新型萘酰亚胺衍生物合成研究

合成了一系列新型的萘酰亚胺-亮氨酸加合物,利用红外光谱、核磁共振氢／碳谱和高分辨质谱等对其结构进行了确认,并利用MTT法和SRB法对其抗肿瘤活性进行了研究。结果表明,该系列化合物对所测试的6种肿瘤细胞株（HeLa、A549、P388、HL-60、MCF-7、A375）表现出较好的增长抑制活性,IC50值为10^-6～10^-5M。     

抗癌肽改造及其对人乳腺癌MCF7作用的评估

为了探讨不同净电荷及疏水度对天然多肽CMAP-8衍生物抗人乳腺癌细胞MCF7增殖抑制作用的影响,分别采用带正电荷的K和疏水性的F两种氨基酸对天然多肽CMAP-8进行设计改造,得到系列衍生物。其净电荷数为0~8,疏水度为42%~57%,采用MTT法检测所得多肽衍生物对人乳腺癌细胞MCF7的增殖抑制率,Anti CP对多肽抗癌活性的预测。结果表明,净电荷为0的多肽均没有预测抗肿瘤活性,可能是因为多肽的净电荷对其预测活性有一定的影响。体外抗乳腺活性结果表明,CMAP-L-20、CMAP-L-23、CMAP-L-24和CMAP-L-25对MCF7细胞的抑制率与CMAP-8相比,差异达到了极显著水平(Duncan-test,P0.01)。所筛选的4条多肽净电荷数为6~8,疏水度均为46%,而天然多肽CMAP-8净电荷为0,疏水度为42%。多肽活性预测结果与体外抗乳腺癌检测结果一致,共同表明了净电荷的改变对多肽抗乳腺癌活性的影响更大,而疏水度并非越大越好,应该处在合适的范围内。     

茶氨酸衍生物茶溴香酰胺脂质体对人肺癌细胞 生长和迁移的抑制作用

为了探索研究茶氨酸衍生物茶溴香酰胺制备的脂质体(TBrC-L)对人非小细胞肺癌A549细胞生长和迁移的抑制作用与其分子机制,采用薄膜分散法制备了TBrC-L,通过MTT法检测不同浓度的TBrC-L对人肺癌A549细胞生长的抑制作用;使用流式细胞术检测TBrC-L对人肺癌A549细胞凋亡的诱导作用;利用Transwell chamber法观察TBrC-L对人肺癌A549细胞迁移作用的影响;应用蛋白质印迹法检测人肺癌A549细胞中与凋亡和生长密切相关蛋白的表达和药物可能的作用靶点。实验结果显示,TBrC-L对人肺癌A549细胞生长和迁移有显著的抑制作用,促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长和迁移可能是其抗人肺癌作用的重要机制,其作用的分子机制涉及到抑制EGFR、VEGFR1、VEGFR~2和Met受体介导的Akt和NF-κB信号传导通路,本研究结果提示,TBrC-L具有应用于临床治疗和(或)辅助治疗人肺癌的潜力。     

毛蚶中天然牛磺酸的提取和活性研究

[目的]提取和纯化毛蚶(Scapharca subcrenata)中的天然牛磺酸,并对其活性进行研究。[方法]采用薄层色谱法(TLC)对提取的牛磺酸纯度进行分析,并对其结构用红外光谱(IR)和核磁共振波谱(NMR)进行鉴定,然后对其细胞毒活性进行检测。[结果]毛蚶富含牛磺酸,对人白血病细胞HL-60、肝癌细胞SMMC-7721、肺癌细胞A-549、乳腺癌细胞MCF-7和结肠癌细胞SW480没有明显的细胞毒活性。[结论]该研究为天然牛磺酸的开发和利用提供了依据。     

红松种鳞多酚抗肿瘤作用的研究

[目的]研究红松种鳞多酚对癌细胞体外增殖的抑制作用.[方法]分别采用不同浓度红松多酚提取液对人骨髓神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y、人肺腺癌细胞株A549、人皮肤癌细胞株A375、人肝癌细胞株HepG2、人卵巢癌细胞株SKOV3这5种常见的肿瘤细胞进行试验,采用MTT法检测体外细胞增殖抑制率.[结果]红松多酚提取物对SH-SY5Y、HepG2、SKOV3的抑制作用不明显,而对A549、A375均有抑制效果.[结论]在红松多酚提取液固形物含量为0.4 mg/ml时,其对A549细胞抑制效果最佳,在该浓度下,红松多酚提取液对人肺腺癌细胞A549的抑制率可达到55％.     

北沙参水提法不同提取物体外抗肿瘤的研究

［目的］研究北沙参水提法不同提取物的体外抗肿瘤活性。［方法］采用MTT法观察北沙参水提法乙醇处理后3种不同提取物对肺癌细胞株（A549）、胃癌细胞株（SGC）、肝癌细胞株（HEP）的体外药理作用。［结果］北沙参水提后醇溶物、水提后醇沉物和水提后滤渣醇溶物的不同浓度在体外对肝癌细胞株（HEP）均具有一定的抑制作用,北沙参水提后醇溶物和水提后醇沉物各浓度间无显著差异,水提后滤渣醇溶物在300.000 μg/ml时抑制率显著高于其他浓度;对肺癌细胞株（A549）,绝大部分浓度具有一定的抑制作用,水提后醇溶物浓度为37.500μg/ml时,抑制率显著高于其他浓度,水提后醇沉物各浓度间无显著差异,水提后滤渣醇溶物浓度为75.000μg/ml和18.750μg/ml时,抑制率显著高于其他浓度 而对胃癌细胞株（SGC）,只有水提后滤渣醇溶物在300.000μg/ml时具有抑制作用,且抑制率仅为6.340%,其他均没有抑制作用。［结论］北沙参水提乙醇处理后的3种提取物对肺癌细胞株（A549）和肝癌细胞株（HEP）在体外均有一定的抑制作用,但对胃癌细胞株（SGC）几乎没有抑制作用。     

绿豆汤中水溶性色素的抗氧化活性与抗癌活性研究

通过大孔树脂从绿豆汤中分离到一种水溶性色素组分。经DPPH法测定该色素组分具有一定的抗氧化活性,对氧自由基的最佳清除率可达70%~80%;此外,试验中还以两株癌细胞系MCF-7、HepG2为研究对象,检测了该水溶性色素组分的抗癌活性。研究结果表明绿豆水溶性色素对MCF-7细胞生长的影响较小,但是能够明显诱导HepG2细胞的凋亡。     

肝素对体外培养肿瘤细胞的影响

[目的]研究肝素对体外肿瘤细胞的抗癌活性,为其应用于肿瘤的治疗奠定基础。[方法]以肺癌细胞A549为材料,添加不同浓度肝素钠进行培养,观察细胞的形态变化;采用MTT比色法检测肝素对体外肿瘤细胞增殖的影响。[结果]试验组的细胞形态无改变和病理损伤,各试验组的A值与对照组差异均不显著。[结论]肝素对体外肿瘤细胞A549无抗癌活性。     

西兰苔叶黄酮体外抗癌活性的研究

[目的]探讨西兰苔叶黄酮粗提物（EOF）的抗癌机制。[方法]通过四甲基偶氮唑盐（MTT）试验检测EOF对细胞生长的抑制率,并用流式细胞仪采用Annexi-V/PI双染法进行细胞凋亡检测,以探讨西兰苔叶EOF对癌细胞增殖的抑制作用及其诱导的癌细胞凋亡机制。[结果]西兰苔叶EOF对SW480、HepG2、Hela和A549这4种细胞的生长均表现出抑制作用,抑制率随药物浓度的增加而增大,呈明显的量效关系,其50%抑制浓度（IC50）值分别为88.14、99.65、104.43、79.77μg/ml,对SW480细胞的作用最为明显。通过Annexi-V/PI双染法流式细胞仪测得其浓度为30、60、80、120、160μg/ml时,诱导的SW480细胞的早期凋亡率分别为12.74%、16.41%、19.61%、28.28%和50.66%。[结论]西兰苔叶EOF是通过抑制增殖和诱导细胞凋亡来发挥对肿瘤的治疗作用的。     

Bacillus subtilis Czk1挥发性化合物对橡胶树红根病菌的抑制作用

由橡胶灵芝菌（Ganoderma pseudoferreum）引起的红根病是橡胶树生产上毁灭性病害之一。为明确枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）Czk1产生的挥发性物质对橡胶灵芝菌的抑制作用，以橡胶灵芝菌为靶标菌，通过平板对峙法检测Czk1所产12种挥发性化合物纯品的抑菌活性；采用生长速率法对挥发性活性组分进行毒力测定；检测挥发性混合组分对橡胶灵芝菌细胞的形态及细胞膜通透性的影响。结果表明，12种挥发性化合物纯品对橡胶灵芝菌均具有不同程度的抑菌活性，其抑菌率在15.20%～100%之间，其中，苯甲醛对橡胶灵芝菌抑菌活性最强，抑菌率达到100%。9种化合物纯品对病菌的毒力测定中，苯甲醛、3,5-二甲氧基苯乙酮、2,6-二叔丁基对甲酚EC₅₀分别为20.30、30.62、40.96 μg·mL^-1。该三种混合组分浓度为25 μg·mL^-1，其对橡胶灵芝菌的抑制率为67.00%。经三种混合活性组分处理后的病菌菌丝缠绕成一团，细胞壁变薄，部分膜结构不完整。混合活性组分影响病菌细胞通透性。Czk1产生的挥发性物质具良好的抑菌活性是由这些挥发性物质协同作用的结果，这些挥发性物质应用前景巨大，可作为化学农药替代品防治橡胶树红根病。     

Bacillus subtilis Czk1挥发性化合物对橡胶树红根病菌的抑制作用

由橡胶灵芝菌（Ganoderma pseudoferreum）引起的红根病是橡胶树生产上毁灭性病害之一。为明确枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）Czk1产生的挥发性物质对橡胶灵芝菌的抑制作用，以橡胶灵芝菌为靶标菌，通过平板对峙法检测Czk1所产12种挥发性化合物纯品的抑菌活性；采用生长速率法对挥发性活性组分进行毒力测定；检测挥发性混合组分对橡胶灵芝菌细胞的形态及细胞膜通透性的影响。结果表明，12种挥发性化合物纯品对橡胶灵芝菌均具有不同程度的抑菌活性，其抑菌率在15.20%～100%之间，其中，苯甲醛对橡胶灵芝菌抑菌活性最强，抑菌率达到100%。9种化合物纯品对病菌的毒力测定中，苯甲醛、3,5-二甲氧基苯乙酮、2,6-二叔丁基对甲酚EC₅₀分别为20.30、30.62、40.96 μg·mL^-1。该三种混合组分浓度为25 μg·mL^-1，其对橡胶灵芝菌的抑制率为67.00%。经三种混合活性组分处理后的病菌菌丝缠绕成一团，细胞壁变薄，部分膜结构不完整。混合活性组分影响病菌细胞通透性。Czk1产生的挥发性物质具良好的抑菌活性是由这些挥发性物质协同作用的结果，这些挥发性物质应用前景巨大，可作为化学农药替代品防治橡胶树红根病。     

紫丁香苷抗肿瘤活性筛选及作用机制研究

[目的]筛选对紫丁香苷较敏感的人肿瘤细胞系,研究其抗癌机理。[方法]采用四氮唑盐法(MTT法)测定药物的体外抑制作用,通过测定Caspase-3活性研究细胞凋亡通路在抗癌活性中的作用。[结果]在常见的15种人肿瘤细胞中,紫丁香苷的半数抑制浓度IC50低于100μg/m L的有人肝癌细胞HepG2以及人前列腺癌细胞PC-3,紫丁香苷可促进肿瘤细胞中细胞凋亡因子Caspase-3活性增加。[结论]人肝癌细胞HepG2以及人前列腺癌细胞PC-3对紫丁香苷较为敏感,紫丁香苷的抑制作用呈现出剂量依赖的特点;细胞凋亡途径在紫丁香苷的抗肿瘤活性中起着一定的作用。     

桦木醇二酸酯衍生物的合成及溶解性能比较

为了增强桦木醇的极性,以其为母体,合成了桦木醇丁二酸酯和桦木醇戊二酸酯,采用红外光谱、核磁共振和质谱对产物进行了结构表征。选用平衡法测定了桦木醇、桦木醇丁二酸酯和桦木醇戊二酸酯在丙酮、无水乙醇、水和磷酸盐缓冲溶液(pH=7.4)中的溶解度。结果表明:在丙酮和无水乙醇中,桦木醇丁二酸酯的溶解度是桦木醇的10.6和12.0倍;桦木醇戊二酸酯的溶解度是桦木醇的33.5和22.6倍;在水中,桦木醇戊二酸酯的溶解度为桦木醇丁二酸酯的7倍;在PBS(pH=7.4)中,桦木醇戊二酸酯的溶解度约为桦木醇丁二酸酯的4倍,目标产物的亲水性有了显著的改善。采用MTT法评价了桦木醇丁二酸酯和桦木醇戊二酸酯对SMMC7721、TCA8113、MCF-7、SGC和B16这5种癌细胞株的生长抑制活性。结果表明:桦木醇二酸酯衍生物具有潜在的体外细胞毒活性。      

百里香酚对鱼源耐药性维氏气单胞菌的体外抑菌效果及其机制研究

为探究百里香酚对鱼源耐药性维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)的抑菌效果和作用机制,从患病黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)体内分离得到一株维氏气单胞菌,药敏试验结果显示,其对氟苯尼考、环丙沙星和恩诺沙星耐药。通过测定最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)和生长曲线来评价百里香酚对耐药性维氏气单胞菌的抑菌活性;通过测定百里香酚对其细胞膜通透性、可溶性蛋白、乳酸脱氢酶活性和DNA的影响,结合电镜观察细菌超微结构的变化研究其作用机制。结果显示,百里香酚对耐药性维氏气单胞菌的抑菌效果明显,MIC为256μg·mL^-1,MBC为512μg·mL^-1。经512μg·mL^-1的百里香酚作用1 h后,维氏气单胞菌液电导率极显著(P<0.01)上升,DNA外渗量迅速上升至(115.6±0.5)mg·L^-1。经512μg·mL^-1的百里香酚作用后,维氏气单胞菌的可溶性蛋白明显变少,细菌乳酸脱氢酶活性在2、4、6、8 h分别极显著(P<0.0...     

喙尾琵琶甲提取物的体外抗肿瘤活性研究

[目的]观察喙尾琵琶甲提取物对体外培养人肿瘤细胞株的生长抑制作用。[方法]喙尾琵琶甲粗提物,通过硅胶柱层析分离得不同极性部分,运用MTT法观察不同部分对人白血病细胞株K562和HL-60、人肺癌细胞株A549的生长抑制情况。[结果]粗提物、石油醚和氯仿部分三者最高浓度(300μg/ml)对K562、HL-60、A549的生长抑制率均>69%,半数抑制浓度(IC50)均<100μg/ml。[结论]喙尾琵琶甲粗提物、石油醚和氯仿部分对K562、HL-60、A549的生长具有很好的抑制作用。     

山苍子油主成分及其衍生物对植物病原菌的抑制作用

为筛选出新的对油茶炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.Niveum)和水稻稻瘟病菌(Pyricularia grisea)3种常见植物病原菌有效的杀菌剂,采用菌丝生长速率法,研究了山苍子油主成分及其衍生物15种化合物对这3种常见植物病原菌的抑制效果。结果表明:15种化合物对3种植物病原菌的生长均表现出一定的抑制作用,而且随着质量浓度的升高,抑制作用增强。通过本试验从15种化合物中依次筛选出对油茶炭疽病菌、水稻稻瘟病菌和西瓜枯萎病菌的抑菌作用最强的分别为乙位紫罗兰酮、柠檬腈、鸢尾酮,其EC50依次为31.53,37.64,133.60 mg/L。油茶炭疽病菌、水稻稻瘟病菌经乙位紫罗兰酮、柠檬腈处理后,其菌体细胞相对渗透率明显增大,表明细胞膜发生了破坏;而西瓜枯萎病菌经鸢尾酮处理后细胞相对渗透率先增大后减少,表明细胞膜没有发生破坏。     

基于结构类似物的交叉反应性制备高灵敏度 玉米赤霉醇单克隆抗体

【目的】获取高灵敏度的玉米赤霉醇（zearalanol,ZAL）单克隆抗体,为提高玉米赤霉醇免疫学检测方法灵敏度研究奠定基础。【方法】利用ZAL的结构类似物玉米赤霉酮（zearalanone, ZAN）制备人工完全抗原。肟化改造ZAN得到ZAN-O;碳二亚胺（EDC）法把ZAN-O分别连接到牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）上制备出ZAN-O-BSA和ZAN-O-OVA。ZAN-O-BSA免疫小鼠,免疫剂量为50 μg蛋白/只鼠。选取血清效价高、灵敏度好的小鼠进行细胞融合。阳性杂交瘤筛选过程中,利用ZAL替代ZAN作为阻断剂,筛选能分泌抗ZAL单克隆抗体的杂交瘤细胞。体内诱生腹水法来批量制备ZAL单抗,并对单抗的免疫学性能进行了鉴定。【结果】通过细胞融合,阳性杂交瘤筛选得到了1株能分泌抗ZAL单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为12B10A7,其分泌的ZAL单抗灵敏度(半数抑制浓度, IC₅₀)为577 pg?mL ^-1,亲和力常数Ka=6.21×10 ⁷L?mol ^-1,与结构类似物β-玉米赤霉醇（β-zearalanol, β-ZAL）、α-玉米赤霉烯醇（α-zearalenol, α-ZEL）、β-玉米赤霉烯醇（β-zearalenol, β-ZEL）、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮（zearalenone, ZEN）分别有43.06%、15.51%、15.22%、77.65%及9.79%的交叉反应率,而与其他霉菌毒素及载体蛋白交叉反应率均<0.06%。【结论】基于抗体交叉反应特性,利用ZAN制备人工抗原,得到了ZAL的单克隆抗体,所制备的单克隆抗体亲和力高,灵敏度好,特异性强。     

黎药光叶巴豆枝叶的化学成分分析

为研究光叶巴豆枝叶的化学成分,笔者采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、半制备高效液相色谱等多种色谱技术进行化合物的分离纯化,通过化合物的波谱数据和理化性质鉴定其结构.从光叶巴豆枝叶95％乙醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为:(3S,5R,6S,7E,9R)-3,6-dihydroxy-5,6-dihy...     

复合免疫制备3种有机磷农药单克隆抗体的技术研究

以α-氨基丁酸和农药中间体为原料合成了甲基对硫磷、杀螟硫磷和甲基毒死蜱3种有机磷农药人工半抗原(H1、H2和H3);通过活泼酯法将H1、H2和H3分别交联于牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上制备免疫原和包被原.以等体积混合的 H1-BSA、H2-BSA和H3-BSA复合免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备单克隆抗体获4株抗上述复合抗原的单克隆抗体,其中甲基对硫磷1株(H9/A3),杀螟硫磷2株(H9/B3、C8/H6),甲基毒死蜱1株(G7/F5).所获4株抗体的类型及亚类均为IgG1,轻链均为κ链,间接ELISA法测定腹水效价均高达1×106.间接竞争ELISA法测定H9/A3、C8/H6和G7/F5细胞株的抑制中浓度(I50)分别为1070、404和752 μg·L-1,且与类似物无交叉反应.本研究建立了一种可在较短的研制周期内,通过单次细胞融合获得多种不同农药的单克隆抗体的有效方法.     

漆姑草石油醚提取物化学成分分析及抗肿瘤活性筛选

[目的]对漆姑草[Sagina japonica（Sw.）Ohwi]石油醚提取物的化学成分进行分析鉴定,并对其抗肿瘤活性进行研究。[方法]采用GC-MS联用技术分析漆姑草石油醚提取物的化学成分;选用3种人癌细胞株（人白血病K562细胞株、人宫颈癌Hela细胞株和人乳腺癌MCF-7细胞株）,采用MTT法和SRB法,对其抗肿瘤活性进行研究。[结果]从漆姑草石油醚提取物中分离鉴定出25种成分,其中脂肪酸含量最多,亚油酸含量达49.318%;漆姑草石油醚提取物对人白血病K562细胞株的生长具有微弱的抑制作用,对人宫颈癌Hela细胞株和人乳腺癌MCF-7细胞株均无抑制作用。[结论]该研究可为漆姑草资源在临床上的广泛应用奠定基础。