玉竹多糖中蛋白质去除方法的对比研究

研究不同方法对玉竹多糖脱蛋白效果的影响.采用4种方法,即沙维积法(Sevag法)、三氯乙酸法(TCA法)、酶法、酶法与Sevag法联用,通过比较不同方法处理后多糖的蛋白含量及多糖含量来确定最佳的脱蛋白方法.结果显示,玉竹多糖脱蛋白的最好方法是酶法与Sevag法的联用,用于去除玉竹粗多糖中蛋白质成分切实可行,可作为纯化玉竹粗多糖的手段之一.     

条斑紫菜多糖脱蛋白方法与条件优化

对紫菜多糖提取液中的杂蛋白质去除方法和条件优化进行了研究。采用Sevag法与三氯乙酸（TCA）法去除紫菜多糖中的游离蛋白质，分别研究了不同溶剂体积比、用量、处理温度和时间等主要因子对蛋白质去除的影响。结果表明，Sevag法最佳脱蛋白条件为氯仿：正丁醇=3：1，样品：氯仿-正丁醇=3：1，振荡时间为30min；三氯乙酸法（TCA法）最佳脱蛋白条件为反应温度80℃、三氯乙酸用量4％、反应时间30min。两种脱蛋白方法比较发现：三氯乙酸法去除蛋白质质的效果优于Sevag法。     

桑黄多糖脱蛋白方法与条件的优化

[目的]对桑黄多糖提取液中的蛋白质去除方法和条件进行了优化,并比较了2种方法对蛋白质去除的影响。[方法]采用Sevag法与三氯乙酸（TCA）法去除桑黄多糖中的游离蛋白质。[结果]三氯乙酸法去除蛋白质的效果优于Sevag法,其最佳脱蛋白条件为：5%三氯乙酸用量,处理3次,反应时间30min,。在此条件下,蛋白质去除率为82%,多糖损失率为10.8%。[结论]TCA法为最佳的桑黄多糖脱蛋白方法。     

条斑紫菜多糖脱蛋白方法与条件优化

对紫菜多糖提取液中的杂蛋白质去除方法和条件优化进行了研究。采用Sevag法与三氯乙酸（TCA）法去除紫菜多糖中的游离蛋白质,分别研究了不同溶剂体积比、用量、处理温度和时间等主要因子对蛋白质去除的影响。结果表明,Sevag法最佳脱蛋白条件为氯仿：正丁醇=3：1,样品：氯仿-正丁醇=3：1,振荡时间为30min;三氯乙酸法（TCA法）最佳脱蛋白条件为反应温度80℃、三氯乙酸用量4％、反应时间30min。两种脱蛋白方法比较发现：三氯乙酸法去除蛋白质质的效果优于Sevag法。     

桑黄多糖脱蛋白方法与条件优化

对桑黄多糖提取液中的蛋白质去除方法和条件进行了优化.采用Sevag法与三氯乙酸(TCA)法去除桑黄多糖中的游离蛋白质,比较两种方法对蛋白质去除的影响.结果表明,三氯乙酸法去除蛋白质的效果优于Sevag法,其最佳脱蛋白条件为:5%三氯乙酸用量,处理3次,反应时间30 min,在此条件下,蛋白质去除率为82%,多糖损失率为10.8%.     

沙棘多糖脱蛋白工艺的优化研究

植物多糖纯化过程中脱蛋白是较为重要的环节之一,为了提高多糖纯化效率,对沙棘多糖脱蛋白的工艺进行了优化研究。先选取了3种不同方法脱蛋白,即三氯乙酸法(TCA法)、沙维积法(Sevag法)、酶法与Sevag法联用,通过比较不同方法处理后的蛋白含量及多糖含量来确定最佳的脱蛋白方法。结果表明,对于三氯乙酸法而言,5%的三氯乙酸脱蛋白效率最高且多糖损失最小;对于Sevag法,反复处理5次脱蛋白效率相对较高且多糖损失率较小;对于酶法与Sevag法联用,酶法+Sevag法2次进行脱蛋白效果最好。并且3种方法相比,酶法与Sevag法联用脱蛋白效率相对最高,且多糖损失率最小。因此进一步设计正交试验来确定木瓜蛋白酶法脱蛋白的最佳条件,结果表明,木瓜蛋白酶法脱蛋白的最佳条件是酶加量5 mg/mL,酶解温度60℃,pH6,且此条件下的蛋白清除率为73.58%。     

蝉花虫草多糖脱蛋白研究

蝉花虫草粗多糖中杂有蛋白、核酸、酚类等物质,给多糖的分离纯化带来许多干扰,为了排除杂质干扰,获得较为纯净的多糖组分,采用Sevag法和大孔树脂吸附法相结合对蝉花虫草粗多糖进行了脱蛋白试验。结果表明:采用大孔树脂法或Sevag法均不能完全去除粗多糖中的游离蛋白,两种方法结合脱蛋白除杂效果较为理想,蛋白去除率达96%以上。初步分离获得大孔树脂水相洗脱部位和20%乙醇洗脱部位2种主要多糖组分。综合分析,先用Sevag法脱蛋白2~3次,再用大孔树脂AB-8吸附分离,或先大孔树脂AB-8吸附分离获得不同多糖组分,再用Sevag法辅助脱蛋白1~2次,两种方法去除蝉花虫草粗多糖中蛋白的效果均较好。     

肉苁蓉多糖脱蛋白工艺的优化

优选肉苁蓉多糖的脱蛋白工艺,为肉苁蓉多糖纯化提供试验依据。以脱蛋白率为指标,比较Sevag法、酶法及酶-Sevag联合法对肉苁蓉粗多糖的脱蛋白效果,采用正交试验优选最佳工艺。结果表明,Sevag法优于酶法和酶-Sevag联合法,Sevag法脱蛋白的最佳工艺为:三氯甲烷与正丁醇的体积配合比4∶1,料液体积比1∶3,搅拌40 min,脱蛋白4次。在该工艺下平均脱蛋白率为87.11%,RSD为1.34%;平均多糖保留率为83.05%,RSD为1.54%。试验证明该工艺稳定可靠,适用于肉苁蓉多糖的纯化。     

桦褐孔菌胞外多糖脱蛋白工艺比较研究

采用正交试验设计,以蛋白质脱除率和多糖损失率为指标,比较研究了Sevag法、三氯乙酸法和酶法对桦褐孔菌胞外多糖的脱蛋白工艺。结果表明:三氯乙酸法脱蛋白效果最佳,其优化工艺为三氯乙酸浓度0.5mol/L,加入量15%,振荡时间20min,静止时间40min,蛋白质脱除率为68.5%,多糖损失率为2.45%。     

洋葱粗多糖脱蛋白质方法比较

为探究洋葱多糖脱蛋白质的最优方法,以蛋白质脱除率、多糖损失率以及脱蛋白质处理后多糖的还原力和对羟基自由基(·OH)的清除能力为指标,比较了Sevag法、乙酸铅法、盐酸法、三氯乙酸法对洋葱粗多糖的脱蛋白质效果。结果表明:Sevag法脱蛋白质处理4次,洋葱粗多糖的蛋白质脱除率为79.44%,多糖损失率为22.30%,脱蛋白质处理后的洋葱多糖清除·OH的IC50值为16.00μg/m L,同时也表现出较强的还原力,对洋葱粗多糖的脱蛋白质效果最好,其次是乙酸铅法和盐酸法,三氯乙酸法最差。     

苦丁茶不同提取物的体外抑菌作用研究（摘要）

[目的]研究苦丁茶不同粗提物的抑菌效果。[方法]制备了3种苦丁苯粗提物。粗提物1：称取苦丁茶50 g,加500 ml去离子水浸泡10 h,加热至沸腾,文火2h,过滤。药渣再加3～5倍去离子水煎煮,方法同上,重复3次。合并3次提取液,用旋转蒸发仪浓缩成50 ml,即每1 ml相当于含生药1.0 g,粗提物2：称取50 g干粉（用中药粉碎机粉碎后过80目）,加500 ml去离子水,水浴80℃恒温振荡3 h,离心,取上清液,浓缩,加3倍体积无水乙醇,离心取沉淀,用去离子水配成50 ml溶液。粗提物3：称取50 g干粉,加500 ml 90%乙醇,采用回流提取法,同流时间3 h,回流次数3次,合并3次提取液,过滤,用旋转蒸发仪浓缩成50 ml。粗提物1、粗提物2、粗提物3分装于棕色试剂瓶,封口,于-20℃冰箱中保存,使用前121℃高压灭菌20 min采用试管二倍稀释法和纸片扩散法,对金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌进行体外抑菌试验,并测定其最小抑菌浓度（MIC）,最小杀菌浓度（MBC）和抑菌环直径。[结果]粗提物1抑菌效果较强,高于粗提物2和粗提物3,对金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌的MIC分别为3.91 mg/ml和31.25 mg/ml。粗提物1对金黄色葡萄球菌的抑菌作用效果最好,抑菌能力最强,抑菌作用为高敏,抑菌环直径达（17.46±0.40）mm,对大肠埃希菌的抑菌作用为中敏,但比粗提物2、粗提物3好;粗提物2对这2种菌的抑菌能力都较差,均为低敏,特别是对大肠埃希菌,抑菌环直径只有（6.30±0.16）mm。粗提物3对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌作用相差不大,都为中敏。粗提物1不但抑菌效果好,且其提取方法、步骤简单,仪器设备价格低,同时不产生废气,可为临床应用上提供支持并带来方便。粗提物3需使用有机溶剂,大量使用容易产生三废,给环境带来一定的危害。考虑到抑菌能力及成本、环保和简便等因素,采用提取粗提物1的方法在生产上比较实用。[结论]苦丁茶的不同粗提物均有不同程度的抑菌作用,为苦丁茶开发成新型、安全的抑菌剂提供了参考。     

苦丁茶鲜叶加工技术研究

以冬青冬冬青属苦丁茶种植物春叶的嫩叶和老叶为原料,采用锅炒杀青、锅炒加盐杀青、蒸青３种加工工艺制成成品茶,分析了各处理对成茶品质的影响,结果表明：嫩叶处理浸提液与老叶处理浸提液的化学尬发含量及种类不同,老叶蒸青浸提液中含有嫩叶蒸青浸提液中没有的成分Ｆ,嫩叶处理浸提液各化学成分含量高于老叶处理;蒸青处理、锅炒另盐杀青处理苦丁茶浸提液的苦味、亮度、色泽和提高水浸出物,各化学成分的浸出量有利;锅炒杀青处     

应用SCAR标记技术对苦丁茶炭疽病抗性进行早期鉴定的构想

讨论了苦丁茶冬青的经济价值及其抗炭疽病育种的必要性和紧迫性;论述了RAPD-SCAR和AFLP-SCAR双重分子标记对苦丁茶抗炭疽病育种的重要意义,以及对苦丁茶冬青炭疽病抗性基因成功进行SCAR标记所必须完成的主要研究内容和必需解决的关键问题;提出了研究方案,并对其可行性进行了分析;预测了此项研究工作的预期结果,并就RAPD-SCAR和AFLP-SCAR双重分子标记技术应用于苦丁茶冬青的抗炭疽病育种工作的创新意义进行了探讨。     

6种冬青科苦丁茶总三萜类物质含量的比较研究

用φ=5%的香草醛-冰醋酸、高氯酸显色,以熊果酸纯品为对照,在波长548nm处用分光光度法测定了6种冬青科苦丁茶功能叶和4种市售苦丁茶冬青嫩芽产品中的总三萜含量。结果显示:大叶冬青功能叶中的总三萜类物质含量最高,市售苦丁茶冬青的嫩芽产品中其总三萜类物质含量最低。6种供试的冬青科苦丁茶样品中总三萜类物质的质量分数依次排序为:大叶冬青(4.209%)枸骨(3.866%)霍山冬青(3.064%)华中枸骨(2.775%)苦丁茶冬青(2.74%)五棱冬青(2.648%)。     

粤东2种广东省新记录植物

报道了采自广东东部的2种广东省新记录植物：琼海苎麻（Boehmeria lohuiensis Chien）和汝昌冬青（Ilex limii C.J.Tseng）,标本存放于华南农业大学植物标本室（CANT）。     

苦丁茶冬青多糖乙醇分级纯化及其理化性质研究

为了研究苦丁茶冬青多糖醇沉规律及产物理化性质。通过热水浸提和不同浓度乙醇分级沉淀,得到乙醇终浓度为20%、40%、60%和80%的4种苦丁茶冬青多糖组分,即ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4。比色法检测各多糖组分总糖、糖醛酸、蛋白质和总酚含量;高效凝胶渗透色谱法进行相对分子质量的测定;紫外和红外光谱扫描考察各组分的光谱性质。结果表明:ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4总糖含量分别为19.21%、34.91%、37.70%和30.21%,糖醛酸含量分别为5.04%、44.90%、24.20%和5.84%;凝胶渗透色谱图表明:ICP-2和ICP-3为高纯度均一组分,分子量为440.440与348.279 ku;4种多糖组分在280 nm处均有吸收峰,说明均为糖蛋白质化合物。红外结果显示,各组分均为吡喃糖环构型。以上结果表明,乙醇分级沉淀的方法可用于分级纯化制备组分均一、纯度较高的苦丁茶冬青多糖组分。     

超临界CO2萃取技术分离和纯化苦丁茶中熊果酸的工艺

对超临界CO2萃取苦丁茶中熊果酸的工艺进行了研究,并采用酸碱沉淀法纯化萃取液。结果表明：在以无水乙醇作为夹带剂,CO2流量为20L·h-1,萃取温度为45℃,萃取压力为30MPa,萃取时间为3h的萃取条件下,萃取效果最好,萃取率可达0．453％,最终能得到加=21．44％纯度的熊果酸粗品。该工艺优于传统的熊果酸提取方法,适于产业化生产。     

冬青科苦丁茶中熊果酸和齐墩果酸含量的测定

[目的]开展不同种苦丁茶、不同产地苦丁茶中熊果酸和齐墩果酸含量的考察,以期为熊果酸产业化开发提供基础资料。[方法]HPLC法测定了6种冬青科苦丁茶功能叶和4种市售苦丁茶冬青嫩芽产品中熊果酸和齐墩果酸的含量。色谱条件为Eclipse XDB-C18柱（5.0μm,4.6mm×150.0mm）,流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液（88∶12）,检测波长为220nm,流速为0.8ml/min,柱温为35℃,进样量20μl。[结果]熊果酸的平均含量为枸骨（1.64%）〉霍山冬青（1.63%）〉大叶冬青（1.54%）〉五棱冬青（1.23%）〉苦丁茶冬青（0.96%）〉华中枸骨（0.69%）〉苦丁茶产品（〈0.28%）;齐墩果酸的平均含量为大叶冬青（0.22%）〉霍山冬青（0.18%）〉枸骨（0.17%）〉五棱冬青（0.14%）〉苦丁茶冬青（〈0.12%）〉华中枸骨（0.10%）〉苦丁茶产品（0）。[结论]测定结果有助于指导熊果酸和齐墩果酸加工产业选择合适的原料。     

与苦丁茶冬青雄性性状连锁的RAPD标记

通过正交试验设计对影响苦丁茶冬青RAPD-PCR反应的5种因素4水平进行优化试验,最终确定苦丁茶冬青RAPD—PCR的最佳反应体系为：在25μL反应体系中,DNA模板20ng,Mg2＋ 2．5mmol·L-1,引物浓度为0．3μmol·L-1,Taq聚合酶浓度为2．0U,dNTPs浓度为200μmol·L-1。最佳的RAPD-PCR扩增程序为：94℃预变性5min,然后94℃变性30s,36℃退火30s,72℃延伸120s,进行40个循环,最后72℃延伸10min;4℃保存。然后通过RAPD技术筛选了91条随机引物,共计有24条引物能在雌／雄DNA／样品池间显示多态性,其中引物S164和S191分别扩增得到2个雄性特异标记S164—900和S191—800。经多次重复实验,RAPD标记均能在雄性个体中稳定出现,故此标记可应用于苦丁茶冬青性别的早期鉴定。     

刺五加多糖提取纯化工艺的优化

[目的]优化刺五加多糖的提取纯化工艺。[方法]以药用植物刺五加为材料,采用单因素试验和正交试验法对多糖提取、纯化的工艺进行优化。[结果]结果表明,热水浸提的最佳温度为90℃,浸提时间为150min,水料比为18：1,提取次数2次;醇沉温度为-20℃,时间36h,乙醇与浸提液比例为4：1,pH值为7时多糖产率最高。采用树脂动态吸附法筛选不同树脂去除多糖色素和蛋白的效果,结果显示,D941树脂最好。经树脂处理的多糖采用DEAE-Sepharose阴离子交换柱和Sepharose-G200层析柱进一步纯化,得到了纯度较高的As-1和As-2 2个多糖组分。[结论]该研究结果为进一步确定刺五加多糖的生化特性、生理功能奠定基础。