豚鼠动物模型评价牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力的研究

以豚鼠为试验动物模型,探索一种应用豚鼠替代牛进行牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力检验的方法.豚鼠和牛同步对6批牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗进行PD50效力检验,其中2批进行重复性试验.豚鼠分别在免疫后7、14、21和28天采血检测Asia-1型的中和抗体水平.统计学分析显示,测定的豚鼠PD50和牛PD50之间具有极...     

猪圆环病毒2型灭活疫苗效力检验中参考疫苗的应用

制备了4批不同抗原含量的猪圆环病毒2型（PCV2）灭活疫苗,灭活前PCV2病毒含量分别为107.0、106.5、105.5和104.5TCID50/mL。对此4批PCV2灭活疫苗,利用本实验室建立的小白鼠效力检验标准进行效力检验,即以PCV2参考疫苗作为对照品,测定待检疫苗免疫小白鼠后血清中PCV2抗体效价的高低来判定疫苗效力。3次重复检测结果都显示灭活前病毒含量为107.0、106.5和105.5TCID50/mL批次的疫苗合格,而灭活前病毒含量为104.5TCID50/mL批次的疫苗不合格,这与猪体内的效力检验结果一致,表明建立的针对猪圆环病毒2型灭活疫苗的小白鼠效力检验方法具有良好的准确性和重复性。     

牛口蹄疫O型、Asia-I型灭活疫苗效力检验豚鼠替代方法的探索

为了探索口蹄疫效力检验的替代方法,用牛口蹄疫O型、Asia-I型灭活疫苗免疫牛和豚鼠各2组,21 d后分别攻击口蹄疫O型、Asia-I型强毒,观察记录本动物及替代动物的发病情况,用Reed-muench法计算其PD50值.结果显示,豚鼠的PD50值与牛的PD50值呈一定的正相关.     

猪O型口蹄疫合成肽疫苗免疫效力的研究

为了解猪O型口蹄疫合成肽疫苗免疫28 d后是否能够增强对易感仔猪的免疫效力,本研究将猪O型口蹄疫合成肽抗原乳化后按1头份、1/3头份和1/9头份三组剂量分别免疫易感仔猪。在免疫第28 d检测仔猪血清中的中和抗体滴度及攻毒保护试验检测PD_(50)。结果显示:1头份剂量组VP1抗体滴度最高达1:45,且显著高于其他剂量组VP1抗体滴度(P0.05);1/3头份剂量组VP1抗体滴度最高达1:22,1/9头份剂量组VP1抗体滴度均为1:16,该两组间无显著差异(P0.05)。猪O型口蹄疫合成肽疫苗能够有效抵抗O/GX/09-7毒株和JMS毒株的侵袭,增强了易感仔猪对该两种病毒的免疫保护力。     

牛口蹄疫O型、Asia-Ⅰ型灭活疫苗效力检验豚鼠替代方法的探索

为了探索口蹄疫效力检验的替代方法,用牛口蹄疫O型、Asia-Ⅰ型灭活疫苗免疫牛和豚鼠各2组,21d后分别攻击口蹄疫O型、Asia-Ⅰ型强毒,观察记录本动物及替代动物的发病情况,用Reed-muench法计算其PD50值。结果显示,豚鼠的PD50值与牛的PD50值呈一定的正相关。     

口蹄疫O-A-Asia Ⅰ型三价灭活疫苗免疫效力和最小免疫剂量的研究

为确定口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗的安全性和免疫效果，按OIE口蹄疫疫苗效检标准和我国口蹄疫灭活疫苗质量标准，对实验室条件下制备的4批疫苗进行了安全性试验、免疫效力试验、免疫持续期试验、疫苗保存期试验和最小免疫剂量试验。结果显示，4批疫苗均对靶动物和实验动物安全，无任何毒副反应；对O、A、AsiaⅠ型口蹄疫的平均免疫效力分别为4．73、6．84和8．10PD50／头份；一次接种的有效免疫期达6个月；2～8℃下的疫苗保存期为12个月；适宜的免疫剂量为，6月龄以上牛每头3．0mL，6月龄以下牛每头1．5mL。该疫苗对接种动物安全，免疫效果良好，一次接种可同时预防O、A、AsiaⅠ型3个血清型的口蹄疫。     

猪口蹄疫O型基因工程疫苗免疫保护试验

选取在1000L发酵罐规模的中试车间生产的3批猪口蹄疫O型基因工程疫苗,按照测定PD50的方法进行免疫保护攻毒试验.结果显示,3批猪口蹄疫O型基因工程疫苗的效力均在3个PD∞以上.试验表明,该猪口蹄疫O型基因工程疫苗可以进行大规模产业化生产.     

免疫增强剂提高猪口蹄疫灭活疫苗免疫效力的研究

为评价免疫增强剂CVC1302对猪口蹄疫疫苗的免疫增强效力,本研究以50日龄断奶仔猪为研究对象,将不同浓度的CVC1302添加到口蹄疫疫苗中免疫仔猪,免疫后28 d采血,液相阻断ELISA (LPB-ELISA)检测免疫猪抗体水平,以筛选CVC1302最佳使用剂量;采用LPB-ELISA监测最佳使用剂量下疫苗对免疫仔猪的免疫持续期;免疫后28 d对所有猪以1000倍半数感染量(PID50) O型口蹄疫病毒(FMDV) MYA98株攻毒评价疫苗的保护效力。同时评价免疫增强剂CVC1302对现有商品化疫苗(O型灭活疫苗、O/A/Aisa-1型三价灭活疫苗及合成肽疫苗)的免疫增强效力。结果表明,高、中、低3个剂量的CVC1302均能够极显著提高口蹄疫疫苗的特异性抗体水平约3个滴度(p0.01),并且中剂量的CVC1302效果最佳。CVC1302可以延长口蹄疫疫苗的合格抗体持续期达6个月,并可以将灭活疫苗的攻毒保护力(PD50)从6.9提升至15.59。将CVC1302添加到商品化疫苗中能够极显著提高口蹄疫疫苗的免疫效力(p0.01)。结果表明,免疫增强剂可以较大幅度增强口蹄疫疫苗的免疫效力,具有较为广阔的应用前景。本研究为提高口蹄疫疫苗的免疫效果提供了新的选择。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗安全性及免疫效力的评价

为了对制备的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)灭活疫苗进行安全性及免疫效力的评价,本试验将3批次猪圆环病毒2型灭活疫苗以2倍剂量接种PCV2阴性仔猪后,进行了安全性分析抗体检测和攻毒试验。结果显示：3批次疫苗以2倍剂量接种仔猪后,仔猪均无异常临床反应,可达到1∶1600以上,而攻毒对照组及空白对照组仔猪的抗体水平均在1∶400以下;攻毒后免疫组可以达到100%保护,攻毒对照组出现100%发病。结果表明,所制备的猪圆环病毒2型灭活疫苗对仔猪不仅安全性好,而且可以为仔猪提供有效的保护,为疫苗推广奠定了重要基础。     

Asia I型口蹄疫疫苗效力检验替代方法的初步研究

使用三株针对AsiaⅠ型口蹄疫146S抗原的杂交瘤细胞株(1#G3C2、2#G6B9、10#C2G1)大量生产腹水单克隆抗体,粗提纯化并按一定的比例进行混合。初步建立混合腹水单克隆抗体介导的间接夹心ELISA方法,使用该方法测定AsiaⅠ型病毒灭活抗原、O型病毒灭活抗原、正常BHK21细胞培养液,结果表明该方法特异性好,所测定OD值和AsiaⅠ型抗原稀释倍数呈明显线性关系。用该方法对11批AsiaⅠ型、O型单价或双价成品疫苗破乳抗原进行测定,结果表明不同批次不同企业生产的疫苗完整病毒颗粒抗原含量有差异,进一步完善有望用于AsiaⅠ型口蹄疫成品疫苗中有效颗粒抗原含量的测定,从而发展成一种疫苗效力检验替代方法。     

不同佐剂制备牛口蹄疫O型灭活疫苗的效力评价试验

本研究采用两种不同佐剂分别与同种抗原乳化制备成两批牛口蹄疫O型灭活疫苗(对应代号分别为A和B),并对其物理性状、安全性、效力等方面进行检验.结果表明,A疫苗的保护率高于B疫苗,佐剂对疫苗的保护率有一定的影响.     

三种猪O型口蹄疫商品灭活疫苗免疫效果比较

为了解三种猪O型口蹄疫商品灭活疫苗的免疫效果,选取两批35日龄的仔猪,每批分为3个小组,分别接种三个疫苗生产厂家猪O型口蹄疫灭活疫苗,通过临床观察及采用ELISA方法检测免疫前1d及免疫后第14d、21d、28d、35d、42d免疫抗体水平,来确定不同疫苗的免疫效果。结果表明,3个厂家的疫苗免疫后均能产生较高的免疫抗体水平,但安全性及免疫效果存在差异。     

沙棘原浆对猪O型口蹄疫疫苗免疫效力影响的研究

在仔猪日粮中添加适宜比例的沙棘原浆作为饲料添加剂,沙棘原浆最大限度的保留了沙棘鲜果中多种营养成分,各种维生素、微量元素、氨基酸和多种药理活性成分得到了更好保留.通过试验研究确定该方法对仔猪O型口蹄疫灭活疫苗和猪O型口蹄疫合成肽疫苗免疫效力的影响.     

口蹄疫疫苗效力检验标准由每头份3PD50提高到6PD50

自2013年9月1日起，国家强制免疫用口蹄疫疫苗将逐步执行新的疫苗质量标准。在现有口蹄疫疫苗质量标准的基础上，提高效力检验标准，增加内毒素和总蛋白检测参数。新生产的口蹄疫灭活疫苗及合成肽疫苗效力检验标准由每头份3PD50提高到6PD50；新生产的口蹄疫灭活疫苗内毒素每头份疫苗不超过50 EU。口蹄疫灭活疫苗总蛋白检测参数分两个阶段实施，自2014年1月1日起，对总蛋白含量实施不定期抽样检测，并公开检测结果；2015年1月1日起，总蛋白含量每ML疫苗不高于500g。     

不同毒株制备的两种猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫效果对比试验

本试验采用2种不同毒株的口蹄疫灭活疫苗分别对120头35日龄仔猪进行了免疫效果试验。结果显示:首次免疫时,猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)免疫组的抗体合格率和疫苗稳定性均优于使用猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株+OR/80株)免疫组。75日龄二免时,使用猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株+OR/80株)免疫组的抗体合格率和疫苗稳定性均优于使用猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)免疫组。表明两种疫苗各有其优缺点,对不同日龄段仔猪的免疫效果存在一定的差异。     

含硒型牛副伤寒活疫苗保存期试验的研究

为了弄清含硒型牛副伤寒活疫苗及其专用稀释液的最佳保存条件及保存期,将四批含硒型牛副伤寒活疫苗(批号200001、200101、200102、200201)分别置-20℃、0～4℃、15～21℃保存不同时间后,检查其活菌率及其对豚鼠的免疫效力;同时用3批含硒型牛副伤寒活疫苗专用稀释液(批号200101、200201、200202)分别置室温(15～21℃)下保存不同时间后,检查其物理性状及灭菌状态.结果显示,这四批疫苗于-20℃保存24个月、0～4℃保存12个月、15～21℃保存2个月,活菌率均在80%以上,对豚鼠的免疫效力均合格;同时这三批含硒型牛副伤寒活疫苗专用稀释液于15～21℃保存12个月外观物理性状及无菌检验均合格.因此,含硒型牛副伤寒活疫苗保存期暂定为-20℃ 24个月、0～4℃ 12个月、15～21℃ 2个月;保存专用稀释液15～21℃(室温)保存期暂定为12个月.     

牛病毒性腹泻/黏膜病灭活疫苗效力检验替代方法的研究

为筛选一种动物来源确定、个体差异较小、经济成本低的牛病毒性腹泻/黏膜病灭活疫苗效力检验方法,选择3个批次的牛病毒性腹泻/黏膜病灭活疫苗(Ⅰ型,NM01株)分别免疫牛、豚鼠,并在免疫后7d、14d、21d、28d、35d、42d采血,用微量血清中和法检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)中和抗体。通过比较牛与豚鼠免疫血清BVDV中和抗体效价,评价用豚鼠替代牛进行牛病毒性腹泻/黏膜病灭活疫苗效力检验的可行性。结果表明,牛和豚鼠接种疫苗后BVDV抗体水平结果相关性较好,证明该替代方法可行。     

猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测

为了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果,选用了两个厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗,对80头试验仔猪进行了免疫注射,并在6、7、8、9、11、13、20周龄采血,通过ELISA检测抗体水平的变化。结果显示,猪口蹄疫O型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体;疫苗的免疫副作用小;使用VP1ELISA和LPB-ELISA检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体试验相关性较好。     

西藏牦牛O型、AsiaⅠ型口蹄疫疫苗免疫抗体效价分析

为调查口蹄疫疫苗对西藏牦牛的免疫保护情况,应用口蹄疫液相阻断ELISA方法对随机选取的西藏五区一市844头牦牛的血清进行O型、AsiaⅠ型口蹄疫抗体水平检测。结果显示,西藏地区牦牛口蹄疫O型、AsiaⅠ型疫苗抗体具有50%以上保护力的比例分别为83.44%、71%,口蹄疫疫苗免疫状况良好,但西藏同一地区不同县、市的牦牛口蹄疫疫苗免疫情况存在较大差异。     

口蹄疫纳米乳疫苗免疫持续期的试验研究

试验用同一批次相同抗原含量的口蹄疫病毒灭活抗原,分别采用纳米乳佐剂和ISA206佐剂配制口蹄疫O型、A型双价灭活疫苗,并对仔猪进行免疫,免疫后6个月内用液相阻断ELISA方法检测O型、A型免疫抗体效价(lg)。结果:免疫后6个月内纳米乳疫苗免疫猪产生的抗体lg平均值均高于ISA206佐剂疫苗,抗体水平在免疫后1个月达到最高。免疫后第6个月,纳米乳疫苗O型抗体lg平均值为2.19,A型抗体lg平均值为2.175,按液相阻断ELISA试剂盒的判定标准免疫猪抗体lg≥1.8,具有99%以上保护效力,纳米乳疫苗属于完全保护范围,而ISA206佐剂疫苗属于不完全保护范围。