鸡输卵管生物反应器研究进展

鸡输卵管生物反应器是一种很有市场前景的生产药物蛋白的生物反应器。综述了激素对输卵管细胞和卵清蛋白基因的调控、输卵管组织特异性调控元件的研究、转基因鸡的制作途径、新型逆转录病毒载体在转基因鸡制作上的应用和国内研究现状、最新成果及发展前景等。     

转基因动物—乳腺生物反应器及其应用

转基因动物-乳腺生物反应嚣是高新生物技术的结晶。具有重要医疗价值的药用蛋白基因可以在动物乳腺中表达并源源不断地获得这些具有生物活性的基因产品。这是一种全新的药物生产模式,在未来的生物药业生产中将占主导地位。     

转基因螺旋藻的光生物反应器培养及鉴定

以本实验室构建的转胸腺素基因螺旋藻为藻种,利用中科院过程工程研究所研制的PhR-L20C光生物反应器,根据该反应器的各项性能指标和参数条件,采用本实验室优化过的培养条件,对转化藻进行高密度培养,初始pH值约为9.0,光照强度平均约为10 000 Lx,培养温度28~30℃,一个培养收获周期为10 d,平均生长速率为0.3 OD560.d-1,10 d后藻细胞OD560达3.0,最终藻细胞密度可达到1.3 g.L-1(干重);高密度培养后的转化藻经PCR鉴定,目的基因能够稳定地整合在螺旋藻染色体上,经Western-blot证明外源基因在螺旋藻中获得高效表达,且在光生物反应器中经过30 d的无抗生素G418的高密度培养后,外源基因能够稳定的遗传表达。     

转基因动植物生物反应器研究进展及应用现状

转基因动植物作为生物反应器,有完善的真核表达系统,可以为多种外源蛋白提供正确的翻译后修饰,表达具有生物活性的外源蛋白,可以应用于人或动物的疾病治疗及预防,因其具有成本低、产出高、产品珍贵且需求高的特点而具有广阔的商业前景。目前,转基因动植物生物反应器研究领域已经取得多项成果与突破,以此生产的蛋白制品也有部分被权威机构批准上市应用,还有许多未上市的研究成果已经进入临床试验阶段,为产业化发展做准备。动植物生物反应器已成为重组药用蛋白生产的新趋势。综述了转基因植物和转基因动物作为生物反应器生产重组蛋白的研究进展及应用现状,介绍了生物反应器类型、生产的蛋白种类、已获批应用的动植物生物反应器,讨论了利用动植物生物反应器生产外源蛋白的意义及存在的问题,对其研究及应用前景进行展望。     

转基因植物作为生物反应器的新进展

利用转基因植物作为生物反应器生物抗乙肝、霍乱等疫苗，价格低廉，并已生产出一批医药蛋白，工业用酶，食品及化工用脂肪、糖类，生物降解塑料等产品，具有极大的应用前景。     

逆转录病毒法制备转基因鸡的方法分析

随着生物制药业的迅速发展,转基因鸡已逐渐成为生物领域研究的热点之一。为建立和优化逆转录病毒法制备转基因鸡技术平台,以pHIT-Myc3为载体,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为标记基因,采用共转染法包装泛嗜性VSV-G假逆转录病毒,浓缩后分别体外侵染鸡胚胎成肌细胞和体内胚盘下腔接种新生种蛋并孵化出雏。分别抽提成肌细胞、孵化5d的全胚和新生雏鸡不同脏器的基因组DNA进行PCR鉴定分析,结果分别在细胞和5d全胚胎及新生雏鸡的胸腺和皮肤中检测到了标记基因EGFP的存在,表明逆转录病毒法成功制备出转基因鸡,同时转基因鸡技术平台中的方法技术条件也得到了有效优化,为转基因鸡的进一步研究提供参考。     

生物反应器在动植物基因工程中的应用

综述了生物反应器在动、植物基因工程中的应用，并从外源基因在动、植物生物反应器中表达的基本方法和遗传机制等方面，比较分析了这两个生物反应器各自的优点和存在的问题，分析了其生产基因工程产品的试验、投放市场的现状及前景。     

piggyBac转座子介导的转基因家蚕丝腺生物反应器研究进展

 综述了基于piggyBac转座子的转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白的3个关键环节：（1）外源目的基因高效插入家蚕基因组;（2）转基因家蚕的高效、快捷的检测;（3）具有生物活性的外源目的蛋白的高效表达和纯化。同时介绍了有关转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白的研究进展,为更好地利用转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白提供了参考。     

动物乳腺生物反应器研究进展

介绍了动物乳腺生物反应器的优点,论述了其研究及应用概况,并对其发展趋势进行了展望。     

转基因鸡生产技术研究进展

对转基因鸡的生产方法,如病毒载体法、生殖器官注射法、显微注射法、胚胎干细胞法等进行综述,探索转基因鸡各生产方法的可行性,并对各方法的应用特点以及转基因鸡应用方面的最新研究成果进行了剖析。     

逆转录病毒转染胚盘细胞制备嵌合体鸡胚的研究

 【目的】通过重组逆转录病毒体内感染源于第X期胚盘细胞的方法获得嵌合体鸡。【方法】将扩增的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的开放阅读框插入逆转录病毒表达载体pour-pBabe中获得重组逆转录表达载体;采用磷酸钙转染法将其与包装载体pVSVG共转入293 10A1包装细胞中进行病毒包装,得到病毒原液经超速离心浓缩200倍后注入种蛋(第X期)胚盘下腔,孵化种蛋。提取孵化5.5天的鸡胚基因组DNA,进行PCR检测和Southern杂交检测。【结果】构建含EGFP完整开放阅读框的逆转录病毒表达载体pour-pBabe-EGFP,提取孵化5.5 d鸡胚基因组DNA,经PCR、Southern杂交检测,嵌合体阳性率分别为75%和66.7%。【结论】通过用重组逆转录病毒体内感染鸡胚盘细胞的方法可获得嵌合体鸡。     

睾丸注射慢病毒生产转基因鸡的研究

【目的】采用睾丸注射慢病毒的方法生产转基因鸡以提高转基因效率,使转基因鸡的批量生产变得简单可行。【方法】用磷酸钙沉淀法包装慢病毒,对慢病毒包装体系中的质粒总量和HN Buffer的pH值进行优化,以包装出滴度较高的慢病毒;然后将慢病毒注射到受精鸡蛋的胚胎中验证其活性;最后,将慢病毒注射到8日龄公鸡的睾丸内,待其性成熟以后,将精液DNA呈阳性的公鸡与非转基因母鸡进行交配生产出转基因鸡。【结果】当90mm培养皿中质粒总量为50μg、HN Buffer的pH值为7.05时慢病毒的包装效率最高,在该条件下包装出的慢病毒滴度高达7.5×107 TU/mL;采用慢病毒胚胎注射途径成功地生产出增强绿色荧光蛋白(enhanced Green Fluorescent Protein,eGFP)转基因鸡;采用慢病毒睾丸注射途径生产的转基因鸡后代中能检测到eGFP目的基因,但未检测到其相关的表达。【结论】慢病毒睾丸注射途径能够将外源基因整合到精原干细胞中,并遗传给后代。     

转基因技术与动物育种研究

转基因技术的成功给动物育种和生产带来了重大变革，综述了各种转基因技术应用于动物育种的进展情况，提出了今后转基因动物育种的工作建议。     

烟草转基因研究进展

综述了近十年来的烟草转基因研究各方面取得的进展和存在的问题。重点对烟草转基因方法、外植体选择、烟草转抗旱基因研究、转抗病基因研究、转抗寒基因研究、转耐盐基因研究、转抗虫基因研究、转抗金属逆境基因研究和其它烟草转基因相关领域研究现状进行综述,探讨了目前烟草转化工作中存在的问题并对其进行展望。     

ChIFN-α基因在烟草中的表达及转基因烟草对TMV的抗性

动物α干扰素具有高效广谱的抗病毒作用,通过农杆菌介导法将35S驱动的干扰素基因ChIFN-α转化烟草,Southern杂交和Western杂交进行目的基因的转化、表达检测,重组蛋白的数量通过ELISA测定,对获得的转基因烟草植株进行TMV接种实验,结果表明ChIFN-α基因的转化赋予了转基因烟草对TMV的抗性,进一步的荧光定量PCR差异表达检测结果表明,该抗性可能与转基因烟草体内防卫基因PR-la、抗病N基因和信号转导MAPK基因受到上调表达有关。     

洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡禽内源性反转录病毒基因检测与分析

为了解禽内源性反转录病毒(AERs)在湖北地方鸡种洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡基因组中的存在状况,利用禽内源性反转录病毒EAV、ev loci和ev/J特异性引物对两种鸡的基因组进行PCR检测。结果表明,洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡中均检测出EAV、ev loci和ev/J三种禽内源性反转录病毒基因序列;核酸序列同源性分析显示,洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡基因组中的EAV、ev loci和ev/J之间的同源性分别为98.8%,99.6%和99.6%;进化树分析显示,两种鸡内的三种禽内源性反转录病毒均分别位于进化树的同一分支,表明洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡内源性反转录病毒具有共同的祖先并且进化路径相似。洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡的ev/J与ALV-J原型株HPRS-103同源性高于98%,且进化树处于同一分支。而与ALV-J国内分离株SD9901、YZ9901毒株的同源性较低,并且进化树位于不同分支,表明这两种鸡的ev/J可能与ALVJ原型株HPRS-103亲缘关系更近,而与国内的外源性ALV-J分离毒株SD9901、YZ9901亲缘关系较远。     

贵妃鸡蛋、珍珠鸡蛋及商品鸡蛋品质差异性分析

对贵妃鸡蛋、珍珠鸡蛋及商品鸡蛋的品质及营养成分含量进行测定,并对各指标进行比较分析。结果表明,贵妃鸡蛋和珍珠鸡蛋的蛋白质及脂肪含量略高于商品鸡蛋,商品鸡蛋蛋黄卵磷脂的含量仅为贵妃鸡蛋的59.3%,珍珠鸡蛋的62.6%,建议儿童和老年人多食用贵妃鸡蛋及珍珠鸡蛋。