转CpTI基因毛白杨的获得

毛白杨是我国特有的树种 ,与其他派别的杨树相比抗性较强 ,品质优良 ,生长迅速。但蛀干害虫桑天牛专门危害毛白杨 ,造成了很大损失。生物技术的发展为害虫防治提供了一条崭新的途径 ,人们寄希望于通过基因工程手段导入外源抗虫基因培育抗虫新品系。ＭｃＣｏｗｎ( 1 991 )将苏云金杆菌毒蛋白(Ｂ .ｔ毒蛋白 )导入银白杨×大齿杨 ,获得一株转基因植株 ,并对舞毒蛾幼虫有毒杀作用 ,国内的研究者同样将Ｂ .ｔ毒蛋白基因导入黑杨派树种获得抗虫转基因植株 (陈　颖 ,1 995;田颖川 ,1 993;王学聘 ,1 997) ,但害虫易对Ｂ .ｔ毒蛋白产生耐受性的问题不…     

不同因素对农杆菌介导的杉木转化效率的影响

以杉木试管苗靠近茎尖的茎段为受体材料,研究6个影响杉木遗传转化效果的因素,初步确定杉木茎段较为合适的转化体系为:预培养1～3 d,OD600 nm为0.1～0.4的菌液浸染10～15 min,共培养3～5 d,共培养基附加乙酰丁香酮(AS)80 μmol·L-1,共培养后延迟3 d筛选.在初次筛选培养基上共得到186个卡那霉素(Km)抗性芽,在二次筛选培养基上获得39个Km抗性芽.PCR检测有2个Km抗性芽呈稳定阳性,初步证明外源天麻抗真菌蛋白(GAFP)基因已整合到这2个Km抗性芽的基因组DNA中.     

泡桐转TCS基因初步研究

运用花粉管导入和农杆菌介导两种方法,对泡桐转TCS基因受体表现性状进行研究,结果表明:泡桐花导入TCS基因后导致泡桐坐果率和畸形率升高;农杆菌介导TCS基因于泡桐组培苗的愈伤组织、茎段、茎尖后,致使其死亡率、分化率、分化数、苗高和颜色发生显著变化,极差分析表明,最佳转基因方式是以茎尖为受体,预培养3d,浸染时间15min,共培养条件为半黑暗。     

农杆菌介导高羊茅基因转化体系的建立

以高羊茅(FestucaarundinaceaSchrebb)品系宾哥(Bingo)为材料,建立了农杆菌介导的基因转化方法。高羊茅种子在9mgL-12,4-D作用下,获得胚性愈伤组织。愈伤组织经农杆菌侵染,在30和50mgL-1的潮霉素浓度梯度下筛选,得抗性愈伤组织。组织化学染色法证实,uidA基因在抗性愈伤组织中表达:抗性愈伤组织在分化培养基中分化得到转基因植株。PCR、Southern杂交法证实外源基因已导入到高羊茅植株中。图5参37。     

农杆菌介导的甜橙基因转化系统建立研究

以3个不同品种甜橙上胚轴为对象，进行了农杆菌介导的基因转化影响因素研究。研究结果表明：红心橙、柳橙、新会橙卡那选择浓度分别为140、100、80μg／mL；不同品种外植体达最高Gus瞬时表达阳性率所需的AS浓度不同，红心橙、柳橙、新会橙分别为150、150、100μmol／L；红心橙、柳橙、新会橙的最适预培养时间分别为2、2、3天，预培养基成分为不定芽分化培养基有利于外植体Gus阳性率的提高；实生苗苗龄以20～25天为宜。     

根癌农杆菌介导Caz基因转化烟草条件研究

利用根癌农杆菌介导Caz基因转化烟草,将外源基因导入烟草愈伤组织,建成可诱导表达细胞质和细胞核CaM/CaM结合多肽的转基因烟草．研究结果表明:植物材料的选择和培养、农杆菌的培养和稀释、植物材料与农杆菌共培养的程度及转基因植株的筛选条件是影响农杆菌转化效率的重要因素．     

转果聚糖蔗糖转移酶基因银腺杨的获得

采用农杆菌介导的遗传转化方法,将来自枯草杆菌的果聚糖蔗糖转移酶基因(SacB)导入银腺杨,以提高杨树对水分胁迫的抗性。以来自无菌培养的叶片为外植体,通过大约10 0 0个叶盘与农杆菌LBA4 4 0 4共培养,将植物双元表达载体pKP中SacB基因导入银腺杨基因组,经卡那霉素筛选后,共获得10 2株卡那霉素抗性植株。经PCR特异性扩增和Southern点杂交分析,证明其中97株再生植株基因组DNA中整合了SacB基因。对其中的6 2个无性系进行RT PCR分析,结果表明SacB基因在其中的5 0个无性系中获得表达。温室生长观察表明,转基因无性系外部形态与对照相比没有稳定的显著差异,少数部分转基因无性系的生长明显受到抑制,其他转基因无性系生长正常。这些转基因无性系的获得为培育抗旱转基因杨树奠定了基础。     

农杆菌介导的SeNHX1基因转化月季愈伤组织的研究

Pink Peace’rose was used to study the optimum conditions for transferring the SeNHX1 gene into the callus. The results showed that the optimal medium was MS+2,4-D 5.0 mg·L^-1 + TDZ 0.5 mg·L^-1. Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation was able to take the target gene into callus and the blue spots were found. The optimum conditions for the transient expression of gusA gene are as following: bacterium density of OD was 0.5, infection time was 20 min, culture time was 3 days. Adding 100 μmol·L^-1 AS, the frequency of transient expression of GUS gene was the highest, which reached about 85% in present study.     

农杆菌介导慈竹4CL基因遗传转化梁山慈竹

以梁山慈竹2种类型成熟胚的愈伤组织为材料,采用农杆菌遗传介导的方法,将已构建好的具有降低木质素含量的PBI121-4CL-RNAi表达载体导入愈伤组织,探讨愈伤组织预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间和温度对遗传转化的影响。研究结果表明,淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织是较好的遗传转化材料。以在愈伤组织培养基上预培养8天的淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织为转化受体,在菌液浓度为OD600=0.05的EHA105中侵染20min后,在25℃、黑暗条件下共培养2天(共培养基表面加一层无菌滤纸),在含有卡那霉素为55mg.L-1的抗性筛选培养基上筛选30天,抗性愈伤组织率为90%,经PCR检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹愈伤组织中。抗性愈伤组织在芽诱导培养基上诱导30天,可获得丛生芽,待丛生芽长至3～5cm后,在生根培养基上经过20～30天的诱导,可产生1～8条根,获得再生植株。经PCR检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹再生植株中,获得了转基因植株,转化效率为9%。RT-PCR检测结果表明,转4CL基因的梁山慈竹愈伤组织和植株的内源4CL基因的表达受到抑制,且表达量比对照明显降低。     

农杆菌介导的山苍子遗传转化体系的构建

目的 筛选适合山苍子愈伤组织分化的激素比例,研究其对抗生素的耐受性,构建山苍子遗传转化体系。 方法 以山苍子无菌苗茎段诱导的愈伤组织为试验材料,研究不同激素浓度配比对山苍子愈伤组织诱导不定芽及不定芽生根的影响,探讨愈伤组织对潮霉素和头孢霉素的临界筛选浓度,并通过农杆菌介导法将外源基因导入山苍子愈伤组织中。 结果 筛选出诱导愈伤组织不定芽分化培养基为：MS + 2.0 mg·L−1 6-BA + 0.01 mg·L−1 IBA + 0.05 mg·L−1 TDZ,分化率为16.67%～36.67%;不定芽生根培养基为1/2MS + 0.5 mg·L−1 IAA,生根率为97.33%。遗传转化初期筛选抗性愈伤组织的潮霉素浓度为5 mg·L−1（约7～10 d）,通过逐步增加潮霉素浓度至30 mg·L−1进行筛选培养,头孢霉素最适浓度为300 mg·L−1。采用农杆菌介导法将外源基因转入愈伤组织中,并设计PCR引物进行鉴定,共检测16株抗性苗均含有目的条带,表明目的基因已插入山苍子基因组中,转化率为0.67%。通过Southern检测表明,目的片段已插入山苍子愈伤组织中。 结论 初步建立山苍子再生及遗传转化体系,且已获得多个基因的抗性愈伤组织,为进一步开展基因功能研究及遗传改良提供技术支持。     

麻竹制备竹基纤维复合材料的性能初探

为了探索利用麻竹制备竹基纤维复合材料的性能,首先利用纤维可控分离技术将麻竹制备成纤维化竹单板,经过浸胶干燥后,采用热压法制备竹基纤维复合材料,并探讨密度对其耐水性能和力学性能的影响。结果表明,采用热压法制备的竹基纤维复合材料的性能较优,已超过重组竹地板标准规定的室外用地板的指标值。随着密度的增加(0.90~1.15g/cm~3),麻竹竹基纤维复合材料的耐水性能得到改善,其静曲强度、弹性模量和水平剪切强度等主要力学性能增强。在应用中可以考虑在保证板材使用性能的前提下,尽量降低竹基纤维复合材料的密度以节约成本。     

麻竹苗圃的建立及生产技术

麻竹繁殖方法的对比试验和生产示范表明,新建苗圃可采用分蔸、带蔸埋杆、主茎杆扦插等方法进行。苗圃建成后宜采用分株留蔸方法进行繁殖。提高繁殖效果的技术关键是:选择适宜的苗圃场地和繁殖材料;有效的种苗处理和水肥管理;合理控制母株密度和起苗方法;适时防治虫害。     

国槐离体再生及抗虫基因sck的转导

以国槐叶片作为外植体,筛选出诱导不定芽分化的最佳培养基;利用根癌农杆菌介导法将经过修饰的广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck(Signal-CpTI-KDEL)导入国槐.国槐叶片与农杆菌共培养结束后,转移至筛选培养基MS BA 3 mg·L-1 IAA 0.05mg·L-1 G418 8 mg·L-1 Cef 500mg·L-1上.不定芽在培养基1/2MS IBA 1.0 mg·L-1 G418 10 mg·L-1 Cef 100 mg·L-1上进一步培养获得完整再生植株.通过PCR和Southern blotting检测证明,修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck已成功导入国槐细胞.     

麻竹笋用林高效培育的密度与施肥效应研究

以麻竹笋用林高效培育为目标,在丛立竹密度和施肥对竹笋经济性状影响的试验基础上,构建丛立竹密度和施肥的优化模式,结果表明:在试验设计范围内,丛立竹密度与竹笋产量呈抛物线型关系,与丛出笋数遵循线性增长趋势,但当丛立竹密度9株及以上时,笋个体质量和竹笋产量显著下降;施肥的竹笋增产效果主要来源于笋个体质量增大和不规格笋比例下降,对丛出笋总数无显著影响,对丛经济出笋数有显著影响。施有机复合肥竹笋产量随施肥量增加而增加,尿素则随施肥量增加出现先增产后减产现象,产生“氮饱和”效应;当丛立竹胸径5~6 cm时,施用试验有机复合肥,麻竹笋用林丰产栽培最佳组合为丛立竹密度5~7株,丛施肥量10~12 kg。     

Regeneration and gene transformation systems of Robinia pseudoacacia ''Idaho'' mediated by Agrobacterium tumefaciens

Robinia pseudoacacia 'Idaho' is one of several multi-purpose trees used in ornamental, soil and water conservation, fodder and nectar sources. Plant abiotic stress tolerance transformed by genes could meet the requirements for reclamation of arid or alkalid lands and vegetation restoration. For this paper, we studied the effects of auxin and cytokine on Idaho locust in vitro regeneration and the establishment of gene transformation systems for plants mediated by Agrobacterium tumefaciens. Results showed that the ratios of cytokinin and auxin were the major factors affecting adventitious bud differentiation on a MS medium; the concentration of 0.5inhibit rooting. The most effective antitoxin for screening transgenic Idaho locust shoots was G418 and the most sensitive concentration of it was 8 mg·L-1.     

Optimization of the uidA Gene Transfer of Rosa hybrida via Agrobacterium tumefaciens: an Assessment of Factors Influencing the Efficiency of Gene Transfer

To develop a transformation protocol of Rosa hybrida ‘Samantha‘ via Agrobacterium tumefaciens, the authors examined the effect of different factors on T-DNA transfer by measuring transient expression levels of an intron-containing β-glucuronidase gene. The results indicate that explant, light condition, salt concentration and acetosyringone (AS) concentration in co-culture medium are the most important factors, and factors like co-culture temperature, co-culture period and bacteria density have a strong effect on the growth of bacteria and then T-DNA transfer. Optimized co-cultivation was performed by inoculation of embryogenic callus with bacteria at a density of OD600=0.5-0.8 for 20 min and co-culture in darkness under 23 ℃ on medium with 1/2 MS salts and 300 μmol-L 1 AS for 3 d.     

竹地板防霉效果检验及评价方法探讨

在温度为28、30℃,相对湿度为80%、90%、95%以上的环境下,分别使用球毛壳、黄曲霉、桔青霉、黑曲霉4种霉菌对竹地板进行28d霉变试验。试验结果表明:在温度28℃、湿度90%以上时霉变效果较为明显。建议采用该温湿度作为竹地板防霉效果的检测条件;检测时间以15~18d为最佳;同时可根据霉斑覆盖率的频次划分0~4级5个霉变等级作为评价标准。     

氨化竹笋加工下脚料饲用价值研究

竹笋加工下脚料经过氨化，具有竹笋味和酸味混合而成特殊的香味，质地松散柔软。晒干后，易于粉碎，可改善粗饲料的适口性。在竹笋加工下脚料中均匀混入尿素等含氮化合物，经水解或尿脲酶的作用下分解产生氨。细菌以氨为氮源，利用各种物质各种物质合成氨基酸，进而合成细菌蛋白。根据试验结果：采用尿素氨化，可明显提高粗蛋白的含量，提高家畜必需的氨基酸成份含量，增加氨基酸的总量。通过与其他粗饲料进行成份、价格对比，进一步分析其开发价值。