硒对妊娠早期山羊子宫局部细胞因子分泌的调节

为了探索硒对妊娠早期子宫局部细胞因子IL-2、IL-4、TGF-β1及TGF-β2的调节作用,将妊娠山羊分为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和对照组。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组山羊分别以0．3、0．5和0．7mg／kg剂量的硒灌服亚硒酸钠溶液,对照组灌服1mL／kg的蒸馏水,每周1次,连续3周。用ELISA试剂盒检测子宫局部细胞因子IL-2、IL-4、TGF-β1及TGF-β2的动态变化以观察硒对其分泌的调节作用。结果表明：（1）妊娠早期（15～19d）山羊两侧子宫角中IL-2、IL-4、TGF-β1及TGF-β2水平无显著差异。妊娠早期山羊两侧子宫角的子宫液IL-2水平在15～18d呈上升趋势,19d时趋于下降;IL-4水平一直呈上升趋势;TGF-β1水平较高,呈不规律变化;TGF-β2呈现先升高、后趋于平稳的趋势。（2）灌服亚硒酸钠溶液,可以显著降低妊娠16～18d子宫液IL-2的水平（P〈0．05或P〈0．01）;同时可显著升高IL-4的水平（P〈0．05或P〈0．01）,且呈一定的剂量依赖关系。（3）0．5和0．7mg／kg剂量组显著升高妊娠16～18d子宫液TGF-β1水平（P〈0．05或P〈0．01）;同时对妊娠16～17d子宫液TGF-β2水平也有显著的升高作用（P〈0．05或P〈0．01）,但对18d时的TGF-β2影响不显著。试验表明,硒对妊娠早期山羊子宫局部IL-2、IL-4、TGF-β1及TGF-β2的分泌具有一定的调节作用。     

CD58对山羊外周血淋巴细胞(PBL)的活化作用

应用 MTT法测定 RBC源 CD5 8对山羊外周血淋巴细胞 (PBL)及 T细胞、CD4 、CD4 -淋巴细胞的活化作用 ,以探讨 CD5 8对山羊 PBL的活化作用及其与单核细胞、淋巴细胞表型之间的关系。结果表明 ,自绵羊和山羊 RBC提取的CD5 8均能刺激山羊 PBL 活化 ,CD5 8与 PHA- P在诱导外周血单个核细胞 (PBMC)及 PBL 的活化中具有显著的相互协同作用 (P<0 .0 1) ,单核细胞并非 CD5 8活化淋巴细胞所必需 ,但对其活化有显著的辅佐功能 (P<0 .0 1)。进一步研究表明 ,CD5 8对 CD4 - 淋巴细胞的活化作用显著高于对 CD4 T细胞的作用 (P<0 .0 1) ,CD5 8对 CD4 T细胞的活化作用较弱 ;PHA- P不能引起纯化淋巴细胞的活化 ,但对 CD5 8诱导的 CD4 T细胞活化有协同作用 (P<0 .0 5 ) ,而抑制 CD5 8诱导的 CD4 - 淋巴细胞的活化 (P<0 .0 1)     

CD58与山羊早孕因子之间关系的研究

应用猪淋巴细胞Ea花环抑制试验 ,建立了山羊EPF测定的方法 ,检测了山羊妊娠早期血清中EPF的活性并对EPF与CD5 8的活性关系进行了研究。结果证明 :猪淋巴细胞Ea花环抑制试验可应用于山羊EPF活性的测定 ;妊娠早期 ( 1～ 2ld)山羊血清中存在EPF活性 ,第 1,8d有活性峰值 (RIT值分别为 18 8± 1 1,2 1 2± 1 8) ,其余时间EPF活性相对稳定 ,呈现一定规律性变化 ;CD5 8( 1∶10 0 )孵育淋巴细胞后 ,RIT值显著高于HBSS液对照组(P <0 0 5 ) ,CD5 8( 1∶2 ,1∶10 )孵育淋巴细胞后 ,RIT值极显著高于HBSS液对照 (P <0 0 1) ,认为CD5 8活性可以用Ea花环抑制试验进行测定并具有与EPF协同抗淋巴细胞血清使RIT值升高作用相似的功能 ;妊娠山羊血清经CD5 8,CD2 ,HBSS液等处理后孵育淋巴细胞 ,经CD5 8处理组RIT值极显著高于HBSS液处理组 (P <0 0 1) ,经CD2处理组RIT值极显著低于HBSS液处理组 (P <0 0 1)而与HBSS液对照组差异不显著 (P >0 0 5 ) ,表明CD5 8与EPF可共同协同抗淋巴细胞血清抑制Ea花环形成 ,CD2对EPF有一定程度的封闭作用。进一步认为CD5 8与EPF具有一定程度的抗原交叉性。     

山羊红细胞膜表面CD58的制备与鉴定

应用胰蛋白酶消化、三氯乙酸沉淀、透析等方法,提取山羊ＲＢＣ同ＣＤ５８。玫瑰花环抑制试验表明,８．０ｇ／Ｌ提取物对猪淋巴细胞的Ｅｔ花环抑制率达到 ６８．６％,且该活性可被ＣＤ２封闭;淋巴细胞转化试验证明,提取物能刺激活化猪ＰＢＭＣ,与绵羊ＲＢＣ源ＣＤ５８的作用间无显著差异（Ｐ〉０．０５）,经ＰＢＬ吸收后,其活性显著降低（Ｐ〈０．０１）。     

山羊CD58的制备与活性检测

无菌采取健康山羊全血 ,用 0 0 5mol/LpH7 5的PBS液离心、洗涤后 ,向红细胞层加入等体积 0 2 5 g/L胰蛋白酶 ,在 37℃水浴中搅拌消化 1h后 ,逐滴加入 5 %三氯乙酸进行酸化 ,离心后取上清液 ,经扩散透析处理和饱和蔗糖溶液浓缩至原体积的 1/ 8,即为CD5 8制剂。总玫瑰花结 (Et)试验及其统计分析表明 ,所制备CD5 8制剂的平均花结形成率极显著低于对照组 (F >F0 0 1) ,表明其活性较高 ,可用于有关试验     

用猪用妊娠诊断剂对山羊进行早期妊娠诊断试验

选择配种后 2 0± 2d的黄淮母山羊 16 4只 ,随机分为试验组 90只和对照组 74只 ,探讨“猪用妊娠诊断剂”对山羊早期妊娠诊断效果。结果表明 ,试验组肌注妊娠诊断剂 ,检出空怀准确率为 92 % (P <0 0 1) ,检出妊娠准确率为 30 % ,而分娩率和双胎率分别低于对照组 5 2 %和33 4 % (P >0 0 5 )。综合分析认为雌激素类妊娠诊断剂不适合于山羊早期妊娠诊断。     

硒对山羊子宫内膜淋巴细胞体外活化作用及对其分泌细胞因子的影响

分离妊娠山羊子宫内膜淋巴细胞(Endometrial lymphocyte,EML)后,分别加入4、8、12、16 mg/L的亚硒酸钠进行体外培养,探讨硒对EML的活化作用及其对分泌细胞因子IL-2I、L-4、TGFβ1及TGFβ2的影响。结果显示,8~16 mg/L的亚硒酸钠可显著地促进山羊EML的体外活化(P<0.01),并呈剂量依赖性。EML活化后,对IL-2的分泌呈微弱的促进作用;对IL-4、TGFβ1、TGFβ2的分泌有显著的促进作用。     

山羊妊娠早期血清部分生化指标动态变化的研究

为了研究山羊妊娠早期血清部分生化指标的动态变化,应用生化法对山羊妊娠早期外周血液中Ca、AKP、GPT及UN的含量进行测定,并探讨其生理学意义.结果表明:随山羊妊娠的进行,山羊血清中Ca和UN含量呈逐渐降低的趋势.血清中AKP和GPT含量则呈逐渐升高的趋势.     

早期妊娠、发情周期及假孕小鼠子宫与荆豆素—I的结合特性及激素调节

应用免疫荧光技术以生物素化的荆豆素-I（UEA-I）为探针，检测其结合位点a-L岩藻糖在小鼠妊振1～8d、假孕1～6d及发情周期子宫中的表达情况，并以摘除卵巢的小鼠为模型观察雌激素、孕酮对小鼠子宫a-L-岩藻糖表达的影响。结果，UEA-I的结合位点主要位于妊娠1～4d的子宫腔上及腺上皮中。在假孕小鼠，UEA-I的结合位点主要位于假孕1～2d的子宫腔上皮及腺上皮中，假孕3～4d时在这些部位的结合逐渐减少或消失。另外，在发情周期各期的子宫腔上皮和腺上皮中也发现很多UEA-I的结合部位，在发情期明显增多，当用雌激素处理时在这些部位的结合明显增加，这些表明，UEA-I在子宫腔上皮和腺上皮上的结合位点可能与胚胎的存在与否无关，而是受母体雌激素的调节。但胚胎着床后UEA-I的结合位点消失，以后又在初级蜕膜中出现，表明UEA-I的结合位点可能与胚胎着床后的蜕膜化反应有关。     

山羊子宫内肽能神经分布及妊娠时的变化

采用免疫组化方法，研究了山羊子宫内含P物质（SP）和含血管活性肠肽（VIP）神经的分布。结果，妊娠及未妊娠山羊子宫颈内有粗细不等的神经束行经于外膜和肌层中，神经分支形成丛状分布于血管壁，子宫颈部未见SP神经元胞体及VIP神经元胞体；未妊娠山羊子宫角内SP神经和VIP神经均呈丛状围绕血管并分布于血管壁；妊娠中期的孕角和非孕角均有胎盘形成，除胎盘内无神经分布外，SP神经及VIP神经同样分支形成丛状分布于血管壁。结果提示，山羊子宫内SP神经和VIP神经主要支配子宫内血管，妊娠时除胎盘内无神经分布外，SP神经及VIP神经的分布无明显变化。     

转录组测序筛选山羊妊娠早期胚胎附植相关基因

旨在通过胚胎附植前、后的山羊子宫角组织高通量测序筛选妊娠早期胚胎附植的关键基因。本研究选取2～4岁体重相近((44.76±3.49)kg)的经产努比亚母山羊16只,在同期发情-人工输精配种后的第15(D15)和第30天(D30)分别随机选取3只羊颈动脉放血处死。采集子宫角组织利用Illumina HiSeq进行高通量转录组测序(RNA-Seq),筛选差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs)并对DEGs进行功能注释,基因功能查询进一步筛选与胚胎附植直接相关的调控基因,荧光定量PCR(qRT-PCR)对筛选的基因进行表达量验证分析。D15和D30子宫角组织转录本比较分析发现了 2 000个DEGs,其中上调基因620个,下调基因1 380个。GO功能聚类分析共分为3大类52组,其中细胞组分17组,生物过程23组,分子功能12组,获得细胞连接与增殖,生物粘附与调节,分子活性与转导等重要生物途径。以D15表达量高低为排序标准,从表达量最高的10个基因中筛选出了与胚胎附植有关的基因MGP和TAGLN;从上调和下调幅度最大的前10个差异表达基因中,获得参与妊娠相关糖蛋白合成与分泌的基因PAG-3、PAG-8、PAG-12,参与生长因子结合与生长激素释放激素受体活性相关基因GHRHR和胰岛素样生长因子结合蛋白基因IGFBP1。qRT-PCR结果显示,随机选取的6个基因在D15和D30子宫角中表达变化趋势与RNA-Seq结果一致。获得的基因MGP、TAGLN、PAG-3、PAG-8、PAG-12、GHRHR、IGFBP1在努比亚山羊胚胎附植中具有重要作用。     

B型超声诊断技术在波尔山羊妊娠早期的应用研究

为了提高波尔山羊的繁殖效率,试验采用B型超声诊断技术在波尔山羊妊娠早期进行了声像学监测.对早期妊娠诊断以及怀胎数目诊断进行了研究.结果显示:在波尔山羊妊娠早期,即妊娠40 d之前,主要以直肠检查为主,腹壁检查为辅;妊娠40d以后腹壁检查时胎体清晰可见,主要以腹壁检查为主,妊娠诊断的准确率为100%,双胎诊断的准确率为100%,单胎诊断的准确率为81.8%.     

Expression of Nupr1 mRNA in Mouse Uterus During Early Pregnancy

The test was aimed to study the expression of nuclear protein 1 (Nupr1) mRNA in mouse uterus during early pregnancy.The method of in situ hybridization was used to investigate Nupr1 mRNA expression in animal models that included early pregnancy,pseudopregnancy,delayed implantation and activation,artificial decidualization and hormonal treatments.The relative expression level of Nupr1 mRNA was detected in early pregnancy and pseudopregnancy using Real-time PCR.During mouse early pregnancy,the signal of Nupr1 mRNA was detected in luminal epithelium and glandular epithelium during the 1st to 4th day and in the decidua area during the 5th to 8th day.Nupr1 mRNA was mainly expressed in the luminal epithelium and glandular epithelium of mose uterus on the 1st to 5th day of pseudopregnancy.The signal was detected in luminal epithelium and glandular epithelium of the mouse uterus in the delayed implantation,which was similar to the results of early pregnancy on the 4th day.The signal was detected in decidua in the model of delayed activation,which was similar to the results of early pregnancy on the 5th day.The expression of Nupr1 mRNA in the model of artificial decidualization was detected in decidua area.In the control of artificial decidualization the slight signal appeared in luminal epithelium and glandular epithelium of the mouse uterus.After treated with oestrogen (E₂) the signal appeared in luminal epithelium and glandular epithelium of the mouse uterus,and the signal was enhanced.After treated with both of E₂ and progesterone (P₄), the expression of the signal was not changed significantly.Real-time PCR result showed that the relative expression on the 2nd day was higher than other days in early pregnancy and pseudopregnancy.The results indicated that the expression of Nupr1 mRNA in mouse uterus was related to the process of mouse early pregnancy.The expression of signal in luminal epithelium and glandular epithelium of the mouse uterus might be regulated by hormones.Nupr1 mRNA expression in uterine stroma was associated with decidualization and active blastocysts.     

奶山羊妊娠黄体中催产素免疫反应细胞的分布

运用免疫组化ABC法妊娠26～120d的奶山羊黄体中催产素免疫反应细胞的分布进行了观察。结果表明，奶山羊妊娠黄体中存在催产素(Oxytocin,OT）免疫反应阳性细胞。阳性细胞在形态上以卵圆形、圆形、棱形为主，还有一些具有明显的突起。根据阳性细胞胞质内反应颗粒着色的深浅，可把OT阳性细胞分为强阳性、中等阳性和弱阳性3种。在妊娠26～30d，阳性细胞数量最多，强阳性细胞主要分布于黄体的周边，中等阳性及弱阳性细胞则均匀分布于整个黄体组织中，妊娠31～60d，阳性细胞数量明显下降，弥散于整个黄体组织中；妊娠61～120d，阳性细胞的数量及逐渐增多，以中等阳性和弱阳性细胞为主，而强阳性细胞数量较少。连续切片HE染色的对照观察显示妊娠黄体中大、小黄体细胞均可出现OT免疫阳性反应。     

交感神经对妊娠早期小鼠子宫内膜发育的影响

为了研究交感神经对小鼠妊娠早期(妊娠第1～9天)子宫内膜发育的影响,本试验采用交感神经阻断剂6-羟多巴胺(6-OHDA,100 mg·kg~(-1)体质量)腹腔注射成年雌性昆明小白鼠,损毁外周交感神经.利用放射免疫分析法、组织学和免疫组织化学技术,检测了小鼠妊娠早期血清17β-雌二醇水平、子宫腺发育和子宫内膜细胞增殖的变化.结果显示:(1)在妊娠第1天(E1)、E5和E7 6-OHDA处理组血清中17β-雌二醇的含量分别降低了63.4%(P<0.01)、35.7%(P<0.05)和25.5%(P<0.05),而在E3和E9分别升高了79.3%(P<0.05)和156.7%(P<0.01);(2)6-OHDA处理降低了妊娠早期子宫腺的比例,与同期对照组相比分别下降了37.5%、38.6%、41.8%、61.4%和58.1%(P<0.01);(3)6-OHDA处理降低了妊娠早期子宫内膜细胞的增殖,使E1、E3、E5、E7和E9子宫内膜增殖细胞分别减少了27.2%、30.2%、40.7%、27.2%和27.7%(P<0.01).上述结果表明,交感神经对雌激素的分泌以及妊娠早期子宫组织结构的重建具有重要的调控作用,进而调节动物早期胚胎的着床和发育.     

山羊妊娠早期胎儿胎盘血管形成及相关基因的表达

旨在探究大足黑山羊妊娠早期胎儿胎盘血管发育、分布和血管生成相关因子表达状况,并对血管生成相关因子表达之间和血管发育进行相关性分析。本研究随机选取15只8月龄、体格相近、身体健康的国家级畜禽遗传资源—大足黑山羊青年母羊,经同一种公羊自然交配后(以末次配种当天记为0 d),经剖腹产手术采集妊娠第20、25和30天的胎儿和胎儿胎盘以及经屠宰采集妊娠第45和60天的胎儿和胎儿胎盘作为研究对象,通过免疫组化法评估胎盘血管发育和分布情况,采用qRT-PCR技术检测主要血管生成相关基因的mRNA表达水平,分析血管生成相关基因之间以及与胎盘血管发育分布的相关性。结果显示,胎儿体重和体长随着妊娠的进行逐渐增加,且血管内皮细胞阳性率处于较高水平(>26%)。山羊胎儿胎盘毛细血管总面积/组织区域面积(CAD)逐渐升高;毛细血管总数/单位组织区域面积(CND)在妊娠25~30 d增加,30~60 d降低,毛细血管总面积/毛细血管根数(APC)呈相反趋势;毛细血管总周长/单位组织区域面积(CSD)无显著变化。妊娠早期胎儿胎盘VEGFA的表达量随着妊娠的进行逐渐升高,且与血管分布存在一定的相关性,其受体FLT1和KDR表达量呈先增高后降低的趋势,分别在30和45 d达到峰值。血管生成相关基因ANGPT1/2及其受体TEK和FGF2及其受体FGFR2的表达均在妊娠30 d时较高。综上表明,在妊娠30 d前,胎儿胎盘主要通过毛细血管形成分支促进血管面积的增加;而在30~60 d,主要通过单位血管的增粗促进血管面积的增加,并且血管生成相关基因的表达在妊娠30 d时较高,这可能和子叶开始形成有关。山羊妊娠早期胎儿胎盘中VEGFA可能通过其受体结合与其他血管生成因子共同作用调控胎儿胎盘血管形成。