蝴蝶兰SRAP反应体系的建立与优化

以蝴蝶兰嫩叶提取的DNA为材料,蝴蝶兰SRAP反应体系中的重要参数Mg2＋、Taq酶、模板DNA及随机引物,建立了一套适合蝴蝶兰基因扩增的SRAP反应体系：25μL的反应体系中Mg2＋浓度为2.0mmol/L,Taq酶1.0U,DNA模板40ng,上下游引物0.8mmol/L。该体系扩增条带清晰,重复性好,有望在蝴蝶兰属植物的遗传育种研究中运用。     

棉花SRAP反应体系的建立与优化

为了利用SRAP开展棉花连锁遗传图谱构建和纤维品质的研究,采用海陆杂交F2代2单株的模板DNA、2对引物和3种浓度梯度进行组合,对SRAP的反应体系进行优化.筛选优化了SRAP反应体系,即:10 μL反应体系中,模板DNA 15 ng,1×Buffer,Mg2 浓度2.1 mmo1/L,dNTPs浓度0.25 mmo1/L,Taq DNA聚合酶0.5 U,引物1.0 mmo1/L.经验证,所建立的SRAP反应体系具有简便、稳定、中等产率和较强重复性等特点.     

北方粳稻SRAP反应体系的建立与优化

以粳型旱稻品种焦旱1号总DNA为材料,首先对影响北方粳稻SRAP-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶浓度等因素进行了初步优化,分析了各因素对SRAP-PCR扩增结果的影响。在此基础上对影响SRAP-PCR反应的Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶浓度等4个主要因素进行了正交优化。研究结果表明,利用引物组合Me6/em7对18个北方粳稻品种进行了成功扩增,最佳条件为:25μL SRAP-PCR反应体系中,模板DNA为20 ng;Mg2+为2.0 mmol/L;dNTP为0.3 mmol/L;正反引物为15 pmol;TaqDNA聚合酶为1.5 U。     

蒙古冰草SRAP反应体系建立

研究以蒙古冰草为材料,通过单因子Mg2+、dNTP、Taq酶、引物、DNA试验;2×Taq PCR Master Mix、引物、DNA正交试验建立了蒙古冰草SRAP反应的优化体系。结果表明:最佳反应体系为10uL:2uL 2×Taq PCR Master Mix、0.4umol/L引物、60ng模板DNA。该体系对蒙古冰草扩增效果好,电泳结果显示扩增条带清晰,多态性高,而且操作简单,为SRAP标记技术在蒙古冰草相关研究中的应用提供条件。     

玉米SRAP反应体系的建立与优化

SRAP标记(Sequence-related Amplified Polymorphism,序列相关扩增多态性)是一种新的分子标记技术,具有简便、稳定、中等产率、在基因组中分布均匀的特点,是开展遗传图谱构建、基因定位与克隆、比较基因组学c、DNA指纹图谱、生物多样性、预测杂种优势等研究的一个很实用的工具。对玉米SRAP反应体系的程序、模板、Mg2+等参数进行优化研究,结果表明玉米的PCR程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,35℃复性1 min,72℃延伸1 min,5个循环;94℃变性1 min,50℃复性1 min,72℃延伸1 min,35个循环,最后72℃延伸10min;25μl反应体系中,模板量为20 ng,Mg2+浓度为2.0 mmo1/L。该研究建立的玉米SRAP体系重复性好,稳定性强。     

胡萝卜SRAP反应体系的优化

通过对胡萝pSRAP反应体系中Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、引物浓度以及模板DNA浓度的优化,结果表明,在20μL反应体系中,DNA模板最适浓度为3．00ng／mL,Mg^2＋最适浓度为2．25mmoL／L,引物最适浓度为o．30μmoL／L,dNTPs最适浓度为0．20mmoL／L。     

利用正交设计优化芦笋SRAP反应体系

以芦笋（Asparagus offinalis L．）为材料,对影响SRAP—PCR扩增结果的因素dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2＋、引物、模板DNA进行了正交优化设计的研究。结果表明,适合芦笋SRAP—vcR析的最佳反应体系：20μL的反应体积中包括0．2mmol／LdNTPs0．4gL;1UTaqDNA酶1．0gL;1．5mmol／LMg2 1．2μg;上下引物各30ng,每个引物O．5此;60ng模板DNA1．1.0μL;10Buffer2．0凼无菌双蒸水13．4此。为今后利用SRAP标记技术研究芦笋的遗传多样性奠定基础。     

花生SRAP反应体系的建立与优化

[目的]为研究花生居群遗传多样性奠定基础。[方法]以汕油162和sunolicn 95R为模板对花生进行SRAP扩增,研究模板DNA浓度、Mg2+浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶的用量对SRAP扩增效果的影响,探索花生SRAP反应的最佳条件。[结果]在一定范围内,模板DNA含量和TaqDNA聚合酶的用量对花生SRAP扩增结果的影响较小。当Mg2+浓度为2.5 mmol/L时,扩增效果最佳。当Mg2+浓度逐渐降低时,扩增条带逐渐变弱。引物浓度为0.5 mmol/L时能够扩增出清晰、重复性好的条带。花生SRAP反应的最佳条件为:模板DNA含量为100 ng,Mg2+浓度为2.5 mmol/L,引物浓度为0.5 mmol/L,TaqDNA聚合酶的用量为1 U。[结论]与AFL P技术相比,该研究中所建立的花生SRAP反应体系更为简便和可靠。     

利用正交设计优化芦笋SRAP反应体系

以芦笋(Asparagus officinalis L.)为材料,对影响SRAP-PCR扩增结果的因素dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA进行了正交优化设计的研究。结果表明,适合芦笋SRAP-PCR分析的最佳反应体系:20μL的反应体积中包括0.2mmol/LdNTPs0.4μL;1UTaqDNA酶1.0μL;1.5mmol/LMg2+1.2μL;上下引物各30ng,每个引物0.5μL;60ng模板DNA1.0μL;10×Buffer2.0μL;无菌双蒸水13.4μL。为今后利用SRAP标记技术研究芦笋的遗传多样性奠定基础。     

苦瓜SRAP反应体系的建立与优化

[目的]分子标记技术的快速发展为在DNA水平上估计苦瓜种质的遗传差异提供了更准确、更高效的方法。[方法]采用正交试验设计,对影响苦瓜SRAP反应体系的5种因素(Mg2+、dNTPs、引物、Taq聚合酶及模板DNA)4个水平进行优化筛选。[结果]确立了适合苦瓜SRAP分析的优化反应体系,即1×buffer,1.0 ng/μl模板DNA,1.5 mmol/L Mg2+,0.3 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L引物,0.075 U/μlTaq聚合酶,总体积20μl。[结论]优化的SRAP-PCR反应体系的建立为利用SRAP技术进行苦瓜种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础。     

龙眼SRAP反应体系的建立和优化

为获得最佳的龙眼SRAP反应体系,采用分步优化的方法对影响龙眼SRAP-PCR反应的模板DNA用量、Me2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量等进行了研究.确立了适合龙眼SRAP分析的反应体系,即体系总体积25 μl,包含1×PCR Buffer,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTPs 0.5 mmol/L,引物0.3 μmol/L,模板DNA 10 ng,TaqDNA聚合酶1.5 U.结果表明,该体系能很好地满足龙眼基因组SRAP扩增的要求,SRAP标记应用于龙眼遗传研究是可行的.     

八仙花SRAP反应体系的建立与优化

为建立适合八仙花SRAP-PCR分子标记技术体系,以八仙花栽培品种H.macrophylla‘Lavbla’为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、dNTPs、Mg2 、Taq酶浓度和引物用量对八仙花SRAP扩增反应的影响,确立了八仙花SRAP分析的最佳反应体系为25μl:模板DNA60ng、Mg2 2.0mmol/L、dNTPs0.7mmol/L、Taq酶0.5U、引物0.7μmol/L×2、10×PCRBuffer2.5μl,该反应条件下八仙花SRAP扩增条带清晰,多态性丰富。     

南瓜SRAP扩增体系与扩增程序的优化

利用L45正交设计对影响南瓜SRAP反应体系的MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度及模板DNA浓度等5个因素进行了筛选,快速得到稳定性和重复性好的南瓜SRAP扩增体系。对复性温度、PCR循环次数等影响南瓜SRAP扩增结果的重要因素进行了优化。最终优化的南瓜SRAP反应体系为25μL反应液中:10×buffer2.5μL,0.2 mmol/L dNTPs,引物0.2μmol/L,1.5 mmol/LMgCl2,DNA模板6 ng/μL,Taq酶1.5 U。本研究最终确立的PCR反应程序为:94℃预变性5 min,94℃变性40 s,35℃退火40 s,72℃延伸90 s,进行5个循环,94℃变性40 s,50℃退火40 s,72℃延伸90 s,进行32个循环,最后72℃延伸5 min。在此条件下得到的SRAP标记可为南瓜遗传多样性、分子标记及辅助育种等研究提供稳定有效的手段。     

木薯SRAP扩增体系的建立与优化

建立适宜木薯DNA的SRAP扩增体系,为木薯分子标记和基因图谱的构建打下基础.以木薯基因组DNA为模板,采用序列相关扩增多态性(sequence related amplified polymorphism,SRAP)技术对木薯DNA进行PCR扩增,运级优化反应参数.最佳SRAP-PCR反应体系(10L1)为:DNA(50ng/μl)0.5μl、10×PCR buffer(Mg2 )1.0μl、dNTPs(20mM)0.21μl、primer(50ng)0.3μl、Taq polymerase(5U/μl)0.21μl.该程序和体系能很好地满足木薯基因组SRAP扩增的要求,SRAP标记能够很好应用于木薯遗传研究.     

南瓜SRAP反应体系的建立与优化

以‘密本’南瓜作为筛选体系的材料,通过单因素试验对南瓜20μL SRAP-PCR扩增体系的Mg^2＋、dNTP、 Taq酶、引物及DNA浓度和扩增程序的退火温度与循环次数进行优化,筛选出各组分的最佳浓度、最佳的退火温度和最佳循环次数。试验结果确立南瓜最佳的20μL SRAP体系为：0.2 mmol · L ^-1 dNTP ,1.5 U Taq酶,80 ng DNA ,0.16μmol·L^ -1的单条引物,Mg^2＋1.5 mmol·L^ -1,2μL 10＆#215;Buffer ;最佳扩增程序为：94℃预变性5min;94℃1 min ,35℃1 min ,72℃1 min ,5个循环;94℃1 min ,52℃1 min ,72℃1 min 35个循环;最后72℃延伸10 min。选用17个南瓜品种对确立扩增体系及扩增程序进行验证,检测结果表现为扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富、特异性强、重复性好,表明本试验所确定的反应体系及反应程序适用于南瓜的SRAP分子标记。     

苔藓植物SRAP反应体系的优化

以黄灰藓总DNA为材料,对影响SRAP-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶浓度等因素进行了优化,分析了各因素对SRAP-PCR扩增结果的影响。结果表明,在25μLSRAP-PCR反应体系中,最佳反应条件为:模板DNA40ng;Mg2+浓度2.0mmol/L;dNTP浓度0.2mmol/L;正反引物15pmol;TaqDNA聚合酶2.0U。在此条件下,引物组合Me5/em7对13种苔藓植物扩增的条带清晰、多态性好,表明此反应条件适合于苔藓植物的SRAP-PCR反应体系。     

猴头菌DNA提取条件及SRAP- PCR体系的

以猴头菌(Hericiumerinaceus)菌丝体为试验材料,建立最优的DNA提取条件和SRAP- PCR扩增体系.结果表明:改进的SDS- CTAB法能较好地满足猴头菌属DNA的提取,优化后SRAP- PCR反应体系经过验证,该体系可用于猴头菌的遗传多样性分析和品种鉴定.     

山梨SRAP反应体系的建立

以山梨为试材,提取其基因组DNA,探讨了SRAP反应体系中各组分浓度对扩增的影响。结果表明,采用该方法提取的基因组DNA纯度好、片段完整、无明显降解;在20μL的反应体系中,各成分适宜浓度分别为TaqDNA聚合酶1.0 U、模板DNA 70 ng、dNTPs 250μmol/L、每个特异性引物0.3μmol/L、10×PCR Buffer 2μL,余下的体积用已灭菌的去离子水补充至20μL。     

空心菜SRAP-PCR分析体系的建立与优化

以空心菜为试验材料,利用单因素试验对影响SRAP-PCR反应体系的DNA模板、10×PCR Buffer(含Mg2+)、dNTPs、引物以及TaqDNA聚合酶5个因素进行优化,从而建立适合于空心菜SRAP-PCR分析的反应体系。结果表明:空心菜SRAP-PCR最佳的反应体系(25μL)为:DNA模板80ng、10×PCR Buffer(含Mg2+)2.5mmol·L-1、dNTPs 0.2mmol·L-1、引物0.4μmol·L-1、TaqDNA聚合酶1U。运用所优化的SRAP-PCR分析体系,对"本地空心菜"和"三叉空心菜"2个品种进行SRAP-PCR扩增,扩增结果所获得的电泳谱带清晰明亮,材料间表现出明显的多态性,并且在25对SRAP引物组合中可以筛选出7对多态性高的组合,能明显区分2个空心菜品种。由此可见,本试验所建立的SRAP-PCR体系适用于空心菜的品种鉴定和遗传多样性分析。     

华北落叶松AFLP反应体系的建立和优化

[目的]建立和优化华北落叶松（Larixprincipis-rupprechtii Mayr.）的AFLP反应体系。[方法]以华北落叶松为材料,对其AFLP分析过程中的5个主要影响因素（酶切时间、内切酶用量、DNA模板用量、连接产物和预扩增产物稀释倍数）进行了研究。[结果]确立了适于华北落叶松AFLP分析的最佳反应体系,即在反应体积均为20.0μl的前提下,酶切时间为7 h（37℃3.5 h;65℃3.5 h）,EcoRⅠ和MseⅠ内切酶用量均为1 U,DNA模板用量为3.0μl（50 ng/μl）,连接产物稀释10倍取5.0μl用于预扩增,预扩增产物稀释70倍取4.0μl用于选择性扩增。[结论]采用该体系得到的电泳条带清晰可辨、多态性好、重复性强,可用于对华北落叶松遗传多样性和分子进化特征的深入研究。