大肠杆菌O157:H7在部分市售鸡肉和鸡蛋中的污染状况调查

【目的】对广州市、江门市、东莞市、乌鲁木齐市、喀什市和博乐市的多家农贸市场采集的生鸡肉及鲜鸡蛋样本,了解部分市售的生鸡肉及鲜鸡蛋被大肠杆菌O157:H7污染的情况。【方法】样品经EC肉汤增菌、免疫磁珠富集后,用SMAC平板和MUG培养基进行初步筛选,再用rfb E和fli C基因对筛选后的可疑菌株做PCR检测,同时结合生化实验的方法进行符合性检验。【结果】所有的66份鸡肉和97枚鲜鸡蛋中均未检出大肠杆菌O157:H7。【结论】被检地市售的生鸡肉和鲜鸡蛋未被大肠杆菌O157:H7污染,食用时相对比较安全。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7检测方法研究进展

大肠杆菌O157:H7检测方法的研究是目前比较热门的话题,建立快速、准确的检测方法是临床快速诊断的重要内容.文章主要介绍了大肠杆菌O157:H7各种检测方法的特点及其研究进展.     

致病性大肠杆菌O157H7外膜蛋白(OMPs)抗原的快速提取

本试验采用了超声波破碎、N－十二烷基肌氨酸处理和超速离心技术提取致病性大肠杆菌O157H7的外膜蛋白（OMPs）。提取物用SDS－PAGE进行电泳检测。     

脂肪酸及其衍生物的抑菌活性

以致病性大肠杆菌(Escherichia coli)O157:H7和白色念珠菌(Candida albicans)为供试菌,测定10种饱和脂肪酸、6种不饱和脂肪酸、9种单脂肪酸甘油酯、2种脂肪酸甲酯、3种脂肪酸乙酯和4种脂肪醇的抑菌活性.结果表明:中链饱和脂肪酸及其单脂肪酸甘油酯以及长链不饱和脂肪酸的抑菌活性较强,脂肪醇次之,长链饱和脂肪酸、脂肪酸甲酯以及乙酯的抑菌效果较弱,其中,脂肪酸乙酯的抑菌效果优于脂肪酸甲酯.说明脂肪酸碳链的长度,不饱和脂肪酸双键数目、双键位置以及取代基团种类是影响脂肪酸及其衍生物抑菌活性的重要因素.     

大豆基因组DNA提取纯化方法研究

[目的]通过逐步富集的方法,提高大豆DNA的纯度和质量,为其他动植物基因组DNA的提取纯化提供参考。[方法]以梅桥大豆为试验材料,在CTAB法提取大豆基因组DNA的基础上,对大豆基因组DNA进行了纯化,对纯化后的DNA进行了光密度、紫外光谱、琼脂糖电泳和RAPD-PCR等的检测。[结果]光密度和紫外光谱检测表明A260/A230介于1.678~1.722,平均为1.697,A260/A280介于1.733~2.022,平均为1.844;琼脂糖电泳检测证实DNA分子量较大、完整性好、RNA残留少;RAPD-PCR检测得到了谱带清晰、多态性丰富的电泳谱带。DNA的得率为66.969μg/g。该试验的研究方法具有DNA质量高、操作简便、试验条件要求不高的特点。[结论]该方法可以应用于其它动植物的DNA提取纯化。     

玉米基因组DNA快速提取方法

探讨了用NaOH裂解法从玉米单子粒胚乳中和用十二烷基肌氨酸钠法从玉米叶片中快速提取基因组DNA的方法,分析了2种方法提取的基因组DNA的效果及应用价值.结果表明,虽然得到的DNA质量基本一致,都可用于玉米品种纯度检验和分子标记辅助选择,但优化的、从叶片中快速提取的基因组DNA可长期保存,并用于多种后续序列分析工作.     

核桃青皮提取液在腹泻小鼠体内的抑菌效果

分析了核桃青皮乙醇提取液对致病性大肠杆菌O157∶H7在小鼠体内的抑菌作用,以及对其他肠道微生物生长繁殖的影响,为研究开发新型抗感染药物提供临床依据。用95%乙醇回流提取核桃青皮获得灌胃治疗液,通过对KM小鼠用大肠杆菌O157∶H7灌胃7 d使其发生腹泻感染,并用核桃青皮乙醇提取液灌胃治疗腹泻小鼠7 d,观察治疗情况。期间隔天采集小鼠粪便分析小鼠肠道微生物的变化情况。结果表明,与正常小鼠相比,感染大肠杆菌O157∶H7的小鼠粪便中致病性大肠杆菌、肠杆菌等条件致病菌数量显著增加(P0.05),乳酸菌和双歧杆菌等益生菌显著减少(P0.05)。核桃青皮乙醇提取液灌胃治疗后,其粪便中的条件致病菌数量(大肠杆菌、肠杆菌)则显著降低(P0.05),而乳酸菌和双歧杆菌两类益生菌数量变化不显著(P0.05)。研究结果显示核桃青皮乙醇提取液可较好地抑制小鼠肠道内致病菌大肠杆菌O157∶H7的生长繁殖,对治疗感染大肠杆菌O157∶H7的腹泻小鼠有一定的作用,但其同样对肠道内乳酸菌、双歧杆菌的生长繁殖显示了抑制作用。     

史氏鲟肠道微生物基因组DNA提取方法的研究

以史氏鲟肠遭内容物及鲜活肠道为样本,用PBS多次洗涤,离心样品,沉淀菌体.提取肠道菌群总DNA,电泳结果显示,样品DNA条带可用F后续分子生物学试验研究.通过细菌通用引物,对其16S rDNA基因进行PCR扩增,得到较清晰的图谱,条带整齐,表明采用该方法可以用于提取鱼类肠道微生物群落的DNA,且简单、准确、可行.     

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将E.coli O157:H7(EHEC-O157:H7)用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,获得7株分泌抗E.coli O157:H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ和IgG2aκ.用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×103,腹水效价均为1×1011;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×102,腹水效价均为1×103.相加ELISA结果显示,F1、G9和G11 3株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位.用间接ELISA分析特异性,7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应.Western blotting表明,C3、E7和F1 3株mAbs在蛋白分子量28×103处有特异性条带,而其它4株mAbs则未显示蛋白带.     

出血性大肠埃希菌O157∶H7广东分离株对小鼠致病性的研究

探索肠出血性大肠埃希菌Escherichia coli O157∶H7广东分离株021210(NalR)[以下简称O157∶H7 021210(NalR)]对小鼠的半数致死量(LD50),揭示其在小鼠体内产生的病理变化.将20日龄的昆明鼠随机分组,饮水中加入萘啶酮酸预处理,消除肠道杂菌,再分别以不同剂量腹腔注射O157∶H7 021210(NalR),进行临床观察和病理学检查.测定出LD50,试验结果表明一定剂量的O157∶H7 021210(NalR)可引起小鼠主要脏器及肠道发生病变.     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株的构建

为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375-BN-Kan-BC,转化SM10宿主菌获得重组SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)。将SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株。用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力。经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(Kan+)选择标记基因表达盒所代替。O157∶H7(△toxB)生长特性与亲本株相比无明显差异。O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍。口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB)第3 d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d;而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d。     

磁珠分离法快速提取大肠杆菌质粒DNA

以单分散羧基功能化纳米磁性粒子为固相载体,PEG/NaCl为结合液,对大肠杆菌(Escherichia coli)裂解液中的质粒DNA进行了纯化研究.结果表明:PEG8000质量分数7.5％,NaCl浓度1.25 mol/L,磁珠用量0.9 mg时,在室温下,从1.5 mL大肠杆菌菌液中提取到的质粒DNA量为8.3μg...     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7toxB基因的分片段克隆和表达

根据Gen Bank已有tox B基因全长序列,分别设计6对引物扩增tox B基因,克隆到质粒p GEX-4T-1,构建重组菌BL21(plys)(p GEX-4T-1-tox B),IPTG诱导表达重组蛋白质,用Western blot鉴定重组蛋白质免疫原性。tox B基因片段大小分别为1 531 bp、1 590 bp、1 609 bp、1 603 bp、1 525 bp和1 690 bp,重组蛋白质分子量分别为8.1×104、8.3×104、8.4×104、8.3×104、8.0×104和8.7×104。以兔源EHEC O157∶H7抗血清为一抗,Western blot分析结果显示6个重组蛋白质均具有良好的免疫原性。     

In Vitro Assessment of Probiotic Potential of Lactobacillus acidophilus and Antagonistic Activity Against Escherichia coli O157:H7

The antagonistic activity of Lactobacillus acidophilus KLDS1.0901, KLDS1.0902, KLDS1.1003 and NCFM against Escherichia coli O157: H7 were investigated in this study. The culture supernatants of all the L. acidophilus stains showed high bacteriostatic activities against E. coli O157: H7 and the bacteriostatic substances of their Cell-Free Supernatants (CFS) were preliminarily determined from organic acids. The bacteriostatic activity from CFS or viable L. acidophilus against E. coli O157: H7 was also assessed by using co-incubation methods, CFS had high bactericidal activity against E. coli O157: H7, no viable E. coli O157: H7 was detected when 5×107 cfu of E. coli O157: H7 was added to 5 mL of CFS and incubated at 37℃ for 2 h. However, L. acidophilus themselves had no bacteriostatic activity after directly contacted with E. coli O157: H7. The inhibition E. coli O157: H7 adhesion and colonization of L. acidophilus were also investigated based on competition, exclusion and displacement assays. L. acidophilus KLDS1.0901, KLDS1.1003 and NCFM strains were effective to displace E. coli O157: H7 from a Caco-2 cell layer in competition and exclusion assays. However, in displacement assay, all of the strains showed no significant antagonistic activities. Meanwhile, the probiotic potential of L. acidophilus strains was investigated based on adhesion assay to Caco-2 cells and anti-inflammatory effects by IL-8 produced in Caco-2 cells. The adhesion ability and anti-inflammatory effects of L. acidophilus strains showed a strain-dependent manner. In general,L. acidophilus KLDS1.0901 and NCFM showed better probiotic potential than KLDS1.0902 and KLDS1.1003. Thus, the use of L. acidophilus KLDS1.0901 and NCFM to prevent or treat of diseases associated induced E. coli O157: H7 in vivo was suggested.     

一种快速提取鸭基因组DNA的方法

建立了一种快速提取鸭基因组DNA的方法。该法操作简单,在减少污染的同时还节约成本,且其所提取的基因组DNA完整性好,未出现多糖、蛋白质残留,可以用于PCR、酶切等分子生物学操作。     

出血性大肠杆菌O157：H7的Tir与stx1／2B融合基因的构建和表达

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157：H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗．其中亚单位疫苗具有很大优势。方法：构建表达tir和stxb的融合基因。将tir基因中间295个氨基酸残基（Tir295）与stxB亚基基因72个氨基酸串联。构建pET28a—stx2b—Tir295-stx1b重组质粒,将其转化于BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达,经SDS--PAGE电沫检测,该融合蛋白获得了高效表达。结果：薄层扫描分析表明,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30％左右。结论：由于该融合蛋白由Tir、stx1b和stx2b三部分抗原组成．可刺激机体产生针时转位紧密素受体（Tir）和志贺毒素（stx）的抗体,在EHEC0157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。     

藏酋猴毛干DNA的3种提取方法

为寻求一种从藏酋猴毛干中提取总DNA的有效方法,从一藏酋猴个体背部剪取数量不等的毛干样品(不含毛囊),经蛋白酶K消化后,分别采用高盐沉淀抽提法、酚氯仿抽提法、纳米磁珠抽提法分离获得用于PCR扩增的模板DNA,通过紫外分光光度计测定OD值并计算出质量浓度,同时进行琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测,分析3种方法提取藏酋猴毛干DNA的质量差异。每处理设置10个重复。结果表明,纳米磁珠法提取藏酋猴毛干中DNA是一种快捷、简便、经济、高效、安全的有效方法;进行毛发取样时以5～10根较为合适。     

一种简单快速的拟南芥基因组DNA的微量提取方法

报道了一种专供PCR分析的快速微量提取拟南芥基因组DNA的方法。该法大大简化了传统提取方法的步骤,而且用氯仿-异戊醇代替传统的酚,克服了由于酚的残留带来的后续PCR等操作上的困难。用该法提取的DNA样品质量较高,特别适合一些突变体及转基因植株的PCR初步鉴定。