狂犬病活疫苗的研制（第Ⅲ报）ERA／BT冻干疫苗的免疫期与保存期试验

狂犬病活疫苗的研制（第Ⅲ报）ＥＲＡ／ＢＴ冻干疫苗的免疫期与保存期试验修文远，陈明毅，裴春生，王奎，王奇（吉林省生物制品厂）孙序新，江焕贤（中国兽药监察所）用狂犬ＥＲＡ株犊牛睾丸细胞适应毒试制疫苗６批，进行家犬、黄牛、绵羊及马的免疫持续期试验和不同温度...     

猪伪狂犬病活疫苗（TP株）冻干保护剂筛选和冻干工艺的优化

通过调整蔗糖明胶保护剂中蔗糖和明胶的比例、调整病毒液和冻干保护剂的添加比例,确定蔗糖添加量为40%、明胶添加量为8%配制的保护剂,病毒液与其按8∶1的比例冻干的制品性状较好,病毒含量较高。分别采用速冻法和慢冻法对制品进行冻干,结果表明,速冻法冻干后样品性状较好,病毒含量较高,因此确定采用速冻法对样品进行冻干。对预冻时间、一期干燥第一步干燥温度、干燥时间、加热的最高许可温度及时间进行了优化,结果表明,预冻时间1 h、一期干燥第一步干燥温度为5～10℃、干燥时间为14 h、干燥温度25℃维持4 h,为最优的冻干曲线。     

猪瘟冻干活疫苗保护剂的研究（续报）

应用耐温保护剂Ａ１或无硫脲Ａ１制成兔化猪瘟病毒冻干疫苗若干批。所有应用Ａ１作保护剂的产品都出现干缩现象，而应用无硫脲Ａ１的未出现。５批无硫脲Ａ１的疫苗经在３７℃中保存１５天或在２５℃保存１００天后，都能保护疫苗接种动物抵抗强毒攻击，此种保护力与规定标准一致，而应用Ａ１的对照疫苗达不到此项标准。     

猪瘟冻干活疫苗保护剂的研究（简报）

猪瘟冻干活疫苗保护剂的研究（简报）李道义，王成业，黄东文，陈开胜，农超群（广西生物制品厂，南宁５３０００１）猪瘟活疫苗按《规程》规定，在，－１５℃保存１２个月，０－８℃保存６个月，在２５℃以下时，要求１０天内用完。给疫苗的运输、保存、使用带来许多的困...     

猪瘟冻干活疫苗保护剂的研究（续报Ⅱ）

５批含有如前文［１］所说的冷冻保护剂的实验猪瘟疫苗,在２～８℃保存２年后,接种实验家兔,所有实验兔热型反应均达到标准,同时以常规用５％蔗糖脱脂奶为保护剂的猪瘟细胞冻干疫苗,在２～８℃保存仅１５个月后接种家兔,却未出现热型反应。在２～８℃保存１８个月的３批试验疫苗接种猪,皆能抵抗猪瘟石门系强毒的攻击。     

狂犬病病毒糖蛋白基因正向重组伪狂犬病病毒（疫苗株TK^-／gI^-）的构建

构建以伪狂犬病病毒(PRV)为载体表达狂犬病病毒糖蛋白的重组活载体疫苗。采用AseⅠ/MluⅠ切下EG-FP-rgp的表达盒,将其克隆入p8-AA载体的酶切位点处,经酶切鉴定为正向连接,阳性重组子命名为p8-EGFP/rgp。将该质粒与PRV TK-/gI-基因组在质脂体介导下共转染PK-15细胞,获得PRV-EGFP/rgp重组病毒;通过噬斑克隆对其进行筛选、纯化,并通过RT-PCR、Southern-blot、Western-blot和间接免疫荧光对其进行鉴定,并对重组病毒的滴度、外源基因的遗传稳定性及其与亲本病毒株生长特性的关系进行了测定。结果表明:重组病毒的滴度(TCID50)为108.125/mL;外源基因在细胞内得到了有效的表达,并具有良好的免疫反应性和遗传稳定性;PRV-EGFP/rgp与亲本病毒PRV TK-/gI-生长趋势差异不显著。通过构建表达狂犬病病毒糖蛋白正向重组PRV的活载体疫苗的研制,为狂犬病疫苗的研制提供了新的思路和方法。     

猪瘟无明胶无蛋白耐热活疫苗的研制及冻干工艺

为提高猪瘟(CSF)活疫苗的耐热性能,同时避免明胶和蛋白对猪只产生的免疫副反应,用葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、氨基酸等成分设计无明胶无蛋白耐热保护剂,根据配方的共晶点、塌陷温度科学设计冻干程序,并比较了不同预冻方式对猪瘟活疫苗效价的影响。结果表明,猪瘟病毒采用无明胶无蛋白耐热保护剂配方A冻干后具有较好的耐热性能,37℃保存10,15d,病毒的耐热损失分别为0.6lg和0.9lg;对快冻、慢冻以及退火3种不同的冻干方式进行比较,发现对猪瘟病毒冻干损失由大到小依次为:退火慢冻快冻,而耐热损失则相反;与传统的含明胶含蛋白耐热疫苗相比,猪瘟无明胶无蛋白耐热疫苗耐热效果更好,可在2~8℃长期保存30个月,动物试验表明该疫苗对猪只安全、无副反应。     

猪伪狂犬病活疫苗（Bathar-K61株）免疫佐剂的筛选

为筛选到一种适合猪伪狂犬病活疫苗的免疫佐剂,本研究通过稳定性试验、病毒效价测定、安全性试验、效力试验对5种不同类型免疫佐剂(AD01、AD02、AD03、AD04和AD05)进行了比较筛选.稳定性试验结果表明,AD01、AD03、AD04和AD05 4种佐剂稀释疫苗后6h不分层,表现出良好的稳定性,而AD02佐剂稀释疫苗1h后出现分层;病毒效价测定结果表明,AD01、AD03、AD04 3种佐剂稀释后疫苗病毒滴度为106.25-6.50TCID50/100 μL,与对照组病毒滴度无差异,而AD05佐剂稀释疫苗后,测得的病毒滴度低于对照组,仅为103.5～5.17TCID50/100 μL,对病毒效价有干扰;安全性试验表明,用AD01佐剂稀释疫苗免疫猪群后,猪只体温升高,平均体温为(40.3±0.2)℃,20％(2/10)的猪只出现呕吐,40％ (4/10)的猪只出现食欲下降和精神不振的临床症状,AD03、AD04佐剂稀释疫苗免疫猪群后,临床表现无异常,与对照组一致;效力试验结果表明,剩余的AD03、AD04两种佐剂稀释疫苗后在第7天均可检测到中和抗体,第60天抗体中和效价平均值达到高峰,分别为69.8±3.3和69.5±2.8,高于对照组的57.8±7.0.筛选结果说明,AD03、AD04两种佐剂均适用于猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株),此研究为提高猪伪狂犬病活疫苗(Bathar-K61株)的使用效果进行了有益的探索.     

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究：Ⅱ，鸡传染性法氏囊病弱毒（B87）冻干活疫苗耐热保护剂的试验

用耐热冻干保护剂配制的鸡传染性法氏囊病（B87）试验疫苗，在2－8℃条件下，保存12、24个月效价基本不变，保存37个月后，对鸡免疫攻毒,保护率仍为91％－100％。     

禽偏肺病毒病（B亚型）活疫苗（LN16-A株）冻干保护剂筛选和冻干工艺的优化

通过调整蔗糖明胶保护剂中蔗糖和明胶的比例、调整病毒液和冻干保护剂的添加比例,确定蔗糖添加量为40%、明胶添加量为8%配制的保护剂,病毒液与其按7∶1的比例冻干的制品性状较好,病毒含量较高。同时进行了禽偏肺病毒病（B亚型）LN16-A株不同装量最佳冻干曲线优化,对预冻时间、升华阶段（一期干燥）温度和时间、解析干燥（二期干燥）最高许可温度及时间进行了优化,结果表明,1.5 m L/瓶装量的预冻时间2 h、升华温度为5～10℃、升华时间为11 h、干燥温度为30℃维持6 h;2.0 m L/瓶装量的预冻时间h、升华温度为5～10℃、升华时间为14 h、干燥温度为30℃维持6 h;3.0 m L/瓶装量的预冻时间4 h、升华温度为5～10℃、升华时间为17 h、干燥温度为30℃维持6 h,为最优冻干曲线。     

鸡马立克氏病1型（CVI988／Rispens）活疫苗的研制

鸡马立克氏病1型（CVI988／Rispens）活疫苗毒力稳定，免疫原性好。免疫期可持续1年半，在液氮中保存，有效期1年以上，免疫鸡临床保护率近100％，对预防各品种雏鸡马立克氏病有明显效果。     

布氏菌病活疫苗（Rev.1株）冻干保护剂工艺的研究

布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺借鉴、采纳布氏菌病活疫苗(S2株)成熟的冻干工艺及菌液的配比,对冻干保护剂的选择进行了优化。我们选择蔗糖明胶保护剂和蔗糖脱脂乳保护剂,保护剂与布鲁氏菌Rev.1株菌液以16的比例混合,冻干后测定其活菌含量。结果显示,3批使用蔗糖脱脂乳保护剂的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12×10^9CFUmL、12.44×10^9CFUmL、12.65×10^9CFUmL;使用蔗糖明胶再加入终浓度约1%硫脲的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.34×10^9CFUmL、12.62×10^9CFUmL、12.91×10^9CFUmL;使用蔗糖明胶的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.22×10^9CFUmL、12.64×10^9CFUmL、12.8×10^9CFUmL。3种冻干保护剂对冻干疫苗的活菌含量影响无明显差异,但使用蔗糖明胶保护剂制备冻干疫苗时加入适量硫脲可适当增加冻干疫苗的耐热性,因此我们选择10%明胶、20%蔗糖冻干保护剂与菌液以1∶6配比比例混合,再加入终浓度约为1%的硫脲作为布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺。     

延长鸡传染性支气管炎H_（52）、H_（120）冻干疫苗保存期的试验

延长鸡传染性支气管炎Ｈ_（５２）、Ｈ_（１２０）冻干疫苗保存期的试验付丽杰，丁国义，冯立秋（黑龙江省生物制品一厂·哈尔滨·１５００６９）按现行《规程》规定，鸡传染性支气管炎弱毒冻干苗的保存期暂定为一年．为了进一步了解该疫苗在－１５℃以下的保存时间，我们...