日本脑炎病毒引起细胞凋亡的信号转导通路研究进展

日本脑炎病毒(JEV)是虫媒传染性病毒,感染动物后会产生严重的脑炎症状,严重威胁着公共卫生安全.病毒粒子主要通过胞吞作用进入宿主细胞,在细胞浆复制,在细胞内部膜结构上成熟.JEV侵入神经细胞引起脑炎症状,其机理可能与JEV诱导细胞凋亡有关.目前,研究人员就有关JEV诱导细胞凋亡信号转导途径方面做了大量研究工作.在被JE...     

马日本乙型脑炎病例报告

一、自然环境 云南勋海县位于东径100°25′北纬21°55′。海拔1176.3米;历年6、7、8月,月平均气温分别为22.3℃、22.1℃、21.9℃,月平均相对湿度分别为85％、87％、89％,月平均雨量分别为198.9毫米、270.1毫米、290.9毫米。医学昆虫种类多,密度大,仅蚊科就有按蚊、钩蚊、曼蚊、伊蚊、阿蚊、库蚊六属25种。其中     

马疑似日本乙型脑炎病例报告

马的流行性日本乙型脑炎,近年来在国内时有发生,在××兽医院的门诊病例中,连续发现10匹具有典型神经症状的脑炎病例,在死亡的8匹病马中,对7例做了系统的病理学观察,发现6例具有明显的非化脓性脑炎的变化,兹就检查结果报告如下:一、研究材料与方法生前对病畜进行了系统的临床观察、常规血液化验及肝功能试验;死后进行系统的尸体剖检及病     

日本脑炎病毒及其疫苗的研究

乙型脑炎病毒又称日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)，简称乙脑病毒，属于黄病毒科(Flaviridae)黄病毒属。由乙脑病毒引起的疾病乙型脑炎(简称乙脑)是严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病。以蚊为媒介而传播，以高热和狂暴或沉郁等神经症状为特征。具有明显的季节性和一定的地理分布区，多发生于蚊虫较多的夏秋季节，属于自然疫源性疾病，病毒通常在蚊-猪-蚊等动物间循环。猪被认为是JEV最重要的自然增殖动物。怀孕母猪感染后导致流产和死胎，公猪感染后睾丸有急性炎症反应。     

日本脑炎流行病学的研究——实验动物感染日本脑炎病毒实验

日本脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus:JEV)由三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus)为传播媒介的情况,1933年三田村氏曾作报道,1934年林氏从猴分离出病毒,1936年笠原氏等分离出现在的疫苗株。作为JEV的易感动物,除人而外最初报道是马,现已查明的有牛、山羊、猪、狗、鸡、野鸟、蝙蝠等几乎所有哺乳类及禽类。近年来,为查明感染周期,冷血动物也成为研究的对象。此次作者等用多种动物进行了JEV的病理学感染实验,特报道如下。     

日本乙型脑炎病毒的分离与鉴定

收集一例疑为乙型脑炎病毒感染的种公猪肿大的睾丸病料,并将其处理制成匀浆过滤后,用乳鼠脑内接毒和细胞接毒相结合的方法盲传并分离病毒,然后设计一对PrM/E基因的特异性引物,采用RT-PCR方法对所分离的病毒进行鉴定,并将其PrM/E基因扩增产物测序,测序结果与乙型脑炎GenBank登陆的SA14-14-2株(AF315119)和SA14株(U14163)进行比较。结果表明,所分离病毒的PrM/E基因序列与JEV强毒株SA14和弱毒株SA14-14-2相应序列同源性分别为98.1%和97.1%,证实分离毒株为乙型脑炎病毒。     

日本脑炎病毒的流行病学及疫苗研究进展

正日本脑炎(Japanese Encephalitis,JE)又称为流行性乙型脑炎,简称乙脑,是一种人畜共患的法定报告传染病。JE主要在亚太地区流行,我国除新疆、西藏和青海省(自治区)没有JE病例报道外,其它各省(自治区)均是JE流行区,其中河南、四川、重庆、贵州、云南5省(市)被划定为JE高度流行区[1]。据WHO统计,全球每年大约有6.8万JE临床病例,大约50%发生在我国大陆[2]。JE的     

猪日本脑炎病毒的致病机理研究进展

日本脑炎病毒是一种严重威胁人畜健康的虫媒病毒。文章介绍了国内外关于猪日本脑炎病毒的毒力与致病机理方面的研究进展情况及其分子生物学特性,并着重阐述了猪日本脑炎病毒的致病机理,为今后探索对本病的新型预防与治疗措施提供重要的理论依据。     

由赤羽病毒新毒株引起的牛脑炎

已知日本脑炎病毒、恶性卡他热病毒、伪狂犬病病毒和狂犬病病毒感染都可以引起牛的脑炎。最近,在日本鹿儿岛县发现一种由赤羽(Akabane)病毒的新毒株入来(Irki)分离物引起的牛脑炎。 1984年10～11月,在日本鹿儿岛县两个地区的10个饲养场中,发现10头有脑炎症状的犊牛,其年龄为3天至16月龄。其中,6头为日本黑牛,4头为黑白花牛;5头公犊,5头母犊。发现明显神经症状后5     

荧光定量RT-PCR检测猪日本脑炎病毒

通过RT-PCR方法克隆了日本脑炎病毒(JEV)N基因片段序列,构建重组质粒作为标准阳性模板,同时根据GenBank中的靶序列设计了荧光定量R-PCR的1对引物和1条TaqMan探针.通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了JEV检测的荧光定量PCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108和1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为17.33、20.52和23.90,变异系数分别为0.54%、0.74%和0.53%,均小于5%.对阳性组织病料的检测表明该方法的灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nested-PCR,nPCR)具有相近的灵敏度.     

猪日本脑炎病毒RT-PCR检测方法的建立

设计了1对引物,利用RT-PCR技术检测乙型脑炎病毒(JEV)。从GenBank中查出收录的31株猪乙型脑炎病毒E基因的已知序列,用DNA star软件对这31株猪乙型脑炎病毒E基因进行同源性分析,以确定扩增的靶序列。以这段靶区域为模板,利用Primer 5软件设计了1对引物,用减毒株SA14-14-2建立了检测乙脑病毒的RT-PCR方法,经敏感性,特异性试验测定,证明该方法敏感,特异;该法可检出样品稀释至256倍的鼠脑毒,相当于0.06个TCID50,对4株河北地区JEV分离株进行检测,结果所设计引物对4株病毒均能扩增出预期的片段。     

日本乙型脑炎病毒保护性抗原基因表达的研究

日本乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒引起的严重的人畜共患性传染病,日本乙型脑炎病毒的结构蛋白包括C、Pr M和E 3种。其中C蛋白主要参与病毒RNA和蛋白之间的相互作用,且具有核定位信号序列,在乙脑病毒中,缺失此序列后C蛋白只在感染细胞的细胞质中出现;PrM和E基因是其主要免疫保护性抗原基因,表达的蛋白是乙型脑炎病毒的主要结构蛋白,是病毒颗粒的主要成分,也是维持病毒粒子形态结构的主要物质,主要参与病毒感染的后期阶段,可诱导产生保护性免疫。近年来许多学者对日本乙型脑炎病毒保护性抗原基因原核表达和真核表达及其相关免疫原性进行了大量的研究,取得了一定的研究进展,文章主要针对日本乙型脑炎病毒保护性抗原基因表达的研究进展进行了综述,为乙型脑炎基因工程疫苗的进一步研究提供参考。     

日本脑炎病毒非结构蛋白功能的研究进展

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)为单股正链RNA病毒,可通过蚊虫为媒介引起人畜共患的急性中枢神经系统传染病,目前暂无特效治疗药物.JEV基因全长11 kb可编码3个结构蛋白(C、PrM、E)和7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)....     

日本乙型脑炎病毒小鼠脑内分布研究

为定位检测日本乙型脑炎病毒(JEV)在试验小鼠脑内分布情况,本研究建立了JEV的小鼠感染模型,取发病死亡小鼠的脑组织制作石蜡切片,利用抗JEV单克隆抗体,采用免疫酶组化方法对抗原进行组织学定位检测。试验结果表明,所建立的间接免疫酶组化方法灵敏度高,特异性好,证明了JEV选择性感染神经元,抗原阳性表达主要集中在脑干、神经节及大脑皮质。     

一株日本乙型脑炎病毒的分离与鉴定

吉林省某猪场送检一例病猪,经诊断疑似为日本脑炎病毒感染,对病猪的脏器以及全血进行BHK21细胞接种,对细胞培养物进行PCR检测和间接免疫荧光试验。结果显示,荧光显微镜下细胞浆内可见绿色荧光信号;PCR检测为日本脑炎病毒阳性,成功分离到一株日本乙型脑炎病毒。     

日本乙型脑炎病毒E抗原表位的筛选

为筛选日本乙型脑炎病毒(JEV)的E抗原表位,本实验以抗JEV E蛋白的单克隆抗体(MAb)作为固相筛选分子,应用噬菌体表面展示技术,按消减、结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体七肽库,挑取噬菌体单克隆培养并采用MAb包被的ELISA鉴定,对阳性克隆测序分析,确定JEV E抗原模拟表位的氨基酸序列.设计合成包含该表位的E抗原15肽(E-365GGADSMSMAGMAVSYE-379)cDNA序列,与pGEX-KG构建重组表达质粒,诱导表达重组多肽并进行western blot验证.经过4轮筛选后,噬菌体得到高度富集,挑取单克隆采用MAb包被进行ELISA鉴定,有22个克隆呈阳性.对重组多肽进行western blot验证,结果表明该重组多肽能够特异结合兔抗JEV多克隆抗体.本实验成功筛选出JEV结构蛋白E的特异性噬菌体模拟表位,为开展用JEV抗原表位探索JEV的防制研究创造了条件,为多肽疫苗研制、药物筛选以及特异血清学诊断方法的建立提供重要依据.     

日本脑炎病毒prM蛋白的表达及免疫原性分析

日本脑炎是一种由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的、经虫媒传播并可导致母猪流产的急性病毒性传染病。JEV的M蛋白参与病毒的感染过程且能诱生具有轻度中和作用的抗体。本研究提取JEV上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增该病毒的prM基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,构建重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-prM,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组his-JEV-prM蛋白,SDS-PAGE结果表明,获得分子量大小为24 ku的重组蛋白,主要以包涵体形式表达,薄层扫描分析表明,表达量占总菌体蛋白的30%以上,纯化后获得高纯度重组蛋白,占总蛋白比例达60%以上。纯化蛋白his-JEV-prM免疫BALB/c小鼠,制备了小鼠抗JEV-prM抗体,Westernblotting和间接免疫荧光检测小鼠抗JEV-M抗体的特异性。纯化蛋白能诱导小鼠产生高滴度抗体,并且该抗体能特异识别原核、真核和病毒表达的prM。本研究表达纯化的prM蛋白和小鼠抗prM抗体,为基于M蛋白的疫苗开发、检测JEV的方法及致病机理研究提供了工具。     

猪OAS2抗日本脑炎病毒的活性研究

在亚洲和一些其他地区,日本脑炎是危害重大的人畜共患病。2'-5'寡腺苷酸合成酶(2'-5'oligoadenylate synthetase,OAS)为一种干扰素诱导的抗病毒蛋白。本试验利用PCR方法获得OAS2基因ORF并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),获得pcDNA-pOAS2;转染PK-15细胞进行pOAS2瞬时表达,通过Real-Time PCR、间接免疫荧光试验(IFA)、噬斑形成试验检测其对日本脑炎病毒(JEV)复制的影响。结果表明,猪OAS2在PK-15细胞中的瞬时表达对JEV在细胞内的复制起一定抑制作用。本试验为下一步研究OAS2抗病毒作用奠定基础。     

重组人α干扰素抑制日本脑炎病毒的研究

为了研究重组人α干扰素(hu IFNα)在仓鼠肾细胞(BHK-21)上对日本脑炎病毒(JEV)增殖的影响,将商品化的重组人干扰素作用感染了JEV的BHK-21细胞后,通过Western blot、噬斑减少试验和间接免疫荧光试验鉴定了hu IFNα对JEV作用的量效关系和时效关系。结果表明,仅在10 ng/m L hu IFNα处理细胞后,JEV的增殖能力下降了92倍,Western blot结果也显示JEV非结构蛋白NS5含量显著下降,说明低浓度的hu IFNα能明显抑制JEV的增殖;200 ng/m L的hu IFNα处理细胞,在接毒24 h和48 h后,与对照组相比JEV含量分别下降了821倍和15倍,这表明hu IFNα在BHK-21上抑制JEV的增殖具有时间依赖性。本研究为重组干扰素在JEV感染的治疗和预防方面提供理论基础。