斯氏艾美耳球虫致病性研究

为了深入研究斯氏艾美耳球虫的致病性,通过给幼兔人工感染不同数量的斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,对其发病后的急性临床症状及病理变化进行观察与分析。将幼兔分为4组,空白对照组和3个试验组。除空白对照组外,3个试验组家兔分别经口感染斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊2×105个/只、1×105个/只、0.5×105个/只。结果表明,在感染后第8天,3个试验组和空白对照组家兔的每克粪便卵囊数(OPG)分别为2.19×107、2×107、1×107和0,相对增重率分别为38.9%、58.0%、73.3%和100%。表明斯氏艾美耳球虫对幼兔有很强的致病性。     

斯氏艾美耳球虫细胞化学的研究

本文用组织化学技术对斯氏艾美耳球虫内生阶段和子孢子的细胞化学进行了研究。结果发现,多糖存在于第二代裂殖体、大配子体、大配子、合子、未孢子化卵囊和子孢子内。脂肪存在于第二代A型裂殖体、大配子、合子、未孢子化卵囊及子孢子内。整个内生发育阶段的虫体和子孢子均含有蛋白质。两型裂殖体、大、小配子体、合子和子孢子内均有Feugan反应阳性的DNA存在,而RNA存在于整个内生阶段和子孢子中。内生阶段虫体和子孢子均有ACP和SDH,然而ALP只存在于内生阶段,子孢子缺乏。     

斯氏艾美耳球虫四川株生物学特性研究

为了解斯氏艾美耳球虫四川株致病性、免疫原性等生物学特性,为后续免疫和防控等研究提供参考.将45只36日龄幼兔随机分为9组,第1组为空白对照组,第2组～第5组为致病性试验组,于50日龄每只兔分别经口感染1×104、5×104、1×105、2×105个孢子化卵囊;第6组～第9组为免疫原性试验组,于36日龄每只兔分别口服接种...     

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所，２００２３２）鸡感染球虫后会产生一种抵抗再次感染的免疫反应，这种免疫反应具有种的特异性，即感染某种球虫不能保护抵抗另...     

柔嫩艾美耳球虫纯种的初步确定和致病性研究

从上海郊县鸡场采集粪便,分离球虫。经实验室繁殖和采用单卵囊感染技术,获得了一个纯种球虫。该种球虫寄生于盲肠,轻度感染,在肠的浆膜面可见针尖状出血点;严重感染,则盲肠极度肿大,肠壁布满出血点和白色小结节,随后肠管内形成较硬的干酪样肠芯,镜检可见大量卵囊。卵囊呈宽卵圆形和卵圆形,经测200个卵囊,其大小范围为17.5～30.0×12.5～25.0微米,平均为21.81±2.18×17.79±1.93微米,形状指数1.23。卵囊内有1个折光性极粒,无外残体,孢子囊有斯氏体,无内残体。测120个孢子囊,其大小范围为10.0～13.0×5.0～7.5微米,平均11.49±0.91×6.35±0.76微米。未观察到卵膜孔和极帽。最短孢子化时间为18小时,潜伏期141小时,最大裂殖体56.25微米。感染后4天半,粪便开始带血,5天到5天半,出血达高峰,并出现死亡。对照国内外文献,初步确定为柔嫩艾美耳球虫[Eimeria tenella(Railliet和Lucet,1891)Fantham,1909]。用此卵囊对鸡作致病性试验,挑选60羽体况相近的13日龄伊莎公鸡,分为5组,1个不感染组,4个感染组每羽感染剂量分别为1万、5万、10万和20万个孢子化卵囊。感染后一周结束试验,以平均增重、死亡率和盲肠病变记分作试验指标。结果为所有感染组与不感染组的平均增重差异达到显著(p<0.05)和极显著(p<0.01)水平,各感染组间1～10万组与20万组和1万组与10万组的增重差异达极显著;各感染组的死亡率分别为8.33％、33.33％、50％和75％;盲肠病变记分1万组为2.25,5～20万组为3.08～3.92。柔嫩艾美耳球虫的致病性很强,鸡一旦感染,其增重会受到影响,严重感染则造成大量死亡。     

斯氏艾美耳球虫阿拉尔株致病性和免疫原性分析

对分离自阿拉尔的1株斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai)进行了致病性与免疫原性分析。试验共分5组,4个试验组每只兔分别口服感染1.0×103,5.0×103,5.0×104和1.5×105个孢子化卵囊;感染后14 d对1.0×103和5.0×103剂量组的剩余兔以2.5×105个孢子化卵囊攻毒,用0～5分肝脏平均病变记分、肝重指数和每克粪便的平均虫卵数(OPG)测定致病性及其免疫原性。结果显示:低剂量感染可引起轻微病变,5.0×104个孢子化卵囊感染即可表现出明显的致病作用,但免疫原性试验表明其免疫原性较弱。     

斯氏艾美耳球虫裂殖生殖的多态现象

迄今描述的艾美耳科和住肉孢子虫科球虫的裂殖生殖为单态，作者发现斯氏艾美耳球虫的裂殖生殖具多态性，其方式有：子孢子型裂殖体以内单多生殖方式产生下代裂殖子；双或多核的裂殖子型裂殖体或以内二多生殖方式或以外单多生殖方式产生下代裂殖子；单核裂殖子型裂殖体以外多生生列殖方式下代裂殖子；经典型裂殖体以内单多和外单多混生方式产生下代裂殖子。这种裂殖体以多态的方式产生下代裂殖子的现象称为裂殖生殖的多态现象。依据前     

斯氏艾美耳球虫病的研究进展

斯氏艾美耳球虫（E．stiedai）是寄生在肝脏胆管上皮细胞内的一种危害较大、致病性较强的兔球虫,最初由Leeuwenhoek（1674年）等发现,但是直到1859年才由Lindermannt将其正式命名为球虫。斯氏艾美耳球虫病在国内平均感染率为22％,死亡率80％左右,给我国养兔业造成巨大的经济损失。     

巨型艾美耳球虫纯种鉴定和致病性研究

采用单卵囊感染技术，从鸡球虫混合种中分离出一个纯种球虫，经鉴定为巨型艾美耳球虫（ＥｉｍｅｒｉａＭａｘｉｍａＴｙｚｚｅｒ，１９２９）。该种球虫卵囊为卵圆形，测２４０个的大小范围为２１．２５～３６．２５×１７．５～３０．０μｍ，平均为２８．８１±３．０７×２２．９８±２．７７μｍ，形状指数１．２５。卵囊内有一颗折光性极粒，位于窄端，无外残体。测１２０个孢子囊的大小范围为１５．５～１８．５×７．５～１０．０μｍ，平均为１７．３５±０．６６×８．７４±０．５１μｍ。最短孢子化时间为３０小时，潜伏期１４２小时。用此卵囊对鸡作致病性试验，挑选６０羽１３日龄伊莎（ＩＳＡ）公鸡分为１个不感染组和４个感染组，每羽口服感染１万、５万、１０万或２０万个孢子化卵囊。结果所有感染组与不感染组的平均增重差异达到显著（Ｐ＜０．０５）或极显著（Ｐ＜０．０１）水平，整个试验仅在２０万个的感染组出现１６．７％的死亡率，各感染组的肠道病变记分分别为１．３３、１．８３、２．４２和３．０８。     

和缓艾美耳球虫致病性研究

对新分离的和缓艾美耳球虫进行了致病性研究.结果表明,21日龄雏鸡感染1000个和5000个孢子化卵囊未见异常表现,肠道未发现肉眼可见的病理变化.20 000个卵囊感染可引起轻微病变,100 000个和500 000个卵囊感染能产生较明显的致病作用,与对照组相比增重分别为70.3%和56.8%.根据肠道病变记分标准,肠道有明显可见的病变,所有试验鸡均未出现死亡.     

斯氏艾美耳球虫ADF基因部分序列的克隆与分析

为了获得我国斯氏艾美耳球虫长春株ADF基因并分析其与柔嫩艾美耳球虫长春株相应序列的同源性,试验根据GenBank中公布的柔嫩艾美耳球虫ADF基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得我国斯氏艾美耳球虫长春株ADF基因部分序列,然后将其克隆到pMD18-T载体中,应用DNAStar软件对测得序列进行序列分析。结果表明:斯氏艾美耳球虫长春株ADF基因大小为357 bp;经DNAStar分析,我国斯氏艾美耳球虫长春株与柔嫩艾美耳球虫长春株ADF核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为99.2%。说明ADF基因在进化过程中高度保守。     

三株柔嫩艾美球虫野外分离株的致病性分析

用每鸡4×104和8×104个孢子化卵囊的剂量感染黄羽肉雏,以临床症状、肉眼病变、平均增重、病变记分和死亡率为判定指标,对柔嫩艾美球虫EtCZ-1、EtCZ-2、EtCZ-3株的致病性进行了比较分析。结果显示:各虫株引起的临床症状和肠道肉眼病变基本相似,致病性随着感染剂量的增加而增强。各感染组的增重与对照组相比均有显著差异(P<0.50),相对增重率分别下降了74.4%～83.2%、68.7%～72.2%和70.6%～74.4%;感染后鸡出现血便的时间较一致,即第108小时开始排血便,在120h～144h达高峰;病变值和卵囊值均随着感染剂量的增加而增大;除EtCZ-1株高剂量组的存活率是90%以外,其余各组均为100%。显示3株球虫的致病性相似。     

堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)早熟株与毒株的繁殖力和致病性比较试验

对经15代选育的堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)北京株的早熟株与其毒株的繁殖力和致病性进行了比较研究，证实早熟株的潜隐期比毒株缩短27h，繁殖力有所下降；对致病性的研究显示，早熟株感染后对鸡只增重的影响较小，而且肠道病变记分亦较毒株下降。由此认为，该早熟株符合球虫早熟株的基本生物学特性，适宜用于鸡球虫病早熟苗的制作。     

布氏艾美耳球虫保定株的鉴定及致病性研究

本研究采用琼脂薄膜球虫单卵囊分离技术,从河北省保定市暴发球虫病的某鸡场鸡粪便中成功分离出布氏艾美耳球虫卵囊。生物学特性研究结果表明,该虫种潜隐期为125 h,卵囊大小为26.1 μm×21.3 μm,形状指数为1.22,寄生与病变部位主要在小肠后段、直肠和泄殖腔,特征性病变是肠黏膜层有出血斑纹及血性内容物。感染一定剂量该球虫,鸡的生产性能受到影响,当感染剂量为2×10⁵个/羽时会出现鸡死亡,表明该虫株具有较强致病性;应用特异PCR方法对获得的卵囊进行分子鉴定,结果确认所分离和纯化的球虫卵囊为布氏艾美耳球虫纯种,并将该虫株命名为布氏艾美耳球虫保定株--BBD株。     

变位艾美耳球虫纯种的初步确定和致病性研究

从上海郊县鸡场采集粪便分离球虫，经实验室繁殖和采用单卵囊感染技术，获得了纯种变位艾美耳球虫（ＥｉｍｅｒｉａｍｉｖａｔｉＥｄｇａｒ和Ｓｅｉｂｏｌｄ，１９６４）。该种球虫卵囊较小，主要呈宽卵圆形和椭圆形，经对２００个卵受测量，平均为１５．２４±１．７９×１２．４１±１．０７微米，形状指数为１．２３。卵囊内有１～３个折光性颗粒，多数卵囊为１个，靠近卵囊窄端，少数卵囊内有一个呈颗粒状的外残体。孢子囊有斯氏体和内残体，测１２０个孢子囊，其大小平均为９．５４±０．６１×５．２２±０．４０微米。卵膜内层在印囊窄端处形成一孔状结构，未见极帽。最短孢子化时间为１２小时，潜伏期９２小时，最大裂殖体１８．７５微米。用此卵囊对鸡作致病性试验，４个感染组每只鸡分别感染１万、５万、１０万和２０万个孢子化卵囊。感染一周后结束试验，结果为感染５万、１０万、２０万组与不感染组和感染１０万、２０万组与感染１万组的平均增重差异达极显著（Ｐ＜０．０１），各组均无死亡，感染组的肠道病变记分为０．７５、１．５０、２．５０和２．６７。     

堆型艾美耳球虫早熟株与强毒株致病性和繁殖力的比较

为了比较堆型艾美耳球虫（E．acervulina）早熟株与强毒株的致病性和繁殖力情况,通过测定接种 E．acervulina 早熟株与强毒株后鸡只的精神状态、临床症状、增重、病变记分和卵囊产量,表明早熟株的排卵囊高峰出现在第5天,比强毒株提前1 d,早熟株的繁殖力是强毒株的85．8％;早熟株感染后对鸡只增重的影响较小,接种剂量在2．40×104个卵囊／羽之内时,相对增重率均大于90．0％,早熟株组鸡的肠道病变记分显著低于同剂量的强毒株组的肠道病变记分（P ＜0．05）。由此认为,该早熟株符合球虫早熟株的低致病性特性,可用于鸡球虫病早熟苗的制备。     

陕西省杨凌区柔嫩艾美耳球虫早熟株选育及致病性研究

采用球虫早熟系虫株选育的方法,反复收集感染后最先排出的卵囊,选育出杨凌地区鸡柔嫩艾美耳球虫早熟株并对早熟株的潜伏期、致病性及繁殖能力进行了研究。结果表明,经18代选育的鸡柔嫩艾美耳球虫杨凌早熟株的潜伏期比母株缩短了24h;早熟株卵囊的形态与母株相似,但没有母株卵囊的大;早熟株的繁殖能力低于母株,每羽鸡所排卵囊总量与剂量呈正相关,而每个卵囊的繁殖能力与剂量呈负相关;早熟株的致病性低于母株。     

斯氏艾美耳球虫ITS1-5.8S rRNA-ITS2序列的克隆及PCR检测方法的建立

通过对多种鸡球虫和松鼠球虫18SrRNA和28SrRNA进行序列比对分析,在18SrRNA 3′端和28SrRNA 5′端保守区设计艾美耳属通用引物,以斯氏艾美耳球虫洛阳分离株LY卵囊基因组DNA为模板首次成功克隆到斯氏艾美耳球虫完整的ITS1-5.8SrRNA-ITS2序列,其大小为1 178bp,其中ITS1序列长度为423bp,5.8SrRNA为155bp,ITS2为600bp,斯氏艾美耳球虫LY株ITS1/2序列高度变异,与鸡球虫、啮齿动物球虫的序列相似性低于60%。然后在斯氏艾美耳球虫ITS1/2序列超变区设计种特异引物,建立了灵敏、特异的PCR检测方法。本研究结果将为兔球虫强致病种的临床诊断和揭示兔球虫种群遗传特征提供有效的分子工具。     

表达黄色荧光蛋白和乙胺嘧啶抗性基因的转基因柔嫩艾美耳球虫的发育和致病性分析

为了研究外源基因表达对转基因柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)生物学特性的影响,对转基因球虫(TE1)和BJ株(野生强毒)的发育和致病性进行比较分析.结果显示,相对于BJ株,转基因球虫TE1株繁殖力下降约4倍,低剂量感染时致病性下降明显,但是高剂量感染时依然保持较强的致病性.另外,在荧光显微镜下发现,TE1有滋养体、第一代裂殖体/裂殖子、第二代裂殖体/裂殖子和大小配子体等内生发育虫体.孢子化卵囊内4个孢子囊并非全部表达黄色荧光蛋白.这些结果说明黄色荧光蛋白和乙胺嘧啶抗性基因的表达在一定程度上降低了转基因柔嫩艾美耳球虫致病性和繁殖力.在柔嫩艾美耳球虫合子减数分裂过程中,存在同源或异源染色体重组现象.     

柔嫩艾美耳球虫对藏鸡和隐性白羽鸡致病性差异分析

为进一步明确柔嫩艾美耳球虫对球虫易感性差异鸡种的致病性,本研究以1×10⁵个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的剂量分别感染对球虫具有抗性的藏鸡和易感的隐性白羽鸡,接种后观察记录各组鸡的临床表征、血便记分、死亡率、增重、盲肠病变记分、卵囊产量,并于感染前和感染后3、6和8 d每个品种分别随机选择5只鸡采集抗凝血,应用流式细胞仪（FCAS）检测外周血CD4⁺T和CD8⁺T淋巴细胞亚群数量。结果显示,柔嫩艾美耳球虫感染后藏鸡相对增重率高于隐性白羽鸡,死亡率、血便记分和盲肠病变记分均低于隐性白羽鸡,但卵囊产量高于隐性白羽鸡。外周血T淋巴细胞亚群变化方面,感染前,藏鸡CD4⁺T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值均高于隐性白羽鸡。感染后第3天,藏鸡CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值下降,隐性白羽鸡CD8⁺ T淋巴细胞数略有下降,CD4⁺T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值上升,但CD4⁺/CD8⁺比值仍显著低于藏鸡（P<0.05）。感染后第6天,2个品种鸡CD4⁺ T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值均下降,其中藏鸡表现为显著下降（P<0.05）,而隐性白羽鸡仅CD4⁺/CD8⁺比值显著降低（P<0.05）,隐性白羽鸡CD8⁺ T淋巴细胞数显著升高（P<0.05）。感染后第8天,2个品种鸡CD4⁺/CD8⁺比值显著下降（P<0.05）,藏鸡CD8⁺ T淋巴细胞数显著高于隐性白羽鸡（P<0.05）,但CD4⁺/CD8⁺比值显著低于隐性白羽鸡（P<0.05）。结果表明,球虫对藏鸡和隐性白羽鸡的致病性存在差异,这种差异与T淋巴细胞介导的免疫应答反应密切相关。