体外免疫法制备乙肝病毒特异性转移因子的工艺研究

目的：优化体外免疫法制备乙肝病毒特异性转移因子的工艺。方法;采用猪脾细胞与植物血凝素、乙肝疫苗共同培养,收集致敏细胞在组织捣碎机中破碎,用蒸馏水1：1稀释,-25℃反复冻融6次,自来水融化后装入透析袋中,用1：4的蒸馏水作透析外液,于4℃透析48h,透析液即为乙肝病毒特异性转移因子（HBV-STF）。结果：本品为黄色澄明液体,多肽含量0.493g／L,核糖含量0.372g／L,蛋白质反应阴性,紫外光谱在253nm有最大吸收,E260／E280=2.47。最佳PHA剂量为100mg／L,最佳乙肝疫苗剂量为20μg／L。结论：用体外免疫法制备乙肝病毒特异性转移因子工艺稳定,制备的转移因子符合质量标准,具有对乙肝病毒抗原的特异性。     

金刚烷胺单克隆抗体的制备和鉴定

为制备金刚烷胺(AMD)的单克隆抗体(mAb),改造AMD的半抗原,采用EDC/NHS法合成人工免疫原AMD-BSA和检测抗原AMD-OVA,经紫外扫描和凝胶电泳进行鉴定,AMD与载体蛋白[牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵白蛋白(OVA)]成功偶联;用被免疫原(AMD-BSA)免疫BALBC/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,获得AMD杂交瘤细胞株,腹腔注射小鼠后,得到抗AMD的mAb。小鼠免疫后的多抗血清的效价均在6.4×10~3以上,所制得的杂交瘤细胞上清液的效价为3.6×10~2～1.0×10~3,2D5细胞株的腹水效价为5.12×10~5,对AMD的IC_(50)值为1.02μg/L,除与金刚乙胺的交叉反应率为9.82%,与其他结构类似物无交叉反应性。表明获得了高价、敏感和特异的抗AMD的单克隆抗体,为进一步的免疫学快速检测提供了技术支持。     

药物单克隆抗体的制备及在药物分析中应用

概述了药物(含激素类药物)半抗原合成人工免疫原方法以及采用B-淋巴细胞杂交瘤技术制备药物单克隆抗体的要点，着重介绍了药物单克隆抗体作为几种免疫分析方法的核心试剂，在临床药理学研究及生物样品的药物残留分析中的应用，并对其进行了评述，以期了解药物单克隆抗体的应用现况及前景。     

单克隆抗体制备的关键因素

单克隆抗体在实验室和临床上有广泛的应用,它是基础免疫研究、诊断测试和疫苗质量控制方面必要的研究工具。本文主要阐述了单克隆抗体生产中的关键步骤,特别是抗原的准备、细胞和动物的考虑(选择)、佐剂及复合物的制备、注射方式、细胞融合和腹水收集方法,以期在单抗制备过程中减少动物的痛苦,获得最佳的免疫反应。     

SEB单克隆抗体的制备

[目的]获取能应用于快速检测致病微生物的蛋白质芯片点印用单克隆抗体。[方法]用金黄色葡萄球菌B型肠毒素（SEB）作为抗原免疫BALB/C小鼠,然后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/O融合,再进行选育、检测、鉴定等。[结果]成功获得了分泌SEB单克隆抗体的杂交瘤细胞。[结论]抗体特异性经酶联免疫吸附测定法检验,单克隆抗体细胞特异性强,能够用作蛋白质芯片点印的材料。     

单克隆抗体制备中几个关键问题

随着分子生物学技术的进步，单克隆抗体的生产技术逐渐完善，但在生产中要制备出高质量的单抗仍存在许多问题。本就动物的免疫、杂交瘤细胞的建立、融合细胞的筛选、克隆化培养及细胞冷藏、单克隆抗体的大量生产及纯化、单克隆抗体制备过程中的有关污染问题进行论述，以期对生产有一定的指导。     

核酸免疫制备豇豆胰蛋白酶抑制剂抗体的制备及初步应用

通过构建pcDNA3．1-CpTI真核表达载体，肌肉注射免疫Balb／c纯系小鼠，获得特异性的核酸免疫CpTI抗体，其效价达1：800，所获抗体可与纯化的CpTI蛋白发生特异性反应，检测OD406值和包被蛋白量相关系数为0．9961；间接法测定转cpti基因水稻结果表明，核酸免疫制备的抗体能与转基因水CpTI蛋白产生特异性反应，可用于转基因水稻cpti基因表达的定性测定。     

孕酮单克隆抗体酶免疫分析法研究

本试验选用单克隆抗体采用非平衡法建立起孕酮的酶免疫分析法.整个测试过程在1小时内完成,结合率与孕酮浓度的自然对数的典型的回归方程式为:E/E_0=38.84LnP—21.53(r=-0.9763),灵敏度为0.05n mol/L.标准曲线的可测范围为0～3.2n mol/L.标准曲线7个剂量点的平均批间变异系数为4.75％,同一样品批内和批间变异系数分别为6.8％和10.25％,回收率为101.10±4.35％.孕酮单克隆抗体与7种甾体激素的交叉反应率均小于0.5％.该法测定脱脂乳样品所得的结果与用常规血清抗体建立的酶免疫分析法所得结果密切相关(r=0.9551).     

新城疫病毒单克隆抗体的制备及鉴定

以纯化的新城疫病毒ND35免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合.经筛选,获得5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株.特异性试验表明,7G5单克隆抗体仅与ND35病毒株反应,而不与禽流感病毒AIV(H5亚型)、产蛋下降综合症病毒(EDS-76V)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、马立克氏病毒(MDV)、禽肺病毒(APV)反应.通过Western-blot对7G5单克隆抗体进行鉴定,发现其在相对分子质量47 500～62 0130之间出现条带,表明其与NDV抗原有特异性结合.这5株单克隆抗体属于IgGl、IgG2b亚类,κ轻链.     

睾酮的单克隆抗体酶免疫分析法研究

利用睾酮单克隆抗体,用非平衡法建立鉴定了睾酮的固相微滴板酶免疫分析法,整个测试过程在1小时内完成,结合率(E/E_0)与睾酮浓度的自然对数(InT)之间典型的直线回归方程式为:E/E_0=162.29 InT—19.45(r=-0.9783).用建立的方法测定了海佩科肉鸡59日龄血清睾酮浓度,公鸡为82.08±30.53ng/DL,母鸡为58.84±14.45ng/DL,肉鸡血清睾酮浓度与其体重存在显著的正相关(r=0.4002,n=32).     

蜜蜂螺原体单克隆抗体的制备及其基本性状研究

用蜜蜂螺原体(CH-1)免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,获得3株稳定分泌 CH-1单克隆抗体(简称单抗,下同)的杂交瘤细胞株。腹水单抗效价介于12800~(-1)～6553600~(-1)之间。其免疫球蛋白种类为 IgG1和IgG3。腹水单抗与同源抗原的反应能被兔多克隆抗血清阻断。杂交瘤细胞染色体为96条。反复冻融、低温保存以及 pH 试验对单抗有一定影响。单抗与中国的蜜蜂螺原体分离物有反应,而与美国蜜蜂分离物无反应。     

环磷酰胺免疫抑制法制备单克隆抗体的研究

 采用纯化的鸡IgG免疫环磷酰胺预处理BALB/c小鼠后，再用亲和层析纯化的鸡IgM进行免疫，运用淋巴细胞杂交瘤技术，以间接ELISA法筛选，获得了5株能稳定地分泌抗鸡IgMμ链特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经ELISA交叉反应性试验和羊抗鸡IgMμ链抗血清阻断试验，证明这5株单克隆抗体均是抗鸡IgMμ链特异性的。采用环磷酰胺免疫抑制法制备单克隆抗体，其杂交瘤细胞阳性率为8.696%,而用常规免疫法为4.032%,前者比后者杂交瘤细胞阳性率提高1倍以上。经两次有限稀释法克隆和比较后，免疫抑制法获得5株单克隆抗体，而常规免疫法只获得2株单克隆抗体，前者有3株单克隆抗体腹水ELISA效价达到10#+（-12）、10#+（-14）、10#+（-15）；后者单克隆抗体腹水ELISA效价为10#+（-5）和10#+（-6）。因此，与常规免疫法相比，环磷酰胺免疫抑制法制备单克隆抗体具有杂交瘤细胞阳性率高，分泌的单克隆抗体特异性强、滴度高等优点，值得推广。     

牛乳铁蛋白单克隆抗体的制备

以LF(牛乳铁蛋白)为抗原对BALB/C小鼠进行免疫,利用杂交瘤技术进行融合,制备了3株抗牛LF的杂交瘤细胞,并对其浓度、上清效价、腹水效价、抗体亚类、分泌单克隆抗体稳性定、单克隆抗体分子量等进行鉴定。结果表明,抗体分泌稳定,腹水效价达到106,间接ELISA、Western blot结果显示3株单抗均与FL发生特异性结合;Ig亚类鉴定均为IgG,且轻链均为K链。     

DNA免疫制备猪传染性胃肠炎病毒S蛋白单克隆抗体

利用含有猪传染性胃肠炎病毒S基因主要抗原位点的重组质粒PCI-Sa免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释法3次克隆,获得1株稳定分泌抗TGEV重组S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为E6D9A12,其染色体平均计数为88±10对,间接ELISA检测制备腹水抗体效价为1:6×105,分泌抗体亚类为IgG2a型。杂交瘤细胞上清与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、猪伪狂犬病病毒(PrV)均不发生交叉反应;与TGEV感染细胞经间接免疫荧光检测均呈黄绿色荧光;与TGEV经Dot-ELISA检测呈特异性反应。     

鱼肠道弧菌单克隆抗体的制备及应用

以鱼肠道弧菌Vibrio ichthyoenteri为抗原免疫小鼠,用PEG法将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,分别采用酶联免疫吸附(ELISA)技术和间接免疫荧光抗体(EFAT)技术筛选强阳性杂交瘤细胞株,亚克隆阳性细胞株,获得5株抗鱼肠道弧菌单克隆抗体(1C6、1D8、2D7、2D10、2E3)。Western blotting分析结果显示,单抗2D10与相对分子质量为44 200、36 700的鱼肠道弧菌蛋白发生特异性结合;用流式细胞术(FCM)检测单抗强度,结果显示阳性荧光比例为13.63%,阴性对照荧光比例不足1%;人工感染牙鲆试验结果表明,运用该单抗能够建立鱼肠道弧菌的快速诊断方法。     

鱼肠道弧菌单克隆抗体的制备及应用

以鱼肠道弧菌Vibrio ichthyoenteri为抗原免疫小鼠,用PEG法将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,分别采用酶联免疫吸附(ELISA)技术和间接免疫荧光抗体(EFAT)技术筛选强阳性杂交瘤细胞株,亚克隆阳性细胞株,获得5株抗鱼肠道弧菌单克隆抗体(1C6、1D8、2D7、2D10、2E3).Western blotting 分析结果显示,单抗2D10与相对分子质量为44 200、36 700的鱼肠道弧菌蛋白发生特异性结合;用流式细胞术(FCM)检测单抗强度,结果显示阳性荧光比例为13.63％,阴性对照荧光比例不足1％;人工感染牙鲆试验结果表明,运用该单抗能够建立鱼肠道弧菌的快速诊断方法.