疫苗免疫操作注意事项

疫苗是一种特定抗原,用于机体对特定的疾病产生免疫来保护鸡只不受疾病的侵害。抗原在机体内产生特异性的反应,产生抗体用于对付外来的抗原(外来的病毒和细菌)。机体的免疫包括细胞免疫和体液免疫。1疫苗的分类及其特点疫苗的种类有:传统疫苗:①灭活疫苗;②弱毒疫苗;③类毒素;④亚单位疫苗。新型疫苗:①基因工程亚单位疫苗;②基因工程活疫苗;③核酸疫苗;④合成肽疫苗;⑤转基因植物可食疫苗。     

不同类型猪蓝耳病疫苗的免疫探讨

为科学评价不同猪蓝耳病疫苗免疫效果,选取19个规模猪场,分别使用蓝耳病国产弱毒疫苗、进口弱毒疫苗、普通灭活疫苗、猪高致病性蓝耳病疫苗进行免疫,免疫1月后,采集免疫猪群的血清与全血样品,进行PRRSV病原学和免疫抗体检测,结果显示:国产弱毒疫苗、进口弱毒疫苗、普通灭活疫苗、高致病性猪蓝耳病灭活疫苗、对照组抗体阳性率分别为86.40%、76.10%、36.70%、49.30%、31.17%。使用PRRS弱毒疫苗免疫组PRRSV变异株检出率较高,使用高致病性PRRS灭活疫苗免疫组PRRSV普通株检出率较高。此结果提示PRRS疫苗免疫后能产生一定的保护性抗体水平,但交叉免疫保护性较差。对于PRRS的防控,关键在于提高猪群PRRS抗体的水平与整齐度,同时加强饲养管理。     

猪用疫苗种类与应用

正灭活疫苗、弱毒活疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗与合成肽疫苗、转基因植物可饲疫苗,不同疫苗不同优缺点,一起认识猪用疫苗。一、种类根据抗原性质可分为灭活疫苗、弱毒活疫苗、亚单位疫苗、工程疫苗、核酸疫苗和转基因植物可饲疫苗;根据疫苗功效则可分为预防性疫苗和治疗性疫苗。1.灭活疫苗。将分类离培养的病原微生物(多数为强毒株)用适当的化学试剂将其灭活但保留其免疫原性,与不同的佐剂混合后乳化     

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗的安全性和体液免疫研究

采用转瓶生产技术，在MARC-145细胞中增殖PRRSV克隆20株，经过条件的优化选择，得到TCID50≥10^-7.55／mL的高滴度PRRSV溶液，为生产疫苗打下基础；所生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全无致病性，能刺激猪产生特异性抗体应答，接种后第14天可检测出特异性中和抗体。疫苗内的PRRSV滴度在冻干前后变化不大，冻干疫苗在4～8℃保存有效期为6个月，-20℃保存有效期达18个月，表明生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全且能刺激猪产生体液免疫应答，可用于PRRS的预防接种。     

植物基因工程疫苗的研究进展

植物基因工程疫苗是利用植物系统表达病原菌抗原蛋白一个或几个亚单位的疫苗，它没有病原菌完整的侵染能力，却可以使机体对特异的病毒或细菌产生免疫应答反应。由于转基因植物产生的疫苗对动物实施免疫只是简单地摄取含这种疫苗的植物组织或种子，所以这种疫苗不会被酶类所破坏，可通过机体肠道黏膜作用激发特异性免疫应答，使动物获得持久性疾病防御能力，且没有或很少出现病原体的过敏反应。     

PCV2a/2b灭活疫苗与PCV2b亚单位疫苗免疫效力比较试验

比较猪圆环病毒(PCV)2a、PCV2b基因型全病毒灭活疫苗和PCV2b亚单位疫苗对PCV2b基因型强毒株免疫攻毒保护效力。取3种类型PCV2疫苗,分2次免疫PCV2抗原和特异性抗体阴性的BALB/c小鼠和14日龄仔猪,间隔21d,分别于免疫后14、21和35 d进行PCV2特异性ELISA抗体测定。使用临床分离鉴定的PCV2b基因型强毒株进行攻毒,通过攻毒前后临床观察、体温变化、平均相对日增重及PCV2核酸载量检测等对疫苗免疫效果进行评价。结果:不同类型PCV2疫苗免疫BALB/c小鼠后14 d能检测到PCV2特异性抗体,在35 d时抗体水平持续升高,其中PCV2b亚单位疫苗产生抗体水平高于全病毒灭活疫苗;不同类型疫苗均能刺激仔猪产生较好的免疫应答,其中PCV2b亚单位疫苗刺激机体免疫应答强于灭活疫苗;仔猪免疫攻毒试验表明,3种类型疫苗均可刺激机体产生抵御PCV2强毒攻击的特异性免疫应答,免疫组体温变化、相对日增重及PCV2核酸载量检测均与攻毒对照组间存在显著性差异,3种类型疫苗之间差异不显著。试验表明:3种类型PCV2疫苗免疫小鼠和仔猪后均能诱导产生抵御PCV2b基因型强毒攻击的特异性免疫应答反应,有效抵抗PCV2感染和提高猪的生长性能。     

疫苗免疫在禽病控制上的进展

疫苗免疫已有１０００多年的历史,但只有进入二十世纪以后,疫苗科学才得到了迅速的发展。目前商品性疫苗主要是弱毒活疫苗,灭活疫苗和亚单位疫苗三大类,它们有各自的优点和不足。新一代的疫苗,如基因缺失疫苗,载体疫苗,核酸疫苗和病毒－抗体复合物疫苗等,将从质和量两方面改善其免疫应答和免疫保护,并导致新的疾病控制策略的出现。     

规模猪场母猪繁殖与呼吸综合征的临床免疫试验

应用猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒疫苗、灭活疫苗、自家组织灭活疫苗对PRRS阳性场母猪,PRRS抗体阴性母猪进行临床免疫试验,比较不同PRRS弱毒疫苗、灭活疫苗与自家组织苗的临床免疫效果及安全性,应用ELISA监测PRRS抗体,结果表明PRRS弱毒疫苗免疫母猪,经临床观察全部得到保护,安全有效,未发现流产、早产等不良临床反应.     

规模化猪场PRRSV不同感染状态下防控实践探讨

本文针对猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)不同感染状态,通过不同防控措施(接种疫苗、药物保健和生产组织优化),探讨了猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的防控经验。试验结果：PRRSV阳性不稳定猪群,接种PRRS灭活疫苗连续2次,1个月可实现猪群抗原阴性,阴性维持时间大约100d;PRRSV阴性猪群采用PRRS弱毒活疫苗半数低剂量免疫,排毒时间约28 d,免疫猪群100%转阳,而未免疫猪转阳率为30%～40%。     

三种猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫效果评价

为研究不同猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疫苗的的免疫特性,分别采用PRRSV变异株(JXA1-R)弱毒疫苗、经典PRRSV(VR 2332)弱毒疫苗、变异株(JXA1)灭活疫苗,免疫接种PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫接种后70d用PRRSV变异株强毒攻毒,ELISA检测血清中PRRSV特异的抗体水平及IFN-γ、IL 2、IL 4、IL 8、IL 10的水平,并进行临床症状和肺部病理组织学观察和评分。结果表明,VR 2332、JXA1-R弱毒疫苗对免疫猪攻毒保护效果差异不显著,均为63.6%(7/11),JXA1灭活疫苗免疫攻毒保护效果较差,为36.4%(4/11)。试验还发现病毒感染猪血清中细胞因子IFN-γ和IL-10的比值可以作为评价疫苗免疫效果的一个指标。     

抗PRRSVGP5和M蛋白独特型抗体替代抗原诱导机体产生中和抗体的研究

制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗独特型抗体(Ab2),探讨Ab2替代抗原对机体免疫调节作用的研究。用纯化的PRRSV-GP5(GP5-Ab1)蛋白和抗PRRSV-M(M-Ab1)蛋白单抗免疫大白兔,当免疫血清琼扩效价达1:16以上,加强免疫后心脏采血分离血清,分别纯化兔抗PRRSV-GP5IgG(GP5-Ab2)和抗PRRSV-MIgG(M-Ab2)血清,分别用GP5-Ab2、M-Ab2以及GP5-Ab2与M-Ab2混合型三种分别免疫未免PRRS疫苗的小猪,同时设PRRS弱毒苗、灭活苗和空白组作对照,免疫后21d采集猪血清,间接ELISA检测免疫Ab2和PRRS疫苗的猪血清全为阳性,空白组仍然为阴性。经细胞中和试验证明免疫Ab2及PRRS疫苗的猪血清都具有中和抗体,说明Ab2在体内具有替代PRRSV的作用诱导机体产生具有中和效应的中和抗体,从而起到保护机体免受PRRSV的感染作用,为猪繁殖与呼吸综合征病新型疫苗的研究提供了新的思路。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白基因工程亚单位疫苗免疫保护试验

为了探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因工程亚单位疫苗的免疫保护效果,试验利用大肠杆菌表达并纯化了重组PRRSV N蛋白,添加佐剂制成亚单位疫苗进行免疫保护试验。试验猪分为2个不同佐剂制备的PRRSV N蛋白亚单位疫苗免疫组,1个PRRSV TJM-F92株减毒活疫苗免疫组和1个攻毒对照组。首免5周后,用PRRSV NVDC-JXA1强毒株攻击,观察临床表现并在攻毒后21 d对试验猪进行剖检。结果表明:首免3周后2个亚单位疫苗组和减毒活疫苗组抗体全部转阳,组间无显著性差异(P0.05);攻毒后PRRSV N蛋白亚单位疫苗免疫1#组有2/3的猪只、2#组有1/3的猪只的临床症状、体征和解剖病变较攻毒对照组猪只轻微,转归较好且成活,但保护作用不及PRRSV TJM-F92株减毒活疫苗组;剩余的亚单位疫苗免疫1#组1/3的猪只和亚单位疫苗免疫2#组2/3的猪只,与攻毒对照组猪只一样表现为比较典型的PRRS症状,并在8~12 d内死亡。说明PRRSV N蛋白亚单位疫苗能够引起机体的体液免疫反应,具有部分保护作用,但不能提供完全的保护,单独使用达不到减毒活疫苗的效果。     

转基因植物可食疫苗研究进展

利用转基因植物生产疫苗是一种经济、方便的方法。目前已有一些细菌和病毒等病原抗原编码基因在植物中成功地得到了表达 ,并且保留了自身的免疫特性 ,通过口服或非经肠道免疫能刺激免疫反应 ,甚至有保护作用。文章就变异链球菌表面蛋白、大肠杆菌热敏肠毒素 B亚单位、霍乱毒素 B亚单位、乙肝病毒表面抗原、Norwalk病毒衣壳蛋白、狂犬病病毒糖蛋白、传染性胃肠炎糖蛋白 S、口蹄疫病毒 VP1、兔出血病病毒等在转基因植物中的表达及其免疫原性研究作了综述。表明利用转基因植物生产可食疫苗是可行的 ,然而还存在一些问题 ,有待于进一步研究     

PRRS不同疫苗组合对仔猪血清抗体水平和CD3、CD4、CD8分子表达量的影响

为了探究猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)不同疫苗组合对仔猪血清抗体水平和CD3、CD4、CD8分子表达量的影响,试验于规模化猪场筛选健康未免疫的仔猪30头,随机分为3个组。其中试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和对照组均在仔猪14日龄首次免疫经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗,试验Ⅰ组仔猪在35日龄加强免疫高致病性PRRSV灭活疫苗,试验Ⅱ组仔猪在35日龄加强免疫经典PRRSV弱毒疫苗,对照组在14,35日龄均注射0.9%Na Cl溶液,然后对各组仔猪在不同时间点通过前腔静脉采血,应用ELISA法检测血清中PRRSV抗体和CD3、CD4、CD8分子表达量。结果表明:除了CD8分子外,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组抗体水平和CD3、CD4分子表达量在部分时间点显著或极显著(P0.05或P0.01)高于对照组,但两个试验组之间无统计学差异。说明在生产实践中PRRSV弱毒疫苗和灭活疫苗联合使用能产生一定的效果,从安全角度考虑,建议采用经典弱毒疫苗结合高致病性灭活疫苗进行免疫。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的变异及其基因工程疫苗研究进展

ORF5基因编码的E蛋白是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的主要结构蛋白,糖基化的囊膜蛋白E蛋白具有良好的免疫原性,能够代替PRRSV诱导机体产生免疫应答,产生保护性中和抗体,是研发基因工程疫苗的优良候选基因之一,在防控PRRS方面有着重要的意义。目前PRRS的流行毒株存在着广泛的变异,尤其是稳定性较差的ORF5基因的变异给PRRSV的检测和防控带来很大的困难。本文就国内外学者对ORF5基因的变异情况以及基于PRRSV ORF5基因在基因工程疫苗方面的研究进展作了综述。     

猪繁殖与呼吸综合征对塞内卡病毒灭活苗免疫效果的影响

为探究猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)对塞内卡病毒(SVA)灭活疫苗免疫效果的影响,对PRRS阳性猪和PRRS阴性猪分别免疫相同批次、相同剂量的SVA灭活苗,检测首次免疫后7 d、14 d、21 d、28 d血清中和抗体效价,并在免疫后28 d对所有试验猪进行攻毒保护试验。结果显示,所有PRRS阳性猪的SVA血清中和抗体效价均小于1∶4,而PRRS阴性猪SVA血清中和抗体效价在二免后上升到较高水平。攻毒保护结果与中和抗体效价结果呈正相关,PRRS阳性组0/5保护,而PRRS阴性组试验猪达到5/5保护。这一研究表明PRRS会使SVA灭活疫苗免疫效果下降,为SVA及PRRS疫苗的研发及猪场疾病的防控提供了参考。     

猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗免疫抗体水平分析

为评估猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗的免疫原性,用商品化的乙型脑炎鼠脑疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗(SA14-14-2株)以及自制乙型脑炎细胞灭活疫苗(HW1株)分别免疫仔猪,通过抗体水平监测试验、中和抗体试验、小鼠攻毒保护试验分别检测了其特异性抗体消长情况、中和抗体效价产生情况及疫苗对小鼠的攻毒保护率。结果显示,3种疫苗均能产生中和抗体,乙型脑炎细胞灭活疫苗免疫组中和抗体水平要高于鼠脑疫苗和弱毒疫苗免疫组,乙型脑炎细胞灭活疫苗和弱毒疫苗免疫组对小鼠的攻毒保护率高于鼠脑疫苗免疫组,但两者之间差异不显著。抗体消长情况显示,至8周观测期结束,鼠脑疫苗免疫组的抗体阳性率为80%,乙型脑炎细胞灭活疫苗和弱毒疫苗免疫组抗体阳性率为100%。结果表明猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗的免疫原性优于鼠脑灭活疫苗和弱毒疫苗。     

高水平母源抗体仔猪接种猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗的免疫效果分析

为评估猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗的免疫效果,本研究于规模猪场选取具有母源抗体的仔猪,接种PRRS弱毒活疫苗后不同时间采集血清,应用RT-PCR检测PRRS病毒(PRRSV)核酸,应用N-ELISA和G-ELISA两种试剂盒检测PRRSV抗体。结果显示,在免疫接种后60 d内可在实验仔猪血清中检测到疫苗株核酸,而在整个实验期间未能检测到野毒株核酸。仔猪在免疫前具有较高的母源抗体,阳性率达到100%,此后逐渐下降,在免疫后第28 d/60 d(第2次试验/第1次试验)降到低点后又稳步升高,从免疫后第60 d/90 d到150 d试验结束时阳性率均达到100%。应用两种ELISA试剂盒同时检测329份血清样品,检测结果的符合率为96.96%;配对χ~2检验,p0.05,两者差异不显著;Kappa值为0.81,属于极强一致性;两者相关系数r为0.794,具有显著线性相关。本研究结果表明,高水平母源抗体猪群接种弱毒活疫苗后取得良好的免疫效果,可选用N-ELISA或G-ELISA试剂盒进行免疫效果评估。     

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建及动物免疫试验

本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株.PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5.将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF5).鉴定重组菌GP5蛋白的表达;测定重组菌定居特性及安全性;检测免疫小鼠血清抗体;流式细胞仪检测重组菌对小鼠T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的影响;最后进行免疫猪血清抗体检测.结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;Western blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合;重组菌在体内可较稳定地定居于小鼠的肠系膜淋巴结和脾脏中,并在其中表达出GP5蛋白;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;重组菌口服免疫小鼠可以产生抗GP5蛋白抗体且抗体具有中和活性;重组菌株能不同程度地使CD4+、CD4+/CD8+升高,而使CD8+下降,表明重组菌对细胞免疫功能具有调节作用;淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱发小鼠产生较强的细胞免疫应答;重组菌口服免疫猪可以产生抗GP5蛋白抗体.本试验成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定基础.     

高致病性PRRS活疫苗(HuN4-F112株)抗体对Ⅱ型不同亚群PRRSV的中和效果

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)活疫苗(HuN4-F112株)诱导的抗体对II型不同亚群PRRSV的中和作用,本研究将10头PRRSV抗原、抗体阴性的6周龄仔猪,每头仔猪肌肉注射1头份疫苗(106.0TCID50/mL),每周采血并分离血清,检测该血清对II型PRRSV第1、2、4亚群的代表病毒株勃林格PRRSV活疫苗(VR-2332株)、PRRSV活疫苗(CH-1R株)和HP-PRRSV活疫苗(HuN4-F112株)的中和效价。实验结果显示,仔猪免疫3周后开始产生针对HuN4-F112的中和抗体,11周至22周抗体水平达到高峰,抗体持续至少25周,但只有少数免疫猪在几个时间点的血清对VR-2332和CH-1R疫苗株具有血清交叉中和作用,而且中和效价较低。