犬细小病毒AT-7株的分离与鉴定

通过采集疑似感染细小病毒(CPV)犬粪便,采用同步培养法接种胎猫肾细胞(FK81)进行病毒分离鉴定.通过PCR检测、HA试验、电镜观察、PEG纯化,获得1株犬细小病毒,并命名为AT-7株.感染的F81细胞48 h后出现明显的细胞病变;在感染的F81细胞中扩增出CPV基因的特异性片段;病毒液可凝集猪红细胞,血凝价为1:128,血凝性能被特异性抗体抑制.     

The three-dimensional structure of canine parvovirus and its functional implications

The three-dimensional atomic structure of a single-stranded DNA virus has been determined. Infectious virions of canine parvovirus contain 60 protein subunits that are predominantly VP-2. The central structural motif of VP-2 has the same topology (an eight-stranded antiparallel beta barrel) as has been found in many other icosahedral viruses but represents only about one-third of the capsid protein. There is a 22 angstrom (A) long protrusion on the threefold axes, a 15 A deep canyon circulating about each of the five cylindrical structures at the fivefold axes, and a 15 A deep depression at the twofold axes. By analogy with rhinoviruses, the canyon may be the site of receptor attachment. Residues related to the antigenic properties of the virus are found on the threefold protrusions. Some of the amino termini of VP-2 run to the exterior in full but not empty virions, which is consistent with the observation that some VP-2 polypeptides in full particles can be cleaved by trypsin. Eleven nucleotides are seen in each of 60 symmetry-related pockets on the interior surface of the capsid and together account for 13 percent of the genome.     

犬细小病毒蜂胶灭活苗的制备及治疗用卵黄抗体的研制

将犬细小病毒(CPV)的弱毒苗接种于单层F81细胞上,大量增殖病毒,并制成CPV蜂胶灭活苗.其后对蛋鸡进行连续3次免疫,定期收集鸡蛋,提取蛋黄中的卵黄抗体(IgY).应用ELISA方法检测CPV卵黄抗体效价,结果表明,通过本方法能获得稳定的犬细小病毒卵黄抗体,10 d后抗体水平维持在1:320以上.     

温州地区犬细小病毒病门诊的流行病学调查

 为掌握温州地区犬细小病毒病的流行病学情况,对2011年10月至2012年9月在温州科技职业学院附属宠物医院就诊的578份病例进行流行病学调查。结果表明: 检测出温州地区犬细小病毒感染阳性病例113份,感染率为196%;感染犬以3～12月龄犬为主;未免疫犬感染率最高,达到848%;纯种犬的感染率也是最高,达到841%;温州地区犬细小病毒感染一年四季均可发生,但多发于春秋两季;通常采用早期血清、单抗治疗和疫苗接种为主的综合治疗方法,才能提高治疗效果,降低死亡率。     

IL-15基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用

为弄清犬白介素-15(cIL-15)能否增强犬细小病毒VP2DNA疫苗的免疫原性,本研究首先通过RT-PCR方法从犬脾脏淋巴细胞中扩增全长cIL-15cDNA基因,并构建其与Myc-His-tag融合和非融合的表达载体:pcDNA-cIL-15/MH和pcDNA-cIL-15。将pcDNA-cIL-15/MH载体转染HEK293T细胞,确定构建的表达载体能否介导cIL-15进行分泌表达。利用过去构建的VP2表达载体和pcDNA-cIL-15载体共免疫小鼠,用ELISA检测免疫后小鼠血清中的抗体滴度,并用MTT检测小鼠淋巴细胞的增殖活性和用ELISA测定淋巴细胞干扰素-γ和IL-4的表达。结果显示,构建的cIL-15表达载体能够介导cIL-15在真核细胞中的分泌表达。用VP2和cIL-15表达载体共免疫小鼠,抗体水平明显高于VP2载体单免疫组(P0.01)。当免疫35d时,共免疫组淋巴细胞的刺激指数、干扰素-γ和IL-4的表达水平均明显高于VP2载体单免疫组(P0.05)。结果表明,cIL-15可明显增强VP2DNA疫苗的免疫原性。     

山桐子果实性状的自然变异及类型划分

【目的】通过在陕西省山桐子自然分布区的大量调查、系统观察与测定,研究山桐子果实性状的自然变异状况并进行类型划分,为山桐子种质资源开发利用、收集保存和良种选育提供依据。【方法】在山桐子分布区内全面踏察,选取果实性状特异的植株,观察记录其果穗形状和果粒颜色,测量果穗长度、果穗直径、果柄长度、果粒纵径和果粒横径,并计算平均果径和果形指数等性状。根据果实性状自然变异调查的结果确定类型划分依据进行类型划分,然后对其经济性状进行分析和评价。【结果】山桐子在果穗形状、长度、紧密度及果粒形状、大小、颜色等性状上存在广泛的变异,依据果穗长度、果粒颜色、果粒大小及形状,可将陕南地区山桐子划分为红果短穗小果型、红果短穗大果型、红果短穗梨果型、红果长穗小果型、红果长穗大果型和黄果短穗型6种果实形态变异类型。通过对各类型主要经济性状的分析,丰产、高含油率的红果长穗大果型可作为优良类型加以利用。【结论】山桐子果实性状自然变异很丰富,类型较多,黄果型和梨果型比较特殊,可以作为山桐子种质资源进行收集和保存;红果长穗大果型单株产量和产油量都较高,在目前还没有无性系品种可以利用的情况下,可以作为丰产高含油率类型试行推广种植。     

犬细小病毒HL-01株的分离鉴定及VP2基因真核表达质粒的构建

从临床发病犬采集粪便样品,以F81传代细胞进行病毒分离,经血球凝集实验(HA)和血球凝集抑制实验(HI)初步鉴定为犬细小病毒。为进一步确诊,根据Genbank中已发表的犬细小病毒VP2基因序列设计并合成一对引物,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出CPV VP2基因,酶切,测序加以鉴定。其序列与国际已发表的CPV-d(type 2)、CPV-1(5 type 2a)、CPV-3(9 type 2b)VP2序列同源性分别为98.97%,98.75%,98.69%,氨基酸序列的同源性分别为98.12%,97.60%,97.60%,从而证明此分离株为犬细小病毒。在获得VP2基因的基础上,为实现VP2蛋白的表达,构建了真核表达质粒pMel BacC-VP2。     

犬细小病毒VP2主要抗原表位区的原核表达载体构建及诱导表达

利用PCR扩增CPV-2bVP2蛋白的主要抗原表位区基因,并将该基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6P-1上,通过诱导表达条件的摸索,实现了VP2蛋白主要抗原表位区在大肠杆菌中的高效表达,sDs—PAGE检测表达的融合蛋白主要以可溶形式存在,并利用亲和层析得到融合蛋白。     

Natural genetic variation in lycopene epsilon cyclase tapped for maize biofortification

Dietary vitamin A deficiency causes eye disease in 40 million children each year and places 140 to 250 million at risk for health disorders. Many children in sub-Saharan Africa subsist on maize-based diets. Maize displays considerable natural variation for carotenoid composition, including vitamin A precursors alpha-carotene, beta-carotene, and beta-cryptoxanthin. Through association analysis, linkage mapping, expression analysis, and mutagenesis, we show that variation at the lycopene epsilon cyclase (lcyE) locus alters flux down alpha-carotene versus beta-carotene branches of the carotenoid pathway. Four natural lcyE polymorphisms explained 58% of the variation in these two branches and a threefold difference in provitamin A compounds. Selection of favorable lcyE alleles with inexpensive molecular markers will now enable developing-country breeders to more effectively produce maize grain with higher provitamin A levels.     

一株犬副流感病毒CPIV-BJ01株全基因组测序与其遗传变异分析

为分析本实验室分离的犬副流感病毒CPIV-BJ01株全基因组序列与其遗传变异情况,对CPIV-BJ01株全长进行分段扩增并测序,拼接获得全基因组序列,与GenBank发布的27株副流感病毒5型分别进行全基因组和包膜糖蛋白(F、SH和HN)核苷酸及氨基酸序列的相似性比对,分析其遗传进化关系。结果显示,CPIV-BJ01毒株与犬源PIV5 1 168-1亲缘关系最近,核苷酸相似性为99.9%,氨基酸相似性为99.8%。CPIV-BJ01的F和HN基因序列变化较为保守,核苷酸和氨基酸变化均在4%以内,其中F蛋白的氨基酸变化形成一处新的O-糖基化位点;CPIV-BJ01株的SH基因序列与其他演化分支毒株差异显著,核苷酸相似性为84.4%~97.0%,氨基酸相似性为31.8%~95.6%。综上,CPIV-BJ01株基因组序列与前人报道的毒株相比,在F、HN基因和部分非编码区存在核苷酸或氨基酸序列的改变,同时F蛋白存在糖基化修饰的改变,均为该毒株所特有,该研究结果丰富了中国CPIV流行株的基因组信息。     

犬细小病毒病的组织病理学观察

采用病理解剖、冰冻切片、HE染色法,对实验室确诊为犬细小病毒病的幼犬的小肠、大肠、肠系膜淋巴结、心、肝、肺、脾等进行组织学观察,结果表明:该病的主要发病部位在肠道和心脏,病犬肠道各段黏膜上皮细胞均坏死、脱落,固有膜暴露。肠腺上皮细胞也有程度不同的坏死、脱落。心肌细胞变细、变长,局部断裂、崩解,间质水肿,心肌毛细血管扩张、充血。脾脏和淋巴结中淋巴细胞数量减少。其他各器官都有不同程度的充血、出血以及炎性细胞侵润。     

应用PCR检测猪细小病毒

根据GenBank已公布的猪细小病毒NADL-2株的基因序列,设计并合成了1对寡核苷酸引物,通过PCR扩增反应条件的优化,成功地从猪细小病毒感染的组织和细胞中扩增出882bp片段。利用该方法对临床上的6份猪流产病料的检测,查出阳性4份。本试验建立的PCR诊断方法能快速、特异地诊断出猪细小病毒。     

小鹅瘟病毒的分离与初步鉴定

从死亡的具有典型小鹅瘟症状的7日龄雏鹅肝中分离到1株病毒．选用未免疫小鹅瘟疫苗的健康母鹅所产的12日龄鹅胚，进行鹅胚接种试验，雏鹅表现出典型鹅瘟临床症状和剖检特征；鸡胚致死率达到25％；不能凝集多种动物红细胞；能凝集黄牛精子，经琼脂扩散试验，用此株病毒感染的鹅胚液能与小鹅瘟病毒阳性血清发生特异性反应．综上所述，这株病毒初步鉴定为小鹅瘟病毒．     

昌黎保护区浮游植物的群落结构特征及变化趋势

为掌握昌黎黄金海岸国家级自然保护区近海岸水域生态环境的变化趋势,于1999—2013年对该保护区海域开展了连续15年的生态调查工作。结果表明:保护区浮游植物共计3门23科43属136种,其中硅藻116种,甲藻19种,金藻1种;种类数年际变化呈下降趋势,优势种年际变化差异极显著;15年中浮游植物细胞密度出现两个高峰期;种类数年际变化与p H呈显著负相关关系(r=-0.565,P<0.05),而年际的Shannon-Wiener指数(H')与盐度呈显著正相关关系(r=0.521,P<0.05),这表明影响浮游植物种类组成的主要因素为p H和盐度;浮游植物种类数与浮游动物密度呈显著负相关关系(r=-0.553,P<0.05),这可能与两者间的捕食关系有关。     

Natural variation in a chloride channel subunit confers avermectin resistance in C. elegans

Resistance of nematodes to anthelmintics such as avermectins has emerged as a major global health and agricultural problem, but genes conferring natural resistance to avermectins are unknown. We show that a naturally occurring four-amino-acid deletion in the ligand-binding domain of GLC-1, the alpha-subunit of a glutamate-gated chloride channel, confers resistance to avermectins in the model nematode Caenorhabditis elegans. We also find that the same variant confers resistance to the avermectin-producing bacterium Streptomyces avermitilis. Population-genetic analyses identified two highly divergent haplotypes at the glc-1 locus that have been maintained at intermediate frequencies by long-term balancing selection. These results implicate variation in glutamate-gated chloride channels in avermectin resistance and provide a mechanism by which such resistance can be maintained.     

半番鸭新型小鹅瘟病毒病研究简报

2015年2月以来,福建省漳州、漳浦、龙海等地饲养的半番鸭群流行一种以软脚、短嘴、生长障碍为临床特征的新疫病(暂名鸭短嘴矮小综合征),经流行病学调查、血清学和病原学鉴定,结果表明:该病病原为新型小鹅瘟病毒或小鹅瘟病毒变异株。鉴于该病以短喙和生长障碍为临床特征,故将该病原命名为短嘴型小鹅瘟病毒。     

藏獒细小病毒病的病理组织学研究

采用光镜、电镜及特殊染色技术对4例确诊为犬细小病毒病的藏獒进行了病理学研究.结果表明:病变主要集中在肠道、肠系膜淋巴结以及心脏;整个肠黏膜上皮广泛变性、坏死脱落,肠绒毛裸露,肠腔中有大量变性、坏死、脱落的上皮细胞及炎性渗出物,肠黏膜固有层充血、出血,并有大量炎性细胞浸润,肠黏膜上皮杯状细胞程度不等的增生;肠系膜淋巴结出血、淋巴细胞坏死及急性淋巴结炎;心肌纤维程度不等变性、坏死、崩解,肌纤维间程度不等的水肿及炎性细胞渗出;其他各器官还可见程度不等的淤血、出血、变性、坏死及炎性细胞浸润.     

猪细小病毒病弱毒疫苗的保存期试验

将2批猪细小病毒病弱毒疫苗分别在2—8℃保存11个月、12个月、13个月,-20℃保存22个月、24个月、26个月,进行物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、安全试验及免疫效力试验,探讨不同保存条件和保存期对疫苗的影响。结果表明:物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验均符合《中国兽药典》的要求。安全试验每批次疫苗接种乳鼠全部健活;以10头份/头的剂量接种PPV HI抗体阴性猪,接种后定期采集血样和鼻肛分泌物进行病毒分离,结果均为阴性。疫苗在2—8℃保存至13个月,-20℃保存至26个月TCID_(50)均≥10~(6.25)笛/头份;接种PPV HI抗体阴性豚鼠抗体全部转为阳性;疫苗免疫PPV HI抗体阴性猪,免疫后1个月、7个月分别用PPV强毒攻击获得100%保护。     

一株H3N2犬源猫流感病毒NP 基因的遗传变异性分析

从被感染猫体内分离出流感病毒,利用RT-PCR扩增NP基因,分析其遗传变异性.与NCBI上的14株流感病毒的NP全基因序列进行比对分析,发现其与参考毒株的NP基因序列的相似性为79.3％～99.7％,其中与感染株A/canine/Guangdong/1/2007(H3N2)的NP基因序列的相似性最高,为99.7％.基因序列比对发现,编码区存在5处突变:A33G、A81G、C235T、G345A、A567G;氨基酸仅存在1处变异:I189M.研究结果表明,犬流感病毒在犬和猫之间存在跨中间传播,虽然变异系数不高,但是567位碱基突变所造成的氨基酸突变为NP基因的遗传性和种间特异性的研究提供了参考.