苹果细菌人工染色体双色DNA纤维荧光原位杂交体系的建立及应用

【目的】建立苹果DNA纤维荧光原位杂交（Fiber FISH）技术体系,从而为利用该技术确定苹果基因组DNA序列间的位置关系、构建精细物理图谱等方面的应用奠定基础。【方法】以‘Florina’苹果幼叶为试材,通过液氮研磨,尼龙膜过滤和TritonX-100去除叶绿素等步骤提取细胞核。细胞核经碱裂解,采用盖玻片拉伸方法制备DNA纤维。比较细胞核不同裂解时间和在5种不同包被类型的载玻片上DNA纤维拉伸的效果。用碱裂解方法提取来自苹果‘Florina’自交不亲和S9基因座的4个细菌人工染色体（Bacterium Artificial Chromosome）BAC 34G16、 BAC 45M19、BAC 70J19和BAC 69A4。提取的质粒经PEG纯化,用地高辛或生物素标记探针。探针与DNA纤维制片经过80℃变性、37℃杂交2-3 d和洗片,采用“三明治”方法进行信号放大和检测,在荧光显微镜下观察试验结果。【结果】建立了以苹果幼叶为材料,液氮研磨提取细胞核,碱裂解细胞核和盖玻片拉伸制备DNA纤维的试验方法。提取的细胞核纯净、结构完整,细胞核浓度＞5×103个/μL。试验结果表明,细胞核裂解4 min,在多聚赖氨酸包被的载玻片上制备的DNA纤维平直、伸展均匀,纤维量多、细长,效果好。经原位杂交和信号检测,获得了清晰的、具有Fiber FISH典型特征的“念珠状”杂交信号。对已知大小和位置关系的两个BAC克隆BAC 34G16和BAC 45M19进行杂交信号测量和分析,得出BAC 克隆大小（Y,Kb）与信号长度（X,μm）的相关方程为Y=3.47X（R2=0.9215）,其斜率即为该试验技术体系Fiber FISH的分辨率3.47 kb•μm-1。试验对未知大小和位置关系的两个BAC克隆BAC 70J19和BAC 69A4成功地进行了鉴定,它们大小分别为(112.1±18.4)kb和(133.2±16.3 )kb,之间有（90.2±7.3）kb的重叠区域。【结论】建立了以苹果幼叶提取细胞核,制备DNA纤维和原位杂交的方法,获得了高分辨率的苹果DNA纤维原位杂交试验技术体系。     

适于荧光原位杂交的大薯叶片染色体制片技术

为克服利用根尖制备染色体标本的局限性,拟通过优化酶解去壁低渗法中的材料幼嫩程度、预处理方法以及酶解时间,建立大薯嫩叶染色体制备技术体系。结果表明:取刚展开的大薯嫩叶,用0.002 mol·L?1 8?羟基喹啉于4 ℃下预处理2 h,用3.5%纤维素酶和1.75%的果胶酶混合溶液于37 ℃下解离1 h,能获得较好的大薯染色体制片。最后,以大薯45S rDNA 序列为探针,对有丝分裂间期和中期细胞进行荧光原位杂交检测,杂交信号清晰稳定。本研究建立的适于荧光原位杂交的大薯嫩叶染色体制备技术可为分子细胞遗传学研究提供一种简便实用的细胞学方法。     

鲤45S rDNA的染色体荧光原位杂交定位

应用荧光原位杂交技术,通过设计位于5.8S rDNA、18S rDNA和非转录IGS区域的3条探针CAAG1191、CAAG1845和CAAG3602,分别对散鳞镜鲤Cyprinus carpio var.scattered mirror和松浦鲤Cyprinus carpio Songpu的45S核糖体DNA(ribosomal DNA,rDNA)进行染色体定位及共定位.结果表明:45S rDNA均位于两品种鲤一对近端着丝粒染色体的短臂末端,具有染色体特异性,表明45S rDNA序列的探针能够在鲤细胞遗传学研究中用于标识其所在染色体,并与鲤遗传连锁图谱中长度为227 cM的1号连锁群相对应;两品种鲤的染色体数目均为2n=100,45S rDNA在鲤基因组内仅定位于一对同源染色体,不存在复制位点,证实了鲤基因组在全基因组复制事件之后又经历了重新二倍化过程.     

鲤45S rDNA的染色体荧光原位杂交定位

应用荧光原位杂交技术,通过设计位于5.8S rDNA、18S rDNA和非转录IGS区域的3条探针CAAG1191、CAAG1845和CAAG3602,分别对散鳞镜鲤Cyprinus carpio var.scattered mirror和松浦鲤Cyprinuscarpio Songpu的45S核糖体DNA(ribosomal DNA,rDNA)进行染色体定位及共定位。结果表明:45S rDNA均位于两品种鲤一对近端着丝粒染色体的短臂末端,具有染色体特异性,表明45S rDNA序列的探针能够在鲤细胞遗传学研究中用于标识其所在染色体,并与鲤遗传连锁图谱中长度为227 cM的1号连锁群相对应;两品种鲤的染色体数目均为2n=100,45S rDNA在鲤基因组内仅定位于一对同源染色体,不存在复制位点,证实了鲤基因组在全基因组复制事件之后又经历了重新二倍化过程。     

用荧光原位杂交技术检测黑麦染色质

荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization ,FISH）是一种快速、准确、直接检测和定位外源染色质的新技术。本研究荧光原位杂交用毛地黄毒苷-11-dUTP标记黑麦总DNA作探针,以检测小麦中黑麦染色质。结果如下：八倍体小黑麦（2n=8x=56）有丝分裂中期有14条染色体显示黄色,42条染色体显示红色,红色间期核显示有14个黄色亮点,表明这八倍体小黑麦含14条黑麦染色体。八倍体小黑麦中黄色黑麦染色体显C-带和H-带的末端有绿色的带。这是由于黑麦染色体末端结构异染色质含量高所致。黑麦附加系2R的间期细胞核中有1 ～ 2个黄色亮点。这表明2R含有1至2条黑麦染色体。     

家蚕微卫星标记的荧光原位杂交研究

家蚕既是重要的农业经济昆虫,又是遗传学研究常用的实验动物和现代分子生物学研究的良好材料. 目前已有多种分子标记被用于家蚕遗传连锁图的构建, 但人们对这些分子标记在染色体上的物理定位仍知之甚少. 该文以微卫星(SSR03)序列为探针, 对家蚕染色体进行荧光原位杂交, 在减数分裂的间期、粗线期、中期染色体上都观察到单一荧光信号, 表明该序列为单一序列微卫星遗传标记. 利用Image J 软件测算杂交信号在该染色体上位置, 信号位点距离近端的相对长度与该染色体相对长度比值为12.502±0.470. SSR03可作为家蚕染色体物理图的遗传标记.     

荧光原位杂交技术的研究进展及其在染色体识别应用中的展望

荧光原位杂交技术是一门新兴的分子细胞遗传学技术,主要介绍了该技术的产生过程、基本原理、探针类型和标记方法以及发展历史,并对该技术在染色体识别中的应用作出展望。     

荧光原位杂交技术及其研究现状

从荧光原位杂交探针的类型、探针的标记方法、探针和染色体的杂交、染色体显带、荧光显微镜检测等方面介绍了荧光原位杂交技术,并对荧光原位杂交技术目前的发展状况进行了阐述.     

荧光原位杂交在作物遗传育种研究中的应用

荧光原位杂交是一种原位杂交新技术，具有快速，灵敏，准确和有效等特点，它采用生物示记探针，能够将特定的ＤＮＡ或ＲＮＡ序列直接定位于染色体上，该文就荧光原位杂交技术在作物遗传育种研究中的应用进行综述，主要包括以下方面：１）检测重复ＤＮＡ序列及多拷贝基因家族；２）鉴定异源多倍体物种中的异源染色体或染色体片段；（３）检测和定位低拷贝或单拷贝ＤＮＡ序列。随着一些新技术的发展，ＦＩＳＨ技术将会在作物育种的更多     

家蚕微卫星标记的荧光原位杂交研究

家蚕既是重要的农业经济昆虫,又是遗传学研究常用的实验动物和现代分子生物学研究的良好材料. 目前已有多种分子标记被用于家蚕遗传连锁图的构建, 但人们对这些分子标记在染色体上的物理定位仍知之甚少. 该文以微卫星(SSR03)序列为探针, 对家蚕染色体进行荧光原位杂交, 在减数分裂的间期、粗线期、中期染色体上都观察到单一荧光信号, 表明该序列为单一序列微卫星遗传标记. 利用Image J 软件测算杂交信号在该染色体上位置, 信号位点距离近端的相对长度与该染色体相对长度比值为12.502±0.470. SSR03可作为家蚕染色体物理图的遗传标记.     

中国水仙REMAP反应体系的建立和优化

对影响中国水仙“金盏”品种的REMAP-PCR扩增反应的各个参数进行优化,建立适合中国水仙的REMAP反应体系20μL,包括如下成分:模板DNA 40 ng、dNTPs 0.2 mmol·L-1、引物0.45μmol·L-1、Taq酶1U和10×Buffer(含Mg2+)2μL.扩增程序为反应程序:94℃预变性4 min;94℃变性40 s,55℃退火40 s;72℃延伸90 s,共35个循环;最后72℃延伸10 min,4℃保存.该反应体系标记点位清晰、稳定、重复性好,适宜中国水仙的REMAP分析,为应用REMAP技术鉴定中国水仙种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础.     

单瓣和重瓣花中国水仙的核型比较

以中国水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)为材料,研究了不同预处理对根尖细胞中期分裂指数的影响,并对单瓣和重瓣花中国水仙的核型进行了比较和分析。结果表明:用α-溴萘饱和水溶液在活体条件下处理根尖4 h,中期细胞的分裂指数最高,且染色体分散、清晰;单瓣和重瓣花中国水仙均为同源三倍体;单瓣花的核型公式为2n=3x=30=6m+6sm+18st(3SAT),核型类型为3C;重瓣花为2n=3x=30=6sm+24st(6SAT),核型类型为进化程度更高的4C。     

荧光原位杂交(FISH)技术在转基因小鼠检测中的应用

制备转基因小鼠特有的DIG标记探针，应用染色体荧光原位杂交（FISH）技术，对转基因小鼠外周血细胞的遗传性状进行分析，检测其合子类型，以挑选纯合子小鼠用于保种。结果杂合型小鼠61％的细胞有一个荧光信号，而纯合型小鼠约24％的细胞有两个荧光信号，48％的细胞有一个荧光信号，野生型小鼠无荧光信号。因此染色体荧光原位杂交技术可作为检测转基因小鼠遗传特性的一种方法。     

中国水仙花芽分化期POD活性的变化

以中国水仙中的漳州产水仙和平潭产水仙为试材，研究了两产地水仙主、侧芽在形态分化期过氧化物酶（ＰＯＤ）活性的变化情况．结果表明：中国水仙从７月份开始ＰＯＤ活性逐渐上升，８月上旬后ＰＯＤ活性维持在较高水平之上，９１０月份ＰＯＤ活性开始急剧下降，至１０月中、下旬降至低谷．这种变化过程与花芽形态分化的进程基本一致．同时，平潭水仙主、侧芽的ＰＯＤ活性水平均高于漳州水仙，反映了平潭水仙多花枝的生理特点     

臭椿皮蛾幼虫和蛹脂肪酸组成研究

采用气相色谱技术,对臭椿皮蛾幼虫、蛹的脂肪酸组成和含量进行了分析。结果表明,臭椿皮蛾幼虫不饱和脂肪酸含量达80.77%,其中,油酸34.06%,亚油酸11.25%,亚麻酸35.46%;臭椿皮蛾蛹不饱和脂肪酸含量达73.67%,其中,油酸32.60%,亚油酸9.32%,亚麻酸31.75%。幼虫和蛹脂肪酸组成相近,其组成和含量均适于食用和药用。     

Effects of different plant growth inhibitors on growth and flowering of narcissus

This study was conducted to determine effects of four plant growth inhibitors viz. PP333, Het, CCC and B9 with different concentrations on growth and flowering of narcissus. The results indicated that the narcissus treated with certain concentration inhibitors could grow shorter plants with shorter scapes of flower and smaller leaves than the check, and the compact, straight and coordinate plants improve the decorative value obviously.     

薰烟和持续高温处理对中国水仙生长发育的影响

根据中国水仙种球休眠期对外界条件的要求，着重探讨了薰烟与持续高温处理对中国水仙种球生长发育的影响。结果表明，薰烟促进水仙生长的效果最佳，且产量较高，质量较好；适当的持续高温处理同样对水仙的生长发育有促进作用；但高于40℃的高温处理则对水仙的生长发育有明显的抑制作用。     

不同栽培基质对崇明水仙品质的影响

[目的]探讨不同栽培基质对崇明水仙营养和生殖生长的影响,为改善崇明水仙栽培技术落后现状提供参考依据.[方法]用9种复合基质(分别设置为C1～C9处理)栽培崇明水仙,在对比分析其营养生长和生殖生长阶段各项指标的基础上,采用层次分析法(AHP)对其品质进行综合评价.[结果]经栽培观察,C1处理(园土∶泥炭∶黄沙=3.0∶5.0∶2.0)和C2处理(园土∶泥炭∶珍珠岩=3.0∶5.0∶2.0)的崇明水仙的分株数、株高、叶片数、叶宽、叶厚、植株粗度、开花效果及子球发育状况均优于其他处理.经层次分析法综合评价,C1处理得分最高,为4.494分,表明C1处理对崇明水仙营养生长和生殖生长有明显优势;C2处理得分为3.178分,仅次于C1处理;其他处理的崇明水仙营养生长和生殖生长较差,得分为2.081～3.028分.[结论]园土∶泥炭∶黄沙(3.0∶5.0∶2.0)和园土∶泥炭∶珍珠岩(3.0∶5.0∶2.0)两种复合基质的配置方式更利于崇明水仙生长;建立的崇明水仙综合评价模型可供崇明水仙栽培和进行综合评价参考.