生防绿色木霉M1M2的生物学特性及抑菌研究

为进一步开发利用生防绿色木霉菌M1M2,研究了木霉菌菌株M1M2的最适培养基、温度、光照、pH及其分生孢子的致死温度,并采用平皿对峙培养法测定了其对6种病原菌的抑菌率。结果表明:M1M2最适培养基为糖浆培养基,最适生长和产孢条件为温度25~30℃,pH 5,24h全光照,其分生孢子致死温度为52℃;对向日葵黄萎病菌、马铃薯立枯丝核病菌、番茄灰霉病菌和大豆菌核病菌的抑菌率为100%。     

2株木霉抑菌效果及其促植物生长机制

[目的]探究绿色木霉(Trichoderma viride)和棘孢木霉(T.asperellum)对8种植物病原菌的抑制效果及其促植物生长机制,为木霉防治植物病害和促进植物生长等的田间应用提供理论参考.[方法]采用平板对峙法和固体稀释法,检测2株木霉及其活性代谢产物对8种植物病原菌(棉花枯萎病菌、茄子菌核病菌、番茄链格孢病菌、茄腐镰刀病菌、尖孢镰刀病菌、枸杞炭疽病菌、番茄灰霉病菌和番茄匍柄霉病菌)的抑制率;采用平板透明圈法、Salkowski比色法及钼锑抗比色法测定2株木霉的生防因子、生长素及溶磷效果;通过辣椒盆栽试验,测定2株木霉发酵液不同稀释倍数处理对辣椒叶片叶绿素含量及3种抗性酶[过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)]活性的影响.[结果]平板对峙试验结果显示,2株木霉对8种植物病原菌的抑菌率均在60.00%以上;绿色木霉发酵11 d时其无菌滤液对茄子菌核病菌的抑制率达96.78%,但对其他病原菌的抑制率不高;棘孢木霉发酵11 d时无菌滤液对茄子菌核病菌、枸杞炭疽病菌和番茄链格孢病菌的抑制效果较好,抑菌率分别为99.08%、85.33%和68.65%,发酵9 d时无菌滤液对番茄灰霉病菌的抑制率为72.08%;2株木霉均可产生蛋白酶、几丁质酶、纤维素酶和铁载体4种生防因子;绿色木霉发酵9 d时分泌吲哚乙酸(IAA)量为3.389 mg/L,在PKO无机磷液体培养基培养7 d后溶磷量为67.236μg/mL;棘孢木霉发酵11 d时分泌IAA量达11.638 mg/L,在PKO无机磷液体培养基培养7 d后溶磷量达151.905μg/mL;盆栽试验结果表明,喷施不同稀释倍数的棘孢木霉发酵液较绿色木霉发酵液更能提高辣椒叶片叶绿素含量及3种抗性酶活性.[结论]供试2株木霉对8种植物病原菌均具有抑制能力并存在多种生防因子和促植物生长能力,其中棘孢木霉较绿色木霉具有更好的抑菌和促进植物生长及提高植物叶片叶绿素含量和抗性酶活性的能力,具有较好的田间应用潜力.     

绿色木霉·烯酰吗啉水分散片剂对番茄灰霉病的防治效果

本文通过对峙培养,菌间交互作用机制观察及拮抗菌培养液对病菌生长影响的测定,探讨绿色木霉菌对番茄灰霉病菌的拮抗作用及其作用机制.室内及田间试验表明,绿色木霉·烯酰吗啉水分散片剂300～600倍液,对番茄灰霉病的防效为83%～95%,且对作物安全;其对病原茵的抑制作用是通过代谢产物(酶或有毒物质)的作用表现出来的.     

毛壳菌几丁质酶的酶学性质及抑菌活性研究

【目的】研究毛壳菌(Chaetomiumsp.YMF1.00843)产胞外几丁质酶的酶学性质及抑菌活性,为几丁质酶的抑菌作用机理研究提供依据。【方法】利用蛋白活性电泳方法纯化几丁质酶液,测定几丁质酶的酶学性质,并用酶液浸泡病原菌菌块,研究酶液的抑菌活性。【结果】用蛋白活性电泳方法得到几丁质酶的纯酶液,经检测为电泳纯条带,分子质量为43ku。毛壳菌几丁质酶的最适反应温度为40℃,最适pH为6,40℃以下保温30min均能保持其初始活性,在pH 5~9保温30min仍旧具有较高的活性,Ca2+和Zn2+能明显增强几丁质酶的活性,其纯酶液能抑制立枯丝核菌和烟草赤星病菌的菌丝生长。【结论】毛壳菌几丁质酶在比较温和的条件下能保持一定的活性,纯酶液对部分病原真菌有较强的抑制作用。     

绿色木霉菌发酵液的抑菌活性及稳定性

对绿色木霉菌(Trichoderma viride)发酵液在不同条件下的抑菌活性及稳定性进行了研究.结果表明,绿色木霉菌发酵液对真菌和细菌均具有较强的抑菌活性.在对真菌的抑菌试验中,对芒果胶孢炭疽菌(Colletotri-chum gloeosporioides Penz.)的抑菌效果最强,抑菌率为75.18%;在对细菌的抑菌试验中,对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)和金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)的抑菌作用最强,抑菌圈直径分别为37.33和34.     

木霉菌Td系列菌株代谢产物的室内抑菌谱研究

利用摇床液体发酵、氯仿萃取木霉菌的代谢产物,采用菌丝生长速度法测定了3个木霉菌菌株的发酵代谢产物对禾谷类镰刀病菌、番茄枯萎病菌、苹果轮纹病菌、立枯丝核菌、苹果炭疽病菌、玉米弯胞病菌和花生网斑病菌的抑菌作用。结果表明,3个木霉菌株代谢产物对7种病原真菌均具有抑制作用,且抑菌作用强度和抑菌谱存在一定的菌株特异性。木霉菌株Td10的代谢产物对禾谷类镰刀病菌和立枯丝核菌抑制作用最强,Td31的代谢产物对苹果轮纹病菌和苹果炭疽病菌抑制作用最强,而Td100的代谢产物对禾谷类镰刀病菌和立枯丝核菌抑制作用较强;3个木霉菌株的代谢产物对花生网斑病菌抑制作用均较弱。     

生防木霉菌的分离和筛选

通过生长速率法和平板对峙法的复合筛选体系,研究木霉菌株对棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani Kühn)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum(Schl),f.sp.cucumerinum Owen)和马铃薯枯萎病菌(Fusarium oxysporum Schlecht)3种病原菌的抑菌效果.结果表明:木霉菌株198-2b-2在第七天对棉花立枯病菌、黄瓜枯萎病菌和马铃薯枯萎病菌的抑菌率分别达62.2％、62.5％和67.6％;木霉菌株198-4a-1在第七天对3种供试病原菌的抑菌率分别达62.2％、60.9％和66.2％.说明木霉菌株198-2b-2和198-4a-1的抑菌效果较好,生防潜力较大,可用于木霉生防作用的进一步研究.     

5个木霉菌株的抑菌谱及部分生物学特性

 5个木霉菌株在对峙培养中对水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌、棉花枯萎病菌、油菜菌核病菌等18种植物病原真菌和7株土壤习居镰刀菌都有明显抑制效果。哈茨木霉菌株Th-B的抑菌效果显著高于绿色木霉菌株LTR-2和其他3个菌株,哈茨木霉菌株Th-A和Th-B的产孢能力高于其他菌株,Th-B对辣椒灰霉病的预防效果达65.20%.     

绿色木霉·烯酰吗啉水分散片防治番茄灰霉病及大鼠急性毒性研究

[目的]为了确切评价绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂对番茄灰霉病的防治效果。[方法]通过对峙培养,菌间交互作用机制观察及拮抗菌培养液对病菌生长影响的测定,探讨绿色木霉菌对番茄灰霉病菌的拮抗作用及其作用机制。[结果]试验表明,绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂300~600倍液,对番茄灰霉病的防效为83%~95%,且对作物安全;其对病原菌的抑制作用是通过代谢产物(酶或有毒物质)的作用表现出来的。以昆明种大鼠为试验动物,观察1次灌胃不同剂量的生物农药绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂大鼠所产生的毒性反应和死亡情况,结果显示LD50>2150 mg/kg。[结论]生物农药绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂在农业生产中具有广阔的发展前景。     

绿色木霉·烯酰吗啉水分散片防治番茄灰霉病及大鼠急性毒性研究

[目的]为了确切评价绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂对番茄灰霉病的防治效果。[方法]通过对峙培养,菌间交互作用机制观察及拮抗菌培养液对病菌生长影响的测定,探讨绿色木霉菌对番茄灰霉病菌的拮抗作用及其作用机制。[结果]试验表明,绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂300～600倍液,对番茄灰霉病的防效为83%～95%,且对作物安全;其对病原菌的抑制作用是通过代谢产物（酶或有毒物质）的作用表现出来的。以昆明种大鼠为试验动物,观察1次灌胃不同剂量的生物农药绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂大鼠所产生的毒性反应和死亡情况,结果显示LD50〉2150 mg/kg。[结论]生物农药绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂在农业生产中具有广阔的发展前景。     

土壤中木霉的分离纯化以及对植物病原真菌的拮抗研究

从土壤中分离纯化获得3个木霉集合种:哈茨木霉(Trichoderma harzianum),绿色木霉(Trichoder-ma viride)和绿木霉(Trichoderma virens)。用这3种木霉菌分别与小麦纹枯病菌(Rhizoctonia solania)和番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)作平板对峙培养及显微观察,测定木霉菌对病原菌的抑制作用。结果表明:3种木霉菌对供试的2种病原菌抑菌强度不同,其中绿木霉对小麦纹枯病菌和番茄灰霉病菌都具有较好的拮抗作用;显微观察到木霉菌对病原菌菌丝的缠绕、使病原菌菌丝细胞质变稀薄、菌丝解体等现象。     

拟康氏木霉对蔬菜病原真菌的拮抗作用及对番茄灰霉病的防效的初步研究

通过对峙培养,测试了拟康氏木霉对灰葡萄孢霉、尖孢镰刀菌、番茄叶霉病菌、番茄早疫病菌、辣椒疫霉、辣椒炭疽菌的拮抗作用。对峙培养5d时对以上病原菌的抑制率分别为73％、62％、86％、77％、68％、91％。拮抗机制主要为竞争和抗生等。离体防治试验表明,拟康氏木霉孢子悬液对番茄灰霉病的防效显著,其浓度为106、107、108cfu／ml时,在离体茎段和叶盘上的防效分别为29．8％、53．8％、62．5％和59．1％、66．1％、70．3％;而在盆栽试验和大棚试验中的防效分别为48．3％、64．6％、68．3％和37．7％、46．2％、60．6％。浓度为107、108cfu／ml时防效在各试验中均达到甚至高于甲基托布津的防效。     

木霉菌对灰葡萄孢菌的拮抗作用

对采自宁夏14个市县的170份土样及其它材料进行分离,得到96个木霉菌株,采用形态分类方法鉴定出9种木霉菌以及2种未知名菌种．它们分别为哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、绿色木霉（T．viride）、长枝木霉（T．longibrachiatum）、康氏木霉（T．koningii）、拟康氏木霉（T．pseudokoningii）、项孢木霉（T．fertile）、黄绿木霉（T．aureoviride）、深绿木霉（T．atroviride）、钩状木霉（T．hamatum）以及T．sp1和T．sp2。拮抗作用和抑菌活性测定结果表明：11种木霉菌对葡萄、番茄和黄瓜灰霉病的致病菌——灰葡萄孢菌（Botrytis cinema Petssp．）均有不同程度的拮抗作用,其中哈茨木霉、绿色木霉、黄绿木霉、钩状木霉和T．sp1对病原菌的拮抗作用及抑菌活性显著,其生长速度比病原菌平均快1．1～3．0倍：在对峙培养中拮抗系数达Ⅰ级或Ⅱ级．其抑菌率高迭98．78％。     

绿色木霉防治温室灰霉病研究

[目的]研究绿色木霉活孢子制剂应用于温室蔬菜灰霉病的防治效果。[方法]采用固态发酵法制备绿色木霉NW-411活孢子制剂,稀释至106～107孢子/g进行大田防治试验,观察人工接种灰霉病的黄瓜及番茄植株的性状变化,统计防治效果。[结果]未经绿色木霉孢子稀释液处理的黄瓜及番茄植株均可被侵染,性状变化各异。绿色木霉孢子制剂对温室黄瓜及番茄灰霉病的防效显著,孢子浓度控制在2.3×10^6～2.3×10^7孢子/g最佳。可使黄瓜及番茄植株发病率分别降至4.2%和3.1%,与未处理的植株相比,发病率分别降低了29.8%和39.1%,生物防治效果达到87.0%以上,且能明显增强植株长势。[结论]绿色木霉活孢子制剂不但对灰霉病防效显著,而且能明显增强温室植株长势,是一种安全、环保的生物制剂,在大规模绿色蔬菜生产中值得推广。     

Are mycoparasitism and chitinase production species or isolate dependent in Trichoderma ?

The relationship between taxonomic status of Trichoderma spp., chitinase production in solid substrate fermentation (SSF) on four media and mycoparasitism in dual culture (confrontation assay)against four plant pathogenic fungi was studied. Seventy five Trichoderma isolates belonging to 35species have been screened. The plant pathogenic fungi used in confrontation assay were Botrytis cinerea , Fusarium oxysporum f. sp. dianthi , Rhizoctonia solani and Sclerotinia sclerotiorum . The SSF media contained wheat bran, crude chitin (from crab shells, SIGMA) and salt solutions. The best performing isolates in mycoparasitism tests were Trichoderma flavofuscum, T. harzianum, T.inhamatum, T. koningii and T. strigosum. Some isolates exhibiting good mycoparasitism produced chitinase in SSF only at low or medium level. In contrary there were isolates with excellent extracellular chitinase production but their biocontrol potential did not belong to the leading group.Statistical methods have been used to evaluate the data.……     

鄂西北野生植物蒲公英提取物对几种真菌的抑制活性

以采自鄂西北山区的蒲公英无水乙醇提取物为供试药液,测定了其对立枯丝核菌Rhizoctonia solani、灰葡萄孢菌Botrytis cinerea、齐整小核菌Sclerotium rolfsii、终极腐霉Pythium ultimum和尖镰孢菌黄瓜专化型Fusarium oxysporum f.sp cucum-ber的抑制活性。结果表明:不同浓度的蒲公英提取物对供试真菌菌丝生长的抑制作用均随菌丝生长时间的延长而降低。蒲公英提取物对这5种真菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用均随着提取物浓度的升高而增强,且对终极腐霉、尖镰孢菌黄瓜专化型、立枯丝核菌和灰葡萄孢菌均有较好的抑制作用,而对齐整小核菌的抑制作用较弱。     

哈茨木霉对4种番茄病原真菌抑制作用的研究

试验研究了哈茨木霉对番茄灰霉病、叶霉病、枯萎病及褐斑病的抑制作用。结果表明,哈茨木霉与各病原真菌对峙培养以及在培养基中加入孢子悬浮液、代谢液,多数情况下,哈茨木霉对供试的番茄病原真菌具有较好的抑制效果。显微镜下观察发现,哈茨木霉菌丝缠绕在灰霉病菌的菌丝上,与枯萎和叶霉病菌的菌丝平行生长、产生附着枝结构附着于病原真菌菌丝上,穿透褐斑病菌菌丝使其菌丝发生断裂。上述结果说明,哈茨木霉对供试各病原真菌的抑制作用主要是营养竞争和空间竞争以及重寄生作用。     

绿色木霉菌糠发酵物对常见黄瓜土传病害的防治

在平菇菌糠中分离出一株抗性较高的绿色木霉菌,通过平板对峙实验,考察绿色木霉菌对黄瓜立枯病及枯萎病致病菌的抑制效果。结果表明:绿色木霉菌对两种病原菌的抑制率分别达到了66.8%和87.5%,采用绿色木霉菌接种到菌糠发酵,其发酵菌糠拌土比例为10%且拌土时间为6 d时,对黄瓜立枯病及枯萎病的防治效果最高,分别达到了85.6%和74.3%。绿色木霉菌糠发酵物在黄瓜土传病害的防治上能起到一个很好的效果,菌糠能为绿色木霉菌的定植提供一个较为理想的环境,也能为植物的生长提供一定的营养,从而增强其抗病的能力。