水稻愈伤组织生活力和寿命的研究（Ⅰ报）

水稻单细胞无性系的培养体系已经建立起来,并开始进行人工种子的研究,利用水稻原生质体也业已再生出植株。由水稻单细肥或原生质体培养诱导成植株,其中最主要的途径是经过由愈伤组织的悬浮振荡培养,游离出单细胞或由愈伤组织由用酶解离出原生质体。在这一过程中,所获得的单细胞必须是具有较强生活力和分化能力的胚性细胞。所以,愈伤组织的生活力和寿命是单细胞或原生质体培养的重要基础。关于水稻愈伤组织的生活力和寿命,国内外研究的不多。我们沈阳农业大学农学系     

胡萝卜悬浮细胞系及高效再生系统的建立

以胡萝卜块根为材料诱导愈伤组织,并建立悬浮细胞系,然后将悬浮细胞和愈伤组织分别转入分化培养基进行分化培养。结果表明,胡萝卜块根形成层愈伤组织诱导率为100%,最佳激素种类和用量为2,4!D0.1mg/L;根据外观可将愈伤组织大致分为4种类型,I型是直接建立悬浮细胞系的良好来源,Ⅲ型经继代培养后可用于悬浮细胞系的建立;静止法是胡萝卜悬浮细胞系简单而有效的继代方法;胡萝卜愈伤组织分化的最佳培养基是MS或B5基本培养基,MS培养基上的再生苗可直接生根,而B5培养基上的再生苗在原培养基上很难生根,需要转移到MS培养基上才能生根。     

马铃薯悬浮细胞培养

本文报道了马铃薯悬浮细胞系的建立，包括愈伤组织的诱导、继代培养；单细胞的分离及细胞悬浮培养；细胞团和愈伤组织的再形成以及植株的再生。     

水稻香系103成熟胚培养及胚性悬浮细胞系的建立

[目的]为优质稻米种苗培育及种质资源保护提供参考。[方法]以曲阜香稻新品系103的成熟种子为材料,取其成熟胚接种在MS1培养基中诱导胚性愈伤组织,选取松脆性胚性愈伤组织建立悬浮细胞系。[结果]初始愈伤组织呈深黄色、瘤状、质地紧密、生长旺盛、易分化出芽,但难以进行细胞悬浮培养;在MS2培养基中继代培养120d后,愈伤组织呈浅黄色、颗粒状、松脆型胚性愈伤组织;松脆型胚性愈伤组织在悬浮培养基中继代培养2～3次后,不断释放出小细胞团和单细胞,用300目不锈钢网对培养液进行过滤,滤液培养120d可建立起浅黄色、澄清、均一的胚性悬浮细胞系。[结论]建立了分散性好、生长快的水稻胚性悬浮细胞系。     

枸杞髓部细胞悬浮培养及胚状体发生

应用枸杞髓部组织进行离体培养，建立细胞系，诱导胚状体发生。结果在含不同激素的４种ＭＳ培养基上都诱导出了愈伤组织，诱导频率在５６．７％￣９５．７％，其中以ＭＳ＋６ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３％培养基诱导出的愈伤组织颗粒小，分散性能好，此愈伤组织在２－３次继代培养后，转入液体培养基中进行振荡培养，２４ｈ后获得大量单细胞，经过多次继代培养，建立稳定的单细胞悬浮率。悬浮细胞在液体培养基     

栝楼细胞悬浮系的建立

[目的]为了解决栝楼悬浮细胞系在继代培养中容易退化,生长速度减慢的问题。[方法]以栝楼的茎为外植体诱导出愈伤组织,筛选出质地疏松、生长迅速、易于分散、可以长期进行继代培养的淡黄色半透明状愈伤组织系,将该愈伤组织接种在液体培养基中进行振荡悬浮培养,建立起分散程度好的栝楼悬浮细胞系。同时对影响愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养的条件进行研究,确定适合愈伤组织生长的条件及影响细胞悬浮培养的主要因素。[结果]看护培养可以使栝楼悬浮培养细胞长势良好,并在低密度下获得由单细胞形成的细胞系。[结论]该悬浮系的建立为栝楼细胞大规模培养,进而实现有效药物成分的工业化生产奠定了理论基础。     

水稻幼穗液体振荡培养获得愈伤组织及原生质体

在液体培养基中振荡培养水稻幼穗获得花药愈伤组织。花药愈伤组织开始在颖花内形成,增殖而撑开稃片,脱颖而出,浮游于培养基中成为悬浮细胞。根据大小区分愈伤组织和悬浮细胞,将小的愈伤组织转移到再分化培养基上培养,分化出许多绿点及二株绿苗。通常     

芥菜愈伤组织诱导及再生植株的分化

为加快芥菜品种选育的进程。以芥菜种子为外植体进行芥菜愈伤组织诱导及再生植株的分化培养试验。结果表明,诱导芥菜愈伤组织最适培养基为:MS NAA0.1mg/L 6-BA3mg/L,诱导出的愈伤组织数量最多,质量也最好;最适愈伤组织分化培养基为:MS NAA0.1mg/L 6-BA1mg/L,分化率达到100%,平均分化苗数为3.5株。     

水稻细胞悬浮系及其单细胞培养的研究

以水稻的不同遗传型材料的幼穗为外植体诱导愈伤组织,通过继代培养,最终筛选出了来自于品系“１４５”的胚性愈伤组织．在附加１．５～２．０ｍｇ／ｌ２,４—Ｄ的ＮＭＢ固体培养基上继代７次后,转入同种液体培养基上进行悬浮继代培养,由此形成的悬浮系是由单细胞和小细胞团组成的．倒置显微镜下几乎观察不到管形细胞,细胞的成活率达９０％以上．未发现酵母抽提物对细胞悬浮培养具有促进作用．在液体培养基中附加６００ｍｇ／ｌ的肌醇能够大大提高愈伤组织的分散程度,从中分离出的单细胞经初步培养再生了愈伤组织．     

多花黑麦草原生质体培养和再生白化苗

本文报道从多花黑麦单(Lolium multiflorum Lam.)原生质体培养获得愈伤组织并再生白化苗的试验结果。利用多花黑麦草幼穗在MS 3mg/L2.4-D的培养基上诱导出愈伤组织,并在MS 2mg/L2.4-D的液体培养基中振荡培养,产生悬浮细胞系。从悬浮细胞制备原生质体,用看护培养,琼脂糖固体平板培养和液体浅层培养均获得了再生细胞团。这些细胞团在MS 1mg/L2.4-D 60g/L蔗糖的培养基上形成愈伤组织和胚状体,并在分化培养基上再生出白化苗。试验还对有关培养基进行了研究。     

玉米愈伤组织的诱导 分化及细胞分离培养

以王米的3个自交系及其配制的3个单交种的5种不同外植体诱导愈伤组织。7～8叶期的幼茎切段和授粉后22天的幼胚表现有较高的出愈率。由幼芽切段培养的愈伤组织经多次固体继代和筛选呈浅黄色颗粒状,且在其液体悬浮培养中观察到少数细胞的一次分裂相,并对收集到的单细胞和悬浮愈伤组织进行电镜扫描观察。在愈伤组织继代培养中,适宜的2,4-D 浓度为2.5～3.0mg/l。愈伤组织生长快慢与接种时愈伤组织初始体积大小有关。其直径≤0.5厘米的生长较慢。愈伤组织在两种分化培养基上或硬化或形成大量的根,未能获得再生植株。     

小麦单细胞培养与植株再生的研究

小麦单细胞培养研究于１９８５￣１９９５年进行，以六倍体普通小麦８４－５３的幼穗为外植体，在诱导胚性愈伤组织基础上，经振荡悬浮培养获得单细胞再生植株，建立体细胞无性系，并系统研究再生植株后代体细胞无性系的变异规律和遗传稳定性，体细胞无性系有利变异的选择及其在小麦品种改良中应用的可能性，本文报道有关单细胞培养和再生植株的研究结果。     

叶用芥菜细胞悬浮培养的研究

以叶用芥菜的子叶为外植体,对愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系进行了研究.结果表明,愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D,愈伤组织最佳增殖培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D.悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养2～10 d达对数生长期.将小细胞团接种于Ms+1.0 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA分化培养基上,继代两次后,分化出芽,分化芽在培养基MS+0.1 mg/L NAA上诱导生根,形成小植株.     

叶用芥菜细胞悬浮培养的初步研究

以叶用芥菜的子叶为外植体,对愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系进行了研究。结果表明愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L2,4-D,愈伤组织最佳增殖培养基为MS+3.0mg/L6-BA+1.0mg/L2,4-D。悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养2-10d达对数生长期。将小细胞团接种于MS+1.0mg/LNAA+3.0mg/L6-BA分化培养基上,继代两次后,分化出芽,分化芽在培养基MS+0.1mg/LNAA上诱导生根,形成小植株。     

小麦（Triticum aestivum．L）单细胞培养与植株再生的研究

小麦单细胞培养研究于１９８５～１９９５年进行，以六倍体普通小麦８４—５３的幼穗为外植体．在诱导胚性愈伤组织基础上．经振荡悬浮培养获得单细胞再生植株，建立体细胞无性系，并系统研究再生植株后代体细胞无性系的变异规律和遗传稳定性、体细胞无性系有利变异的选择及其在小麦品种改良中应用的可能性．本文报道有关单细胞培养和再生植株的研究结果．     

粳型超级稻胚性细胞悬浮系的建立及植株再生

以北方粳型超级稻沈农265成熟胚为材料,对其胚性悬浮细胞系建立与植株再生进行了研究.结果表明,弱光下培养20 d,有利于成熟胚诱导出质量较好的愈伤组织,这些愈伤组织在添加2,4-D(3.0 mg/L)和脯氨酸(500 mg/L)的N<,6>固体培养基上进行状态调整后,可获得适于悬浮培养的胚性愈伤组织.悬浮培养时适宜的2,4-D浓度为2～3 mg/L;起始接种量以20 mg/mL的效果较好;最佳继代时间是7 d.悬浮细胞团先经固体继代培养获得愈伤组织小块,再将愈伤小块干燥处理2 h后进行分化,可显著提高植株再生率,愈伤组织绿点分化率和成苗率分别达58.6%和27.2%.     

冬、春小麦幼穗离体培养的比较研究

本试验用三种类型的小麦幼穗为材料,在幼穗的发育时期,去分化和分化培养基等完全相同的条件下,对它们在离体培养下的反应进行了比较,发现愈伤组织的诱导率和苗的分化率以及愈伤组织在继代培养中的行为,都因不同类型的小麦幼穗而产生显著差异,而且愈伤组织的诱导率和苗的分化率之间不存在相关性。我们认为,材料的基因型选择,可能是建立小麦的胚性细胞悬浮培养物系统的一个有希望的途径。     

籼稻遗传转化高频再生体系的建立

选用21个籼稻品种进行成熟胚离体培养试验，结果发现大多数品种可通过添加一定配比的外源植物激素使愈伤组织诱导率大大提高，继代培养基中添加KT NAA可明显改善愈伤组织的生长状况；连续继代可显著提高愈伤组织的再分化率；预分化培养后转入再分化培养可显著提高愈伤组织再分化率，建立了一套适于籼稻遗传转化的高频再生离体培养体系。     

玉米细胞悬浮系的建立与单细胞培养效果

以330、辽7352和丹340共3个玉米自交系的雄幼穗为外植体获取愈伤组织,建立悬浮细胞系,在改良MS、改良B5、改良1/2B5 培养基中进行细胞悬浮培养。试验中发现 ,基因型和培养基对细胞悬浮系有很大影响,其中供试材料330表现最好,圆形细胞率平均达16.5%,改良1/2B5 培养基有利于细胞悬浮培养,500mg·L-1的水解酪蛋白对悬浮细胞生长有促进作用。2,4 -D的浓度影响悬浮细胞的生长和细胞成活率,浓度为1.0～2.0mg·L-1时比较适宜。细胞悬浮培养5～7d继代1次。在悬浮培养1个月后 ,经400目镍网过滤筛选,获得单细胞。单细胞培养中,激素水平和培养方式影响单细胞的分裂率,其中2,4-D的浓度为0.5～1.0mg·L-1时比较适宜。浅层培养和看护培养有利于单细胞的生长。在单细胞培养过程中试验获得了愈伤组织。     

花生悬浮培养再生体系初探

以花生胚小叶为外植体，在不同激素配比的培养基中进行悬浮培养，探索适合花生成熟胚的悬浮培养体系，结果表明：3种培养基均能诱导出愈伤组织并分化出芽，只是不同培养基上诱导出的愈伤组织和芽点的质量及生长速率有较大差别，以MS＋5mg／L6-BA＋3mg／LNAA为最佳培养基；两品种间以四粒红的诱导分化效果较好。