哺乳动物精子冷冻工艺中防冻剂的研究进展

精子冷冻是一种简单、经济、高效的生物遗传资源保存方法,目前已经应用到许多领域,并成为治疗人类不育、牲畜繁殖和生物资源多样性保护的重要手段。在精子冷冻保存过程中的适当阶段加入防冻剂,能够有效的避免或减少精子的冷冻损伤和寒害,从而提高冷冻—解冻精子的活力。作者就防冻剂的种类、防冻剂的选择及加入与去除的方式对冷冻—解冻哺乳动物精子活力的影响作一简要综述。     

双优解冻液

双优解冻液是牛羊冷冻精子的良好复苏剂,其解冻质量的各项指标均比其它解冻液高。我们用2.9％的柠檬酸钠、维生素B_(12)注射液和双优解冻液分别对牛羊颗粒冷冻精作了解冻效果比较,并用解冻精液对内蒙古乌盟冷冻站的奶牛进行了输精试验。结果,双优解冻液解冻的精液比用上述二种溶液解冻的精液精子活力提高26.4％(20％～     

影响波尔山羊冷冻精液受胎率的原因及对策

一、影响波尔山羊受 胎率的原因 波尔山羊冷冻精液受 胎率低，仅有４０％－６０％， 经过几年的生产实践，我 们认为影响波尔山羊受胎 率最主要的因素有以下两 点： １．解冻过程，造成精 子质量下降。各地使用的 波尔山羊冷冻精液解冻后 活力一般在０．３５以上从精子本身因素考虑，冷冻和解冻会引起精子受精能力下降。研究表明，精子冷冻、解冻会引起精子细胞结构发生改变，使精子顶体异常变化是冷冻精液受胎率下降的主要原因。 ２．人工输精技术不规范。主要表现为，输精时间、部位把握不好，器械使用方法不当和解冻方法不正确等。 二、…     

水苏糖对猪精液冷冻保存效果的影响

为了提高猪精液冷冻保存效果．试验采用在传统的ZO稀释液基础上分别添加1％、2％、4％、8％的水苏糖的方法．研究不同浓度水苏糖对猪精液冷冻后精子质量的影响。结果表明,水苏糖相对于ZO稀释液能够显著改善和提高猪精液的冷冻效果,其最佳添加浓度为4％,冷冻一解冻后猪精子活力、活率、质膜完整性以及顶体完整率均显著提高,水苏糖可以明显抑制精子获能,获能处理前精子获能率仅为32．4％,而获能处理后降为28．6％。有利于抑制精子获能,精液稀释液中甘油的适宜添加浓度为3％,说明水苏糖与甘油共同作用能在冷冻一解冻过程更加有效地保护精子。     

提高牛冷冻精液配种受胎率的措施

1.解冻要迅速 牛的冷冻精液是在-196℃条件下以冻结形式长期保存的精液,在解冻过程中要通过危险的-40～-20℃的温度区域,解冻时间越短精子的死亡数就越少。因此,应进行快速溶解,时间不应超过15秒钟,解冻后精子活力要求达30％以上。 2.把握好输精时机 由于冷冻精液精子是经低温处理的,所以解冻后生命力较弱。而母牛排     

冷冻保存对和田羊精液品质的影响

对和田羊精液进行冷冻保存,以比较冷冻对和田羊精子获能、质膜完整性和顶体完整率的影响。结果表明：①冷冻保存对绵羊精子获能有一定的影响,解冻精子的获能比新鲜精子的获能数量显著增多（P〈O．05）。解冻过程使得显示获能的B型精子的数量显著增加（P〈0．05）。②冷冻使精子质膜破损,致使解冻精子无论是在质膜完整性还是在顸体完整率上都与新鲜精子存在较大差异,说明冷冻过程对精子膜结构造成了严重损伤。     

不同解冻方案对牛冷冻精液质量的影响

解冻是冷冻精子复苏的关键步骤,解冻方案的选择则是冷冻精子复苏的关键点。为筛选出适合目前我国规模化牧场冷冻精液的解冻方案,本研究分别采用6种解冻方案对冷冻精液进行解冻并观察其解冻活率。结果表明,随着解冻温度的升高和解冻时间的缩短,精子活率呈上升趋势,并且当解冻温度达到40℃,解冻时间为20s时,冷冻精子解冻后的活率达到最高。关于6种解冻方案对精液存活时间的影响研究结果表明,当采用38~39℃解冻30s方案时,精子存活6h的活率最好。     

解冻温度对精子活力的影响

[目的]为了获得较为理想的解冻效果.[方法]采用不同温度,不同解冻时间,通过镜检解冻后活力的方法.[结果]发现:不同解冻温度对牛冷冻精子复苏的影响,用39.5℃温水解冻30 s精子的活力最高,冷冻精液解冻后精子活力达O.53.用40.O℃温水解冻10s、39.0℃温水解冻30 s精子的活力也较高,冷冻精液解冻后精子活力...     

牛精子冷冻损伤研究进展

人工授精技术是目前通过冷冻精液进行牛遗传改良而应用最为广泛的生物技术。虽然如此,由于精液产品的质量而导致人工授精的遗传影响被限制,在精液的冷冻－解冻过程中40%~50%的活精子失去完整性或功能受到损伤。作者在参阅国内外相关文献的基础上,通过阐述冷冻－解冻对精子细胞的损伤作用及机理、精浆对牛冷冻精液质量的影响、冷冻－解冻过程中精子的过氧化损伤,以及冷冻－解冻后精子相关基因与蛋白质的变化等,以期为牛高质量冷冻精液的研究提供一定参考,进一步提升冷冻精液质量。     

肌醇类冰晶抑制剂和海藻糖对山羊精子冷冻保存效果的影响

为进一步降低冷冻解冻过程对山羊精子的理化损伤,本试验系统检验了肌醇类冰晶抑制剂(SIB)和海藻糖对山羊精子的冷冻保护效果。采用假阴道法采集6只云南黑山羊精液,离心洗涤去除精浆后和冷冻稀释液混合,经4℃平衡、液氮气相预冻后直接投入液氮保存。解冻后检测精子活力、顶体、质膜以及低渗耐受性。同时采用透射电镜(TEM)观察冷冻对精子超微结构的影响。结果表明:1,4-环己二醇(1,4-CHD)和海藻糖处理组精子活力(41.35%±8.14%和43.59%±6.23%)、顶体完整性(62.73%±7.62%和64.29%±7.81%)和低渗耐受性(40.29%±7.41%和39.79%±6.58%)均显著高于对照组(35.97%±6.21%、55.46%±8.91%和34.17%±5.68%,P0.05),且海藻糖可以有效抑制冷冻解冻过程导致的精子凋亡。流式分析结果表明,1,4-CHD不能降低冷冻对山羊精子质膜完整性和磷脂酰丝氨酸(PS)分布的损伤,但是海藻糖可以显著降低冷冻解冻过程中对山羊精子质膜的损伤。电镜结果表明,冷冻对精子质膜和顶体等结构损伤严重,解冻后部分精子质膜发生肿胀、脱落或断裂等现象。而且,顶体外膜存在脱落现象,顶体内容物发生部分甚至完全泄漏。电镜结果进一步证实海藻糖对冷冻精子质膜的保护效果要优于1,4-环己二醇。总之,肌醇类SIB和海藻糖可以降低山羊精子的冷冻损伤,但相对于海藻糖而言,肌醇类SIB并不能降低冷冻对山羊精子质膜的损伤。     

金华猪精液冷冻保存技术研究

本试验用0.5 mL细管作为冷冻载体对金华猪精液进行冷冻保存研究,比较3种冷冻稀释液及不同冷冻方法、解冻程序对金华猪精液冷冻的效果,以解冻后的精子活力、畸形率和质膜完整率为判定指标。结果表明:Ⅱ、Ⅲ号冷冻稀释液处理组解冻后精子的活力、畸形率和质膜完整性都明显地高于Ⅰ号冷冻稀释液(P0.05);Ⅱ号冷冻稀释液和Ⅲ号冷冻稀释液处理组之间没有明显差异(P0.05)。采用程序冷冻仪冷冻法,使用Ⅲ号冷冻稀释液冷冻保存精子,并在60℃,8 s条件下水浴解冻精子后,精子活力和质膜完整率最高分别为42.3%和50.3%,畸形率最低为17.7%。因此,采用程序冷冻仪冷冻法,使用Ⅲ号冷冻稀释液,在60℃,8 s条件下水浴解冻方法较为适合0.5 mL细管金华猪精液冷冻保存及解冻。     

牛精液冷冻保护剂研究进展

牛的人工授精技术是目前应用最为广泛的动物繁殖技术之一,对牛的遗传改良做出了巨大贡献。但是,在冷冻一解冻过程中仍然有大约40％～50％的精子失去活性,限制良种公牛种用性能的发挥。论文在分析精子冷冻保存原理的基础上,阐述了渗透性、非渗透性冷冻保护剂以及低密度脂蛋白对牛精子的冷冻保护作用,以期为开发新型冷冻保护剂的研究提供一定参考,进一步提升牛冷冻精液的质量。     

精浆对猪精子冷冻效果影响的研究

为优化猪精子冷冻技术,提高解冻后精子的活力和受精能力,本试验分别以含精浆浓度为10%、20%和30%的冷冻保护剂处理精子,以冷冻前、解冻后精子活力和质膜完整性,解冻后精子进行体外受精(IVF)的卵裂率和囊胚率等作为检测指标,同时以含有卵黄的Tris-柠檬酸－葡萄糖(Tris-citric acid-glucose,TCG)冷冻基础液作为对照研究精浆对猪冷冻精子的保护作用。结果显示,在含有10%精浆浓度的稀释液中,冷冻前质膜完整性,解冻后精子活率、质膜完整性、IVF囊胚率相对于对照组均显著提高(P<0.05);当含有10%精浆的冷冻精液解冻后用于人工授精时,与配母猪妊娠率、窝产仔数、窝产活仔数等仍显著低于鲜精授精组(P<0.05)。上述结果表明,含10%精浆的冷冻保护剂能提高精子的冷冻后活力和IVF胚胎发育率,但用于人工授精配种与鲜精相比还有一定差距。     

解冻温度和保存时间对牛细管冻精精子活率的影响

本试验采用4组解冻温度,每组解冻温度设计了2个不同的解冻时间,观察不同解冻温度、解冻时间及解冻后常温保存时间对牛细管冷冻精液精子活率的影响。结果显示,4组解冻温度以80℃（3s）精子活率最高,为48．77％,20组（2（80s）精子活率最低,为30．02％,两者差异极显著（P〈0．01）。各组精液解冻后保存1h检查精子活率明显高于解冻时镜检活率（P〈0．05）,80℃解冻后间隔5h精子活率仍达到30％。     

公牛精液的保存制度

作者用黑白花和西门塔尔品种公牛进行试验,研究精液冷冻过程中各种处理方法对解冻后精子(在38℃)的活力和存活力的影响。用乳糖—甘油—卵黄培养液稀释精液,在液氮中预冷的氟塑料板上冷冻成容量为0.1毫升的颗粒(某几项专门的试验除外)。用热电偶测定氟板的温度。根据设计要求,每次射精都要分成几分进行试验。从表1可以看出随着稀释比例的增加,解冻后精子的活力和存活力都有提高。可能高倍稀释对精子的部分脱水和玻璃化造成最适宜的条件。试验中,甘油的最终浓度以2％为最好,(表2)。     

稀释液中添加维生素E对和田羊冷冻精液品质的影响

在和田羊精液冷冻稀释液中添加不同浓度的维生素E,比较其对和田羊冷冻精液品质的影响。结果表明：维生素E添加量为1．2mg／mL时精子解冻后活率（43．56％）显著高于对照组（34．14％）和其他各添加组（P〈0．05）;顶体完整率（51．39％）极显著高于对照组（40．12％）和其他各添加组（P〈0．01）。说明在冷冻精液稀释液中添加适当浓度维生素E可以减缓冷冻对精子的伤害,有效提高和田羊冷冻一解冻后精子活率,改善冷冻精液的品质。     

海藻糖对猪精液冷冻保存效果的影响

在传统的Tris-柠檬酸-葡萄糖稀释液基础上，分别添加25％、50％、75％、100％的海藻糖，研究不同浓度海藻糖对猪精液冷冻后精子质量的影响。结果表明，海藻糖相对于对照TCG稀释液能够显著改善和提高猪精液的冷冻效果，其最佳添加浓度为25％，冷冻-解冻后猪精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整性以及顶体完整率均显著提高（P〈0．05），分别达到41．38％、46．34％、44．56％、43．51％和64．09％。海藻糖可以明显抑制精子获能，获能处理前精子获能率仅为3．68％，而获能处理后达到41．82％，有利于促进精子获能。精液稀释液中甘油的适宜添加浓度为2％，海藻糖只有与甘油共同作用，才能在冷冻-解冻过程更加有效地保护精子。猪精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整率、顶体完整率等之间存在极显著的正相关关系（P〈0．01），而与获能处理前精子的获能率存在显著的负相关关系（P〈0．05）。     

冷冻公牛精液时省去平衡时间的好处

报告几个连续的试验。临冷冻前才加入含有甘油的稀释液,解冻后精子存活率较采用一个平衡时间的为高。初步冷却精液至2—4℃时采用3—4小时比采用1—2小时或5—6小时的解冻后精子存活率及存活时间均好。表列了结合精子蛋白质的胆固醇和硫氢基改变冷冻精液制造方法的关系的资料。用加甘油稀释液前初步冷却时间为三小     

肌醇类SIB对云南半细毛羊精液冷冻保护效果影响的研究

为了进一步降低冷冻过程中冰晶形成对云南半细毛羊精子的机械损伤,实验首次检验了肌醇类冰晶抑制剂(SIB)对绵羊精子的冷冻保护效果。采用的SIB是1,4-环己二醇(1,4-CHD)。电刺激采集精液后,经4℃平衡、液氮气相预冻后直接投入液氮保存。结果表明:1,4-CHD不能提高云南半细毛羊冷冻精子的活力,而且随着1,4-CHD浓度的增加,精子活力呈逐步下降趋势。此外,1,4-CHD也不能改善解冻后云南半细毛羊精子的顶体状态和质膜完整性。解冻后,当用等渗缓冲液稀释精子时,1,4-CHD冷冻组精子的质膜破损率明显高于不含1,4-CHD的对照组(P<0.05)。然而,SIB的存在可能有利于冷冻精子磷脂酰丝氨酸(PS)正常分布的维持。解冻后,1,4-CHD冷冻组精子的PS标记率明显低于对照组(P<0.01)。当分别采用渗透压为404 mOsm,528 mOsm,648mOsm或853mOsm的缓冲液去稀释解冻后的精子时,就移动速度和质膜完整性指标而言,4个处理组之间差异不显著(P>0.05)。总之,肌醇类SIB并不能改善云南半细毛羊冷冻精子的活力、移动速度、顶体以及质膜完整性等指标。然而1,4-CHD可能抑制冷冻解冻过程引起的细胞早期凋亡。     

水牛精液细管冷冻试验

对水牛细管冷冻精液的稀释液、平衡时间、始冻温度、冷冻时间、降温速度、解冻温度和时间以及输精等进行了试验。结果表明,水牛细管冷冻精液解冻后精子活率为0.4～0.6,输精196头的情期受胎牛为63.3％。