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《中国兽医学报》2019,(7):1310-1314
为建立埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)抗原快速检测方法,本研究利用纯化后的埃博拉病毒样颗粒(EBOV-VLPs)免疫马匹制备阳性血清,采用饱和硫酸铵沉淀法初纯血清中的IgG,后经过Protien G柱亲和层析法精纯IgG,利用精纯后的IgG致敏醛化的绵羊红细胞,建立反向间接血凝抗原检测方法,并对该方法进行最佳反应条件的优化。将该方法用于不同批次制得的已知病毒滴度埃博拉假病毒血凝效价检测,检测结果显示:病毒滴度的高低与血凝效价检测结果呈现良好的相关性。本研究成功建立埃博拉病毒抗原反向间接血凝检测方法,该方法简单、方便、快捷,无需特殊的仪器设备,1 h内便可报告检测结果,在普通实验室中便可进行操作。此外,该方法也适用于埃博拉病毒感染及疫病暴发后临床样品的定性分析。 相似文献
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猪圆环病毒病的流行病学调查及其防治 总被引:1,自引:0,他引:1
导读:猪圆环病毒病是由圆环病毒引起猪一种新的传染病。主要感染仔猪,临诊类型较多,其特征为体重下降,消瘦、呼吸困难。猪群感染率高,仔猪病死率高。目前,国内疫情情况是继猪蓝耳病之后又突出出来的一个重要猪病,在一些地区其严重性已超过了猪瘟的危害。确诊依赖于病毒抗原检测和病毒抗体的检测。病毒抗原检测技术:采用的方法有间接免疫荧光技术、核酸探针及原位杂交技术和聚合酶链诊断技术;病毒抗体的检测技术有酶联免疫吸附试验等,除此,尚有分子生物学技术。这些诊断方法中以聚合酶链诊断方法应用较多。对于猪圆环病毒病尚无特异的预防措施,加强常规饲养管理,提高营养水平,注意环境卫生及消毒制度,实行全进全出制度。 相似文献
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《中国兽医学报》2020,(2):324-329
采用昆虫杆状病毒表达系统,分别制备埃博拉病毒(Ebola virus,EV)埃博拉-扎伊尔(Ebola-Zaire,Z-E)、埃博拉-苏丹(Ebola-Sudan,S-E)病毒样颗粒(virus like particles,VLP)抗原,利用区带离心法和层析法两步纯化抗原,2种抗原等量混合并加入等量不完全佐剂充分乳化,免疫马匹;当利用自制的Z-E、S-EEV假病毒测定血清的中和抗体效价均达120/μL时,采血,分离血清,按照免疫球蛋白F(ab′)_2生产工艺制备治疗性抗体成品,并对其进行中和抗体效力、安全性检测。结果显示,包装的2种假病毒滴度均在40 000荧光值/μL以上;纯化的2种VLP抗原浓度均在3 mg/L以上,纯度均在95%以上;纯化的F(ab′)_2成品,纯度在90%以上,中和抗体效价均超过100/μL;安全性符合现行《中国药典》要求。结果表明,建立了马抗EV免疫球蛋白F(ab′)_2制品生产工艺,制备的成品符合现行《中国药典》要求,为埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD)治疗提供理论依据。 相似文献
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为研究不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响,通过原核表达获取猪瘟病毒重组E2蛋白、E0蛋白、C蛋白和NS5B蛋白,大小分别约为35 kD、42 kD、16 kD和80 kD。经Ni-NTA亲和层析柱纯化并利用BandScan软件进行计算,纯度均在90%以上,满足ELISA检测包被用原料纯度的要求。将上述4种蛋白作为包被抗原进行ELISA,以10份企业阳性质控品血清和10份企业阴性质控品血清为检验指标比较不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响。结果以E2蛋白为原料的包被板检测质控血清时,灵敏度和特异性均达到80%以上,能够满足猪瘟病毒抗体ELISA检测的要求,故选择E2蛋白作为包被抗原并进行相关检测试剂的研制。用研制的试剂与国际知名度高、产品质量好的美国IDEXX同类试剂对432份临床猪血清进行符合性检测,结果与美国IDEXX试剂的阳性符合率为95.53%,阴性符合率为86.56%,总符合率为91.67%,两种试剂检测结果具有较高的一致性。试验表明,用E2蛋白为包被抗原对猪瘟病毒抗体进行ELISA检测的效果最好,制备的检测试剂可用于临床猪瘟病毒血清抗体的检测,为今后猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础。 相似文献
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以纯化后的埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)糖蛋白(GP)作为抗原,致敏醛化的绵羊红细胞,进行最佳反应条件优化,建立间接血凝抗体检测方法。以EBOV高免马血清、纯化的IgG和精制免疫球蛋白F(ab’)_2为待检样品进行检测,并将检测结果与假病毒中和试验检测结果相比较。结果显示,该方法可特异性检测EBOV抗体,与马尔堡病毒、裂谷热病毒等的阳性血清均不发生反应;与假病毒中和试验测得的抗体效价增长规律相一致。结果表明,本试验成功建立了EBOV抗体间接血凝检测方法,该方法安全、简便、快捷,为EBOV疫苗免疫后的效果评价提供了又一新的检测方法。 相似文献
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犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种急性、烈性传染病。通过分析犬细小病毒病现有的诊断手段,对犬细小病毒病的预防和控制具有重大意义。目前常用的犬细小病毒病监测指标主要包括CPV、CPV DNA、CPV抗原、抗-CPV抗体。核酸监测由于快速,方便操作、灵敏的特点,被认为是实验室常用诊断手段,也是"金标准",对发病或隐性带毒犬都有特别的优势。CPV抗原作为现症感染指标、抗-CPV抗体作为现症感染和既往感染的指标,基于此建立的ELISA、胶体金试纸条大大节约了检测时间。文中将从犬细小病毒免疫原诊断以及分子生物学诊断两方面将其实验室诊断方法的研究进展进行综述。 相似文献
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为了解江西省猪群猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)感染现状,本试验利用APP江西分离株研制了抗体间接血凝检测法(IHA)。试验将纯化的APP江西分离株培养菌液反复冻融,经超声波裂解处理后提取菌体抗原,致敏经戊二醛固定鞣酸化的兔红细胞,成功建立了APP抗体的IHA法。应用该法对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒等病毒的阳性血清进行检测试验,结果均为阴性;对大肠杆菌、沙门氏菌、副猪嗜血杆菌阳性血清检测均为阴性。不同批次APP抗原经IHA检测,结果显示重复性好。本试验结果表明所建立的APP抗体IHA检测法有较好的特异性和重复性,为下一步血清学调查奠定基础。 相似文献