巴氏芽孢八叠球菌诱变选育脲酶高产菌株

脲酶催化尿素的水解生成形成铵根离子和碳酸根离子,具有广泛的应用价值。以巴氏芽孢八叠球菌ATCC11859为出发菌株, 通过亚硝基胍诱变,得到高产脲酶突变株。其中菌株B\|20的脲酶活性最高,为28.4 mmol/min,较出发菌株提高了207%。对该菌株接种量、氮源种类培养条件进行优化,结果表明接种量为10%,且采用大豆粉为氮源时,脲酶活性最高为32.9 mmol/min。对脲酶高产菌株的选育表明该方法是一种行之有效的方法。     

利用实时定量PCR对瘤胃甲酸甲烷杆菌定量方法的建立与应用

 【目的】解决传统微生物评价方法存在的弊端，寻找快速、准确、灵敏的瘤胃微生物评价的新方法。【方法】利用实时定量PCR技术，以16S rDNA为靶序列，建立了瘤胃甲酸甲烷杆菌（Methanobacterium formicicum）的分子定量方法。【结果】采用本文所设计的引物、探针以及相应的PCR反应体系，检测极限可达到30拷贝（15个甲酸甲烷杆菌），与传统检测方法相比要更为迅速、灵敏。采用实时定量PCR技术所测得的细菌数量与采用传统的最大或然数记数法所测的细菌数量具有很高的相关性（r=0.957，P<0.01），表明采用实时定量PCR方法能够准确反映瘤胃微生物数量的变化。利用所建立的方法对利鲁杂交肉牛和荷斯坦奶牛瘤胃液中甲酸甲烷杆菌进行了定量检测。结果表明，利鲁杂交肉牛瘤胃液中的甲酸甲烷杆菌浓度是荷斯坦奶牛的5.6倍。【结论】利用实时定量PCR技术建立的瘤胃甲酸甲烷杆菌的分子定量方法能够准确反映瘤胃微生物数量的变化。     

进口鸵鸟的粪肠球菌分离鉴定

从死亡鸵鸟的胸腔化脓病灶,肺中分离到一株细菌经形态特征,生化试验鉴定为粪肠球菌;接种小鼠４只,３只发生死亡,表明该菌株具有一定的致病性。在１６种抗生素的药敏试验中,该菌株只对呋喃唑酮敏感。     

双歧杆菌的分离与鉴定

研究了适宜的双歧杆菌分离方法，从婴儿，成人粪便中分离到３６株疑似双歧杆菌，经过属和种关系生化鉴定，确认为青春双歧杆菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）２０株和长双歧杆菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍ）６株。     

双歧杆菌的分离与鉴定

介绍了一套快速简便的双歧杆菌的分离鉴定程序，并运用一程序，成功地分离出１株双歧杆菌菌株。     

粪肠球菌和枯草芽孢杆菌的体外评价研究

测定了粪肠球菌(Enterococcus Faecalis)和枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)对致病性大肠杆菌O54、霍乱沙门氏菌A72及正常菌嗜酸乳酸杆菌CICC6075生长的影响。结果表明,粪肠球菌和枯草芽孢杆菌均可较好的抑制大肠杆菌和沙门氏菌的生长;粪肠球菌对嗜酸乳酸杆菌起到较好的促生长作用;枯草芽孢杆菌与嗜酸乳酸杆菌混合培养的前35 h,对嗜酸乳酸杆菌有一定的抑制作用,但35 h以后则对其有较好的促生长作用。     

枯草芽孢杆菌的分离和净化水质的研究

对水产养殖水体及底泥中的芽孢杆菌进行分离，得到一株枯草芽孢杆菌。研究枯草芽孢杆菌对南美白对虾饲养池水质的净化作用，结果表明，在饲养池中添加枯草芽孢杆菌后．池水的COD值、亚硝酸盐、H2S浓度比对照池显著降低，总碱度显著上升．表明枯草芽孢杆菌对净化南美白对虾饲养池水质具有明显的作用。     

双歧杆菌的分离与鉴定

介绍了一套快速简便的双歧杆菌的分离鉴定程序，并运用这一程序，成功地分离出１株双歧杆菌菌株．     

一个厌氧甲烷氧化菌菌株的分离、纯化和特征研究

首次报道浙江象山市郊青紫泥水稻田土壤中一个能厌氧氧化甲烷的细菌菌株AMOB3的分离、纯化及其部分生理生化特性.该菌株革蓝氏染色阴性,细胞极小,仅(0.3～0.5) μm×(0.7～0.8) μm,在厌氧滚管琼脂上可形成细小透明直径约为0.2 mm的菌落.能较好地利用甲烷和甲醇,但仅微弱利用甲酸.电镜显微表明细胞具有周生于胞质的与好氧性甲烷氧化菌相同的囊膜结构.试管培养时该菌株的甲烷氧化活性为2.4 nmol/mL.Cu2+、Mo6+、Mn4+等离子可提高该菌株氧化甲烷的能力,但Cr3+具有抑制作用.经将菌株AMOB3的特性与现有报道的好氧性甲烷氧化菌比较,认为这是一个不同于现有甲烷氧化菌的新种.     

双歧杆菌的分离、纯化及鉴定

双歧杆菌是对人为在具有独特生理功能的厌氧微生物类群。采用常规分离方法和设备及气相色谱分析,对来自母乳、健康母乳喂养婴儿的粪便、健康长寿老人的唾液及蜜蜂肠道中的双歧杆菌进行了分离、纯化和鉴定,最终获得了三株双歧杆菌,其中两株分别为婴儿双歧杆菌和短双歧杆菌,为以后产品的开发奠定了基础。     

一株奶牛粪便中甲烷氧化菌的分离与鉴定

甲烷氧化菌是一类能以甲烷和甲醇作为唯一碳源和能源进行生长的微生物。利用甲烷氧化菌选择性培养基从健康奶牛粪便样本中分离、筛选多株甲烷氧化菌,选择其中一株对甲烷代谢率较高的菌株命名为M17,并对其进行形态学观察、16S rDNA同源性比对以及理化性质分析的研究。结果表明,该菌株属于甲烷氧化菌Methylobacterium属,能够利用多种碳源进行生长,但以甲醇为碳源生长最为良好,最适生长温度为35℃,最适pH为6.8左右。     

猪源降胆固醇肠球菌的分离鉴定

为了筛选益生菌并评价其对血清胆固醇的降解作用,从健康猪胃肠道分离鉴定12株肠球菌,进行体外降胆固醇,对酸和胆盐的耐受性试验,结果表明：分离菌均具有体外降解血清胆固醇的作用,降解率为16．67～48．00％,对pH3．0和0．4％的胆盐具有抵抗力,综合评价E1和E7可以作为降胆固醇的备选益生菌株。     

水貂源乳杆菌及双歧杆菌的分离鉴定

取健康水貂粪便样经过处理后用MRS、TPY选择培养基进行筛选,筛选出主要优势菌为乳杆菌和双歧杆菌。对所筛选出的乳杆菌和双歧杆菌进行分离培养、生化试验鉴定和PCR鉴定。结果表明,乳杆菌和双歧杆菌为革兰氏阳性菌,糖醇发酵试验为阳性,并能抑制大肠杆菌生长,但对沙门氏菌无抑制作用。乳杆菌PCR鉴定中,在230 bp处有特异性条带,双歧杆菌在260 bp处有特异性条带。此试验为水貂专用微生态制剂的研制奠定了基础。     

鹿源李氏杆菌的分离鉴定

通过对患典型败血症死亡的梅花鹿组织进行细菌培养和分离得到3株细菌,经细菌形态学、生化技术、动物试验和分子生物技术4方面的鉴定,确诊该菌为李氏杆菌。药敏试验表明,分离菌株对青霉素、磺胺类药物产生了较强的耐药性,对庆大霉素、环丙杀星、克林霉素、链霉素中度敏感,对头孢塞肟钠、丁胺卡那霉素高度敏感。     

乳杆菌的分离及鉴定

从健康学龄儿童的新鲜粪便样品中分离得到6株乳杆菌,并对其进行属和种的鉴定。首先通过形态学观察及H2O2酶、糖发酵等生理生化试验对所分得菌株进行初步鉴定,然后利用16S rDNA序列同源性分析方法,对所分得菌株进行16S rDNA基因扩增与测序,测序结果与GenBank中该属内菌株的16S rDNA基因序列进行同源性分析,从而准确鉴定所分得菌株,并申请各菌株的GenBank登录号。经鉴定,其中1株为卷曲乳杆菌,2株为植物乳杆菌,1株为发酵乳杆菌,1株为黏液乳杆菌,1株为唾液乳杆菌。     

苏云金芽孢杆菌的分离及快速鉴定

从土壤样品中分离出57株疑似苏云金芽孢杆菌的菌株，采用地高辛标记CryIAb基因5’端的726bp EcoR I片段灰探针，进行菌株质粒DNA斑点杂交，筛选出25株阳性菌株。其生理生化特征与伯杰氏细菌鉴定手册第八版的描述相符，确认为苏云金芽孢杆菌菌株。     

延边猪巴氏杆菌的分离与鉴定

本文对近年来引起延边猪突然死亡的主要病毒进行分离鉴定,进而为疫苗的研发奠定基础,通过对致病细菌培养、细菌形态学观察、细菌培养特性鉴定、细菌生化鉴定、动物接种以及药敏试验的方法对延边猪巴氏杆进行分离培养与鉴定。试验结果表明该病菌于厌氧条件在兔鲜血琼脂平板生长状态良好;革兰氏染色呈阳性,镜检呈圆形、链状;甲基红试验呈红色;能够产生H2S气体;药敏试验该菌株对阿莫西林和先锋V高度敏感。从疑似发生延边猪巴氏杆菌病患猪的肺脏和淋巴结中可以分离到巴氏杆菌。     

鸡有益乳杆菌的分离鉴定

用乳杆菌选择培养基（ＬＳＣＭ）从鸡直肠内容物中分离出五株革兰氏阳性杆菌,分别是嗜酸乳杆菌２株（ＬＢ１、ＬＢ２）、唾液乳杆菌液亚种１株（ＬＢ３）、短乳杆菌１株（ＬＢ４）、发酵乳杆菌１株（ＬＢ５）。五株菌对雏鸡安全,对小白鼠无致病性。     

嗜热自养甲烷杆菌DX01抗胁迫蛋白质的分离纯化与鉴定

从中国广东温泉分离得到一株嗜热自养甲烷杆菌DX01(Methanothermobacter marburgensis DX01).分析嗜热自养甲烷杆菌DX01在不同生长温度的细胞全蛋白质图谱,分离得到一个抗胁迫相关蛋白质--甲基辅酶M还原酶I,它在70 ℃时上调表达,以此帮助宿主抵抗高温引发的胁迫影响.PCR克隆了甲基辅酶M还原酶I的基因全序列,系统发育分析表明甲基辅酶M还原酶I在不同的产甲烷菌株中保守性很高,M. marburgensis DX01与M. thermoautotrophicus和M. marburgensis Marburg的序列相似度分别是97.6%和99.2%.实时定量PCR分析表明甲基辅酶M还原酶I在不同培养温度下的MCR I mRNA表达量有显著的差异,MCR I mRNA表达量随着温度增加而增加.嗜热自养甲烷杆菌DX01菌株的抗胁迫相关蛋白质(甲基辅酶M还原酶I)的分离为研究极端古菌适应极端环境提供了新线索.