绣线菊属植物的DNA提取和RAPD引物筛选

以10种绣线菊属植物资源为材料,分别用SDS法、高盐低pH法及改良的CTAB法对幼嫩叶片进行DNA提取并进检测比较,利用经过检测的模板对RAPD引物进行筛选。结果表明：采用改良的CTAB法提取的DNA可以用于RAPD分析。对200条10碱基的RAPD引物进行了初筛和复筛,筛出了30条扩增多态性强、稳定性好的引物,作为全部基因组的扩增引物。     

鼠尾草属植物基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以鼠尾草属植物叶片为材料,提取基因组DNA,并对RAPD反应条件进行了系统优化.结果表明,采用核DNA法提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析;RAPD扩增最佳反应体系为20μl反应体系中,10×buffer 2.0μl,模板DNA 20 ng,Mg 浓度2.0 mmol/L,引物浓度0.6μmol/L,dNTPs浓度0.2mmol/L,Taq酶1.0U.扩增反应程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1main,72℃延伸2main;40个循环;72℃后延伸10main,4℃保存.     

油葵种子DNA提取和RAPD反应体系的优化

[目的]为利用RAPD技术进行油葵的亲缘关系分析及杂种鉴定奠定基础。[方法]以6种杂交油葵种子为试材,采用改良的CTAB法提取油葵基因组DNA,并对提取DNA的浓度和纯度进行测定。通过单因子梯度试验,筛选出优化、稳定的RAPD-PCR反应体系。[结果]采用改良CATB法提取的油葵DNA质量好、得率高,且无蛋白质和酚类的污染。油葵的最适RAPD-PCR反应体系为:2.0μl 10×Buffer、2.0 mmol/L Mg2+、150μmol/LdNTPs、1.5UTaq酶、2.0 ng/μl DNA模板、0.25μmol/L引物,总体积为20.0μl。利用该体系对不同含油量的6个油葵杂交种进行扩增,均表现为带形清晰稳定、带数适宜。[结论]该RAPD技术体系适用于各种油葵杂交种的DNA分析。     

蜜蜂DNA提取纯化与RAPD反应体系的建立

以意大利蜜蜂为材料，研究了蜜蜂DNA的提取以及对RAPD分析的影响因素，包括模板浓度、Mg^2 、dNTP和引物，建立了适于蜜蜂RAPD分析的PCR反应体系，即20μL反应体系中，包括10mmol／L Tris—HCl(pH8．3)、50mmol／L KCl、20～60ng DNA、3．0mol／L MgCl2、0．2mmol／L dNTP、0．5μmol／L随机引物和1．5unit Taq聚合酶。扩增程序为：94℃预变性5min，94℃变性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，40个循环：最后在72℃延伸10min．     

黄麻DNA提取与RAPD反应体系的建立

以假黄麻、假长果、越南圆果 (圆果种黄麻 )等为材料 ,研究了黄麻 DNA的提取方法以及对 RAPD分析的影响因素 ,包括模板浓度、Mg2 + 、d NTP、引物和 Taq酶等 ,建立了适于黄麻种质 RAPD分析的 PCR反应体系 .即在 2 5μL反应体积中 ,Tris- HCl(p H8.0 )、KCl、Mg Cl2 、d NTP、随机引物的浓度分别为 10 mmol· L-1、5 0mmol·L-1、2 .5 mmol· L-1、15 0 μmol· L-1、0 .2 μmol· L-1,并含有 30 - 60 ng DNA与 1.5 U Taq DNA聚合酶 .扩增程序为 :94℃预变性 5 min;然后 94℃ 30 s,37℃ 1.5 min,72℃ 1min,4 1个循环 ;最后 72℃延伸 7mi     

台湾杉DNA提取及RAPD反应体系的建立

台湾杉富舍多糖和多酚等物质,这对获取高质量的DNA造成了困难,采用常规CTAB法和改良的CTAB法分别对台湾杉DNA的提取进行了研究.结果表明,常规CTAB法提取的DNA含杂质多、难溶解、易降解;改良的CTAB法提取的DNA质量高,A260/A280比值在1.8左右,每1.0 mg干样可获取DNA200～600ng左右;电泳检测表明,所获得的DNA完整、无降解.通过对台湾杉RAPD-PCR反应体系中的各个影响因素进行优化,建立了台湾杉RAPD扩增分析的稳定反应体系.即20μL反应体系中舍1UTaqDNA聚合酶,0.2 mmol·L-1 dNTPs,1.8 mmol·L-1 Mg2 ,0.4μmol·L-1引物,40 ng模板DNA.应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱,带型清晰,重复性好,为进一步开展台湾杉的保育遗传学研究奠定了基础.     

芨芨草基因组DNA提取与RAPD反应体系优化

本文选出适合芨芨草Achnatherum splendens (Trin.) Nevski基因组DNA提取方法,对RAPD反应体系中的一些重要参数进行优化,包括模板浓度、Mg2+、dNTP、引物和Taq酶浓度,建立了适合芨芨草RAPD分析的PCR反应体系.即在12.5uL的反应总体积中Mg2+浓度为1.5mmol·L-1,dNTPs 浓度0.2mmol·L-1,Taq酶0.5U,20ng模板DNA,10bp附机引物3.2pmol.反应程序为:前6个循环为95℃变性30s,35℃复性45s,72℃延伸80s,后36个循环为94℃ 45s,36℃ 40s,72℃ 70s,最后72℃延伸10 min.该反应体系具有良好的稳定性和重复性.     

荸荠基因组DNA的提取及RAPD反应体系的建立

以荸荠叶状茎为试验材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,并对其RAPD反应体系进行优化,建立了荸荠的RAPD—PCR优化反应体系和程序。结果表明,提取的基因组DNA纯度和完整性较好,OD260/OD280值在1．8～2．0之间,DNA无降解现象,完全可以满足RAPD—PCR扩增要求。建立了荸荠RAPD反应体系：总体积为25μl,各有关成分的最佳浓度分别为25mmol／L Mg^2＋,1．0UTaqDNA聚合酶,0．2mmol／L dNTPs,1μmol／μl引物,1．5ng／μl DNA模板。PCR反应程序为：94％预变性3min;94℃变性1min,37℃退火30s,72℃延伸60s,40个循环;最后72％延伸10min。     

春兰基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

以春兰为研究材料,对春兰基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化。结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量春兰基因组DNA。电泳检测表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足R-APD等分子标记分析的需要。同时对春兰RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合春兰R-APD分子标记的最佳反应体系,即20μl反应体系中含1UTaqDNA聚合酶,60μmol／L dNTPs,2．25mmol／L Mg^2＋,1．0μmol／L引物,1．5ng／μl模板DNA。     

苜蓿基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨

比较了CTAB法和SDS法提取苜蓿基因组总DNA的效果,这两种方法得到的全基因DNA具有较好的完整性,但从DNA的提取纯度可以看出,CTAB法优于SDS法.实验对苜蓿RAPD反应条件进行了优化:在25μL反应体系中,含10×Buffer(20mM MgCl2),1UTaq酶,25ng的模板DNA,150 mol/L的dNTPs,0.2 mol/L引物.PCR反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性15 s,37℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环;72℃延伸10 min;最后4℃保存.     

刺参基因组DNA的提取及RAPD条件的优化

以野生刺参为试验材料,探索了刺参基因组的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,建立了刺参的优化反应体系和程序.反应体系总体积为25μL,各组分的含量为10倍缓冲液2.5μL,Mg2 (20 mmol·L-1)3μL,TaqDNA聚合酶(1 U·μL-1)1.5μL,dNTPs(10 mmol·L-1)2.5μL,随机引物(5pmol·μL-1)1μL,模板DNA(40 ng·μL-1)2.5μL.PCR循环程序为96℃预变性5 min;94℃变性0.5 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min.     

石鲽基因组DNA的提取及其RAPD体系的优化

[目的]研究石鲽基因组DNA的提取及其RAPD体系的建立和优化。[方法]以石鲽为试材,按常规酚/氯仿抽提法提取其基因组的DNA,对影响RAPD反应的各因素进行优化,建立了石鲽的最佳RAPD反应体系和程序。[结果]采用常规酚/氯仿抽提法获得的DNA完全能够满足RAPD分析的要求。通过优化建立一套适合石鲽的稳定的RAPD反应体系:反应体系总体积为25μl,包括10×buff-er2.5μl,MgCl22 mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物0.2μmol/L,模板30 ng,Taq酶1 U。扩增程序为:94℃预变性5 min,45次PCR循环(94℃变性45 s,36℃退火45 s,72℃延伸2 min和72℃延伸10 min。利用该体系对OPK和OPV系列共40条引物进行扩增,发现其中部分引物能产生稳定、清晰的条带。[结论]该体系为石鲽遗传多样性以及相关分子标记的研究奠定了基础。     

藏獒基因组DNA提取及RAPD扩增体系的优化

采用改进的盐析法提取了藏獒血液基因组DNA,并对RAPD扩增体系进行了优化。结果表明,改进的盐析法所提取的藏獒基因组DNA完整、无降解,完全可以满足RAPD分析的需要;20μL的最佳扩增体系组成为2.50 mmol/L Mg2+、0.60 mmol/L dNTP、50 ng模板DNA、1.25U Taq酶和0.3μmol/L随机引物,最佳退火温度为36.5℃。     

秦巴山区野生山丹百合DNA提取与RAPD反应体系建立

以秦巴山区野生山丹百合幼嫩叶片为材料,采用常规CTAB法提取百合基因组DNA,得到的DNA基本能满足RAPD-PCR分析。通过单因素逐一递进优化,得到在20μL的PCR反应体系中,野生山丹百合RAPD分析的最佳反应体系为:40 ng的模板DNA,0.4μmol/L随机引物,2.25 mmol/L Mg2 ,0.2 mmol/LdNTPs,Taq DNA聚合酶1.5U,1×buffer缓冲液,ddH2O补足20μL。RAPD扩增反应程序为:94℃预变性4 min,94℃30 s,37℃45 s,72℃90 s,35个循环,最后72℃10 min,4℃保存。该反应体系具有较好的稳定性及可重复性。     

贵州野生淡黄花百合RAPD反应体系的建立

以贵州林下野生淡黄花百合(Lilium sulphureum Baker)幼嫩叶片为材料,采用改良的CTAB法提取百合基因组DNA,得到了较高质量的DNA.并对影响随机扩增多态DNA性(RAPD)反应的主要因素进行了优化,建立并优化了野生淡黄花百合的RAPD反应体系及程序.优化的20μL反应体系中包含20 ng模板DNA,2.0 mmol/L Mg2+、0.25 mmol/L dNTPs、1.0 U Taq DNA聚合酶、10×Buffer 2μL、0.4 μmol/L随机引物、ddH2O补足至20μL.优化的RAPD扩增程序为94℃3 min;94℃50 s,37℃40 s,72℃80 s,40个循环;72 ℃ 10 min,4℃保存.该反应体系具有较好的稳定性及可重复性,适合贵州野生淡黄花百合遗传多样性研究.