.5±6.8 d,母犊率为51.9%,平均初生重为37.5±4.37 kg(n=180)。其中性控组的产母犊率极显著高于对照组(P<0.01),受胎率、产活率、妊娠天数以及平均初生重对于对照组差异均不显著(P>0.05)。结论:经流式细胞术分选的性控冻精后代具有约90%的高产母率;基于对受胎率、产活率、妊娠天数以及初生重的对比,可以确定性控冻精后代具有良好的遗传稳定性。     

水牛假阴道的改进及使用效果分析

针对摩拉水牛用欧式和改进型两种不同的假阴道采精效果进行了比较研究。结果表明水牛用欧式和改进型两种不同的假阴道采精其射精量差异极显著（P〈0．01）,精子密度的差异不显著（P〉0．05）,原精液活力的差异显著（P〈0．05）,冻精解冻活力的差异不显著（P〉0．05）,冻精解冻后精子畸形率的差异不显著（P〉0．05）,冻精顶体完整率的差异不显著（P〉0．05）,冻精产量的差异极显著（P〈0．01）;说明改进后的假阴道采精效果良好,能有效提高水牛的精液产量和质量。     

ACTB基因第4外显子遗传变异分析及其与种公牛精液品质的关系

采用PCR-SSCP技术对45头种公牛的ACTB(β肌动蛋白)基因的第4外显子的单核甘酸多态性进行了检测。结果显示:在ACTB基因第4外显子上存在2种基因型,即AA型和AB型。对该多肽片段克隆测序,结果在ACTB基因第4外显子上存在G378C突变。用最小二乘法分析ACTB基因的第4外显子不同基因型与精液品质的相关性,发现ACTB基因第4外显子AA型精子浓度、鲜精畸形率以及冻精畸形率显著高于AB型(P<0.05),AA型鲜精活力、鲜精活精子比率极显著高于AB型(P<0.01),AA型冻精活精子比率显著低于AB型(P<0.05)。     

意大利地中海水牛同期发情-人工授精试验效果的研究

为了繁育纯种地中海水牛,试验采用"促黄体素释放激素A3+氯前列醇+促黄体素释放激素A3"同期化处理国外引进的地中海育成水牛,并用引进的地中海水牛冻精进行人工授精。结果表明:经同期化处理的地中海水牛发情率为87.07%,淡、旺季发情率差异不显著(P0.05);情期受胎率为37.39%,旺季配种受胎率显著高于淡季;淡季母牛48 h内排卵率为59.72%,旺季为81.13%,差异显著(P0.05)。间隔一定时间重复处理不影响发情率和受胎率。地中海水牛同期发情-人工授精效果与摩拉水牛、尼里-拉菲水牛、本地水牛的处理效果基本一致。     

意大利地中海奶水牛引种观察初报

为加快我国南方河流型水牛品种改良,提高我国河流型水牛的乳用和肉用性能,从意大利引进1~2岁高产意大利地中海奶水牛59头,其中公水牛10头,母水牛49头,进行近3年的适应性观察和生产性能测定。结果表明:引进地中海奶水牛成年公牛体重平均为814.1 kg,母水牛体重平均为601.8 kg。公牛采精平均精子密度为12.25亿/m L,平均精子活力为0.54;母牛人工授精平均情期受胎率35.16%,平均初产日龄为1 299.8 d,平均怀孕天数为310.44 d;泌乳期平均产奶量为2 011.3 kg,优秀个体第1胎泌乳300 d,产奶量达到2 818.3 kg。由此表明,引进的地中海水牛很好地适应了我国南方的亚热带气侯环境,各项生产性能和指标与引进地基本相同,应加快推广应用。     

“靓精”对山羊精液液态低温保存效果的影响

为探究山羊精液液态低温保存过程中添加不同稀释倍数“靓精”对保存效果的影响。实验以稀释液中未添加靓精为对照组,在稀释液中分别添加稀释50倍、100倍、200倍、400倍的靓精为实验组,经37℃孵育后持续检测精子活力、活率。结果表明,精液孵育后,与未添加靓精对照组相比,稀释液中添加靓精的实验组精子保存时间、活率及活力均得到提高,其中添加稀释200倍靓精组,精子保存时间最长,精子活率和活力均优于其他实验组。表明稀释液中添加靓精有助于延长山羊精子保存时间,提高精子质量。     

应用ICSI技术生产转基因水牛胚胎的初步研究

本研究旨在探讨水牛精子完整质膜和破损质膜的方法对水牛单精子注射(ICSI)技术转基因效果的影响。水牛精子经冻融、Triton×-100、超声波3种方法破损精子质膜后与外源质粒DNA混合,采用ICSI的方法将基因转染后的精子注射到水牛体外成熟卵内,观察水牛ICSI卵激活后的发育状态和外源基因的表达效果。结果表明:精子质膜完整性实验中,冻融破损精子质膜组早期胚胎基因表达率为21.8%,显著高于活精子组的5.1%(P<0.01);冻融组与活精子组的卵裂率、囊胚发育率均无显著差异(P>0.05)。以冻融、Triton×-100、超声波3种方法破损精子质膜,冻融组的囊胚发育率(16.7%)最高,显著高于Triton×-100组(P<0.01)。同时,冻融组的早期胚胎基因表达率亦显著高于Triton×-100组和超声断尾组(60.3%vs.31.7%vs.18.2%,P<0.01)。上述结果说明,使用ICSI技术转外源基因可获得表达EGFP基因的水牛早期胚胎;冻融精子质膜破损法能有效破损精子质膜,有利于外源DNA与精子的结合,且提高转基因效率。     

多浪羊细管冷冻精液制作技术的研究

为保存和利用优秀地方品种多浪羊的遗传资源,试验在多浪羊原产地进行了细管冻精制作试验.用采集的多浪羊种公羊精液,比较5种冻精保存液配方的细管冻精冷冻效果,测定解冻后精子活力.结果表明:4.83%乳糖保存液解冻后精液的活率平均为36% ,优于其它4种保存液,且差异极显著(P<0.01),解冻后精子的畸形率也均低于其它4种稀释液,差异极显著(P<0.01).表明4.83%的乳糖保存液配方是理想的绵羊细管冻精稀释液.     

不同季节和气候条件对种公牛精液品质的影响的研究

[目的]研究不同季节气候条件对种公牛精液品质的影响。[方法]从采精种公牛中随机抽出5头,选取气温最高（7月份）最低（1月份）和适中温度（4,9月份）进行试验,分别对不同时期所采得的精液进行检测。[结果]在最高温度月份7月份（25℃）时5头种公牛的平均精液量为5.88mL,原精活率67.2%,精液密度16.64亿/mL,冻后活率33.8%,生产冻精数143.4剂,精子畸形率23%。1月份环境温度平均在-11.2℃时,5头种公牛的精液量平均为5.7mL,原精活率66.8%,精液密度13.3亿/mL,冻后活率37.4%,生产冻精数为275.8剂,精子畸形率17.8%。在4,9月份环境温度12℃时精液量为6.6mL,原精活率73.2%,精液密度16.92亿/mL,冻后活率41.8%,生产冻精数404.4剂,精子畸形率12.6%。精液量之间差异显著（P〈0.05）,原精活率之间差异显著（P〈0.05）,精子畸形率之间差异显著（P〈0.05）。冻后活率和冻精生产数差异不显著。[结论]环境温度过高或者过低都会影响精液品质,种公牛在适宜的温度下生产的精液品质也会更加优良,种公牛在温度较高的条件下生产精液品质比在低温条件下还要差,种公牛最适宜的生产温度为12℃～16℃。     

补肾生精散对种公牛精液品质和血浆生殖激素浓度的影响

选用10头么拉水牛种公牛,探讨添加补肾生精散对种公牛血浆促黄体素LH、促卵泡素FSH、睾酮T浓度和精液品质的影响.用药后血浆LH浓度上升,FSH和T浓度下降,种公牛鲜精量、鲜精活力、冻精活力有所改善,说明补肾生精散可改善水牛种公牛精液品质.     

组织培养液M199在庆阳驴细管精液中的应用

为了研究M199对庆阳驴细管鲜精和细管冻精活力及保存时间的效果影响。在鲜精稀释液中,添加不同浓度的M199,在低温保存下,观察不同时间段精子活力;在冻精稀释液中,添加1%的M199,采用液氮熏蒸制作冻精,解冻后观察冷冻效果。结果显示,在低温保存中,稀释液中添加1%的M199,48h后精子活力仍然在0.35以上,与其他试验组和对照组差异极显著(P0.01)。在冻精稀释液中添加1%的M199,试验组与对照组冻后精子活率分别为30.83%和31.33%,两者之间差异不显著(P0.05),但试验组精子有效存活时间显著高于对照组。通过在庆阳驴精液稀释液中添加M199,均能很好的延长精子保存时间。     

冷冻保存对公猪精子功能的影响

试验旨在探究公猪精液冷冻保存对其精子功能的影响。取长白猪的鲜精和优质冻精,用精子分析仪检测精子的运动能力,台盼蓝染色检测精子活率,体外受精（IVF）试验检测卵裂率与囊胚率,采用不同功能检测试剂盒检测冻精和鲜精的顶体完整率、线粒体膜通道孔（MPTP）活性、线粒体膜电位（MMP）、线粒体活性、线粒体氧化应激活性氧（ROS）以及精子DNA完整性,实时荧光定量PCR检测弱精子症相关蛋白基因SMCP、TEKT3、DNAH1、TCTE3的表达。结果表明,与猪鲜精相比,猪冻精的活率及活力均显著降低（P<0.05）,冻精的顶体完整率也明显下降（P<0.05）;冻精的卵裂率和囊胚率显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体功能分析结果显示,冻精的MPTP相对荧光单位值（RFU）、线粒体膜电位荧光比率以及线粒体活性光密度（OD）值均显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体ROS检测发现,冻精的RFU值显著高于鲜精（P<0.05）;精子DNA完整性检测结果显示,冻精拖尾率显著高于鲜精（P<0.05）;而弱精子症相关蛋白基因的表达与鲜精相比,差异不显著（P>0.05）。综上所述,冷冻导致猪精子活率、活力、线粒体功能、DNA完整性下降,最终使得冷冻精液精子的受精能力降低。