一株鸡大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及治疗试验

为探究大肠杆菌噬菌体的生物学特性及其治疗效果,本研究采用双层平板法分离纯化大肠杆菌噬菌体,并测定噬菌体的效价、温度稳定性、p H稳定性、感染复数(MOI)、一步生长曲线等生物学特性,以及噬菌体治疗大肠杆菌病的效果。结果显示分离的噬菌体Bp1805最佳MOI为1时,其效价可达2.4×10^10 pfu/m L;噬菌体Bp1805对温度的耐受范围较广,在p H5~p H10范围内非常稳定,该噬菌体潜伏期为20 min,裂解期为50 min。大肠杆菌病治疗试验结果显示,注射噬菌体比口服噬菌体治疗效果好,大肠杆菌病的防治效果与噬菌体治疗方式和治疗时间有关;噬菌体治疗大肠杆菌病效果优于恩诺沙星和硫酸庆大霉素。噬菌体Bp1805能够裂解致病性大肠杆菌,为临床大肠杆菌病的噬菌体防治提供参考依据。     

大肠杆菌噬菌体治疗制剂的研究进展

近年来,由于兽医临床耐药大肠杆菌的不断出现,新抗生素的研制困难重重;因此研究大肠杆菌噬菌体用于治疗大肠杆菌感染受到重视.文章从噬菌体类型、大肠杆菌噬菌体溶菌机制、大肠杆菌噬菌体生物学特性、动物试验等方面进行了论述,旨在为治疗由大肠杆菌引起的疾病提供新的、有效的方法.     

噬菌体在治疗大肠杆菌诱导的肉鸡气囊炎中的作用研究

为验证噬菌体对大肠杆菌诱导的肉鸡气囊炎的治疗效果,选择高致病性大肠杆菌采用灌服结合肌肉注射方案诱导气囊炎模型,并采用噬菌体、抗菌肽、抗生素等方法进行治疗。实验结果表明:从剖检结果、降低死淘率的情况来看,多西环素治疗大肠杆菌性气囊炎效果最好,噬菌体、林可霉素治疗效果相当,抗菌肽效果较差,阴性对照(未治疗)组死亡率最高,达71.4%。综上所述,噬菌体制剂可用于大肠杆菌性肉鸡气囊炎的辅助性治疗。     

大肠杆菌噬菌体BP16对鸡大肠杆菌病的防治效果

【目的】 探究大肠杆菌噬菌体BP16对O2血清型禽致病性大肠杆菌感染引起的鸡大肠杆菌病的防治效果, 以及噬菌体BP16的最佳治疗剂量。【方法】 将O2血清型禽致病性大肠杆菌新鲜培养物稀释成5×10¹⁰、5×10⁹、5×10⁸、5×10⁷和5×10⁶ CFU/mL 5个浓度梯度, 以测定禽致病性大肠杆菌的半数致死量(LD₅₀), 确定其感染剂量; 选取常用的对革兰阴性菌有抑菌或杀菌作用的药敏纸片进行药敏试验, 筛选出阳性对照药物; 经无菌试验和安全性试验确定噬菌体裂解液的无菌性及安全性, 用于后续试验。将80只雏鸡随机分为5个试验组与3个对照组, 试验组在雏鸡攻毒前后不同时间腹腔注射大肠杆菌噬菌体BP16, 3个对照组分别腹腔注射氟苯尼考、大肠杆菌菌液、生理盐水, 其余条件一致, 连续饲养7 d, 记录雏鸡的死亡率, 评价大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌人工感染试验鸡的防治效果。【结果】 O2血清型大肠杆菌的LD₅₀为1.5×10⁸ CFU/mL, 筛选出氟苯尼考作为阳性对照药物, 噬菌体裂解液中无菌, 噬菌体悬液对雏鸡安全, 可用于后续防治试验。雏鸡感染大肠杆菌前6 h使用噬菌体能有效预防大肠杆菌病, 在感染同时至感染后6 h内使用噬菌体, 能有效治疗大肠杆菌病, 且噬菌体治疗效果优于氟苯尼考; 当大肠杆菌攻毒剂量为1.5×10⁸ CFU时, 噬菌体剂量为1.5×10⁹ PFU时治疗效果为最佳。【结论】 大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌病具有防治作用, 本研究为进一步应用噬菌体防治大肠杆菌病及开发大肠杆菌噬菌体制剂提供了科学依据。     

噬菌体RZⅢ-3的生物学特性分析及对鸡大肠杆菌的疗效

为了解决目前严重的抗生素耐药性,寻找抗生素的替代品,作者探究了大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3的基本生物学特性及其对致病性大肠杆菌1019的治疗效果。大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3的生物学特性分析显示其效价可达到10~9pfu·mL~(-1),透射电镜结果显示该噬菌体属于有尾目T4噬菌体。热稳定性较好,在60℃保温1h后噬菌体效价仍可达到10~7pfu·mL~(-1)以上。对pH值的适应范围较宽,在pH4~10内仍能保持较高的裂解活性;该噬菌体的最适pH在7.0左右。最佳感染复数(MOI)为0.1,感染宿主菌的潜伏期20min,爆发期70min。大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3对大肠杆菌1019有较强的裂解能力,可使SPF鸡肠道内大肠杆菌1019的数量降低96.5%。该大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3在治疗特定的大肠杆菌感染中具有较大的应用潜能。     

致病性大肠杆菌噬茵体的治疗性试验初探

大肠杆菌病一直是困扰养殖业发展的主要问题之一,治疗的常用方法主要是使用抗生素。但随着耐药菌的大量出现,抗生素已无法达到理想的治疗效果。由于噬菌体能够杀死细菌,所以噬菌体在许多应用领域中具有减轻细菌病原体产生危害的作用。试验通过培养菌种A（菌毛型K88）、B（菌毛型I（99）、C（菌毛型987P）、D（菌毛型F41）制成悬液后分别与污水样品共同培养。增殖后将混合培养液离心,制备噬菌体悬液,取上清液过滤除菌后,得到较纯噬菌体样品（噬菌体的培养及分离）。通过单层平板法鉴定是否有噬菌体的存在（噬菌体的鉴定）。用双层平板法纯化噬菌体,制成噬茵体制剂（噬菌体的纯化）。利用该噬菌体制剂对600只小白鼠进行动物试验,观察其在预防和治疗大肠杆菌病方面的疗效。试验结果表明,该噬菌体能有效治疗大肠杆菌病;用混合注射法治疗小白鼠,其发病率明显下降到30％,这对替代抗生素用于防治大肠杆菌疾病具有一定的实践意义。     

致病性大肠杆菌噬菌体分离及裂解特性分析

以鸡源致病性大肠杆菌O18为宿主菌,采用双层琼脂平板法从鸡场粪样中分离出1株噬菌体,命名为Bp-YK2。采用经纯化的噬菌体对24株鸡源致病性大肠杆菌进行裂解试验,并利用PCR技术对衣壳基因gene23进行扩增。结果显示,该噬菌体效价为1.55×1010pfu/mL,宽噬率为41.67%;噬菌体衣壳基因gene23与噬菌体Bp7同源性最高,同源性为97%,推测该噬菌体为肠杆菌T4噬菌体。本研究为开发治疗耐药大肠杆菌的噬菌体制剂奠定基础。     

大肠杆菌噬菌体抗性菌株与其敏感菌株的比较研究

噬菌体抗性菌株的产生是噬菌体治疗领域普遍关注的问题,为研究噬菌体的抗性菌株与其敏感菌株之间的的差别,本研究将大肠杆菌短尾噬菌体Bp4与宿主大肠杆菌共培养,经双层平板法筛选,结果显示获得了对噬菌体具有抗性的大肠杆菌,且该抗性菌株不能被Bp4裂解.将该抗性菌株与其敏感菌株进行了形态及培养特性的比较,发现二者基本一致;基因组...     

鸡大肠杆菌噬菌体生物特性的研究及临床应用

研究采用前期试验分离到的大肠杆菌噬菌体进行试验,通过检测噬菌体生物特性从而指导制定噬菌体临床预防和治疗试验。结果表明,噬菌体在pH值4～9、热稳定性在37℃以下、0～75 min为1个生长周期,最佳感染复数为1,此时噬菌体的效价稳定性最好;通过攻毒预试验和治疗试验,预防组效果不明显,存活率为55%;灌胃口服C、D和E组治疗效果为高剂量组比低剂量组效果好,存活率分别为60%、75%和80%;注射治疗组效果最好,存活率为85%。研究表明,噬菌体有治疗禽大肠杆菌病的作用。     

肉鸡大肠杆菌病的噬菌体治疗

鸡大肠杆菌病是由病原性大肠艾希氏杆菌引起的禽类传染病,各种日龄鸡及各品种鸡均易感染,表现为大肠杆菌性败血症、大肠杆菌性肉芽肿、气囊炎、肝周炎、肿头综合征、腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、全眼球炎及脐炎等一系列疾病。近年来,随着养鸡业的不断发展,特别是集约化饲养,该病在一些鸡场中不同程度发生,给养鸡业带来了严重危害,并造成较大的经济损失,不少鸡场由于大肠杆菌造成的死鸡数往往占死亡数的50％以上。噬菌体是一类能够感染和杀死细菌的病毒,这使其有可能成为抗生素的替代品而用于预防和治疗细菌性感染、减少农产品中的食源性病原体。细菌病的噬菌体治疗前景有赖于多价噬菌体的分离及多株不同宿主谱噬菌体的混合应用,相信在不久的将来,通过改造现有噬菌体的宿主谱或从自然界分离到更多的多价噬菌体,利用噬菌体制剂将可以轻松有效地控制鸡大肠杆菌病。     

应用DGGE分析噬菌体对感染大肠杆菌雏鸡肠道菌群的影响

建立雏鸡大肠杆菌感染动物模型,应用PCR-DGGE技术对不同组别(对照组,大肠杆菌感染阳性组,噬菌体作用组)雏鸡的粪便菌群16S r DNA V6区段进行分离。结果显示,随着日龄的增长,雏鸡肠道菌群多样性逐渐增多。测序结果表明,肠球菌、大肠杆菌、葡萄球菌以及梭菌等均有出现;DGGE图谱显示大肠杆菌感染雏鸡后,雏鸡肠道菌群出现变化,图谱条带出现增加或缺失,噬菌体作用后有些条带于第1天或第3天逐步恢复正常,有些菌群不受大肠杆菌影响;聚类分析图显示噬菌体作用第二天后肠道菌群多样性开始恢复。本研究为探讨噬菌体治疗雏鸡大肠杆菌病的作用机制奠定了基础。     

鸡大肠杆菌宽谱噬菌体的分离及裂解性研究

为了解鸡宽谱大肠杆菌噬菌体的裂解特性,本试验以30株大肠杆菌为宿主菌,从8份粪便中成功分离出5个噬菌体,并从中筛选出1个强裂解性宽谱大肠杆菌噬菌体,命名为Z-SN5,宽噬率为70%,热稳定性相对良好,60℃作用1 h,尚有活性;耐碱性强于耐酸性,在pH值=7时活性最高,经PCR鉴定后,成功扩增出目的基因片段。本试验为今后研究噬菌体治疗鸡大肠杆菌病奠定基础。     

一株宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的进化分析

裂解性噬菌体能够特异性裂解细菌,本研究分析了一株从自然界中分离的宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的种属和进化关系。前期用Adams双层平板琼脂法从猪场污水中分离纯化出一株裂解性噬菌体v B_Eco M_JS09,裂解谱分析能够裂解禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌。扩增分析gene18、gene 23序列,并根据gp18和gp23氨基酸序列构建系统进化树,分析JS09的遗传进化关系。结果表明噬菌体v B_Eco M_JS09基因组为ds DNA,属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科、T4-like噬菌体、T-evens亚群。其gp18氨基酸序列与大肠杆菌噬菌体RB69同源性最高,为100%;gp23氨基酸序列与大肠杆菌T4噬菌体同源性最高为96%。该结果为禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌的防控提供了生物学基础。     

致病性大肠杆菌携带原噬菌体的预测及耐药性与毒力研究

【目的】研究致病性大肠杆菌携带原噬菌体的比例、原噬菌体携带毒力基因及耐药基因的情况,了解致病性大肠杆菌中原噬菌体对菌株的耐药性与毒力的影响,保证噬菌体生产菌的生物安全性,为大肠杆菌噬菌体的基础研究与应用提供借鉴。【方法】从NCBI中下载大肠杆菌全基因组信息,通过在线网站预测大肠杆菌中携带的原噬菌体数目,并分析原噬菌体的GC含量、基因组大小、占细菌基因组比例等基因组特征及完整型原噬菌体的类型,对原噬菌体做初步分类,统计分析完整型原噬菌体中携带耐药基因数目、耐药表型、耐药机制与毒力基因数目、毒力基因家族分布等。【结果】112株大肠杆菌携带完整型原噬菌体1 024个,疑似型原噬菌体287个,缺陷型原噬菌体505个。1 024个完整型原噬菌体中,多数与长尾噬菌体相似,占70.21%(719/1 024);共有63种噬菌体类型,其中BP4795(登录号：NC＿004813.1)类型的占比最高,达到19.24%(197/1 024),其次是DE3(登录号：NC＿042057.1),占比11.72%(120/1 024)。大肠杆菌携带原噬菌体的GC含量在38%～57%之间,基因组大小为3.1～152...     

采用噬菌体治疗呼吸性大肠杆菌病

葡萄牙Controlvet公司的研发人员采用细菌噬菌体替代抗生素来治疗细菌病。他们对3种大肠杆菌噬菌体（phiF87E（肌解噬菌体）、phiF258E（长尾噬菌体）、phiF61E（肌解噬菌体））的给药方式和剂量进行了研究。     

噬菌体控制致病性大肠杆菌的研究进展

大肠杆菌是引起细菌类食物中毒的主要原因之一,近年来,由大肠杆菌引起的食品安全事件频发,严重危害人类健康。各国科学家相继从肉类、蔬菜水果和牛奶等食品,或养殖场中分离得到了一些血清型的致病性大肠杆菌,其中最常见、流行最广泛的有O157:H7,K88,K99,O149等。然而,由抗生素滥用导致的耐药菌株出现,以及在动物饲养方面,抗生素种类和用量上的限制,使得人们对致病性大肠杆菌的控制更加困难。噬菌体是细菌的天敌,具有感染并裂解细菌的功能,与抗生素相比,噬菌体制剂具有特异性强、自我增殖快、研发时间短等优点,因此近年来噬菌体作为控制致病性大肠杆菌的研究受到广泛关注。本文就噬菌体在致病性大肠杆菌的生物防控方面的应用研究进展作一综述,以期为噬菌体及其制剂在保障动物性食品安全及动物疾病治疗领域的深入研究提供一定的参考。     

家禽预接种噬菌体可降低其对大肠杆菌病的疗效

<正>美国阿肯色州立大学家禽科学中心研究人员就噬菌体对家禽大肠杆菌病的治疗效果进行了研究。试验共分5组,分别为对照组、处理组Ⅰ(10和17日龄接种噬菌体)、处理组Ⅱ(17日龄接种大肠杆菌)     

猪肠道大肠杆菌噬菌体对产肠毒素大肠杆菌的抑菌作用

此前本实验室从健康猪肠道及粪样中分离纯化得到57株大肠杆菌噬菌体，发现其中有12株噬菌体可裂解产肠毒素大肠杆菌（ETEC），本研究旨在探究这些大肠杆菌噬菌体的宿主谱及抑菌效力，以期了解肠道内大肠杆菌噬菌体对机体的保护作用。以89株大肠杆菌为宿主菌（其中包括5株ETEC），采用点滴法、双层平板法和液体扩增法测定噬菌体的宿主谱，利用浊度法测定噬菌体对ETEC的抑菌效力，并对噬菌体分类进行鉴定。12株噬菌体均能裂解一种或多种ETEC，但是均无法通过感染ETEC而增殖。S143_1、S143_2、S144_2、S35、S86_1、L86及S172等7株噬菌体虽然无法通过ETEC产生子代噬菌体，但在感染复数（MOI）为10或100时仍对ETEC具有显著的抑菌效力。12株噬菌体中有8株为T4样噬菌体，其他4株噬菌体均属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科。本研究从猪肠道内分离到12株大肠杆菌噬菌体，虽然无法感染ETEC，但仍可裂解ETEC，其中，7株在MOI为10或100时可有效地抑制ETEC生长。     

猪肠道大肠杆菌噬菌体对产肠毒素大肠杆菌的抑菌作用

此前本实验室从健康猪肠道及粪样中分离纯化得到57株大肠杆菌噬菌体,发现其中有12株噬菌体可裂解产肠毒素大肠杆菌(ETEC),本研究旨在探究这些大肠杆菌噬菌体的宿主谱及抑菌效力,以期了解肠道内大肠杆菌噬菌体对机体的保护作用。以89株大肠杆菌为宿主菌(其中包括5株ETEC),采用点滴法、双层平板法和液体扩增法测定噬菌体的宿主谱,利用浊度法测定噬菌体对ETEC的抑菌效力,并对噬菌体分类进行鉴定。12株噬菌体均能裂解一种或多种ETEC,但是均无法通过感染ETEC而增殖。S143_1、S143_2、S144_2、S35、S86_1、L86及S172等7株噬菌体虽然无法通过ETEC产生子代噬菌体,但在感染复数(MOI)为10或100时仍对ETEC具有显著的抑菌效力。12株噬菌体中有8株为T4样噬菌体,其他4株噬菌体均属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科。本研究从猪肠道内分离到12株大肠杆菌噬菌体,虽然无法感染ETEC,但仍可裂解ETEC,其中,7株在MOI为10或100时可有效地抑制ETEC生长。     

驴源大肠杆菌噬菌体的分离鉴定与生物学特性研究

为了研究驴源大肠杆菌性腹泻的治疗方法,试验采用双层平板法从驴粪便中分离并纯化出1株大肠杆菌噬菌体(DE5),对分离到的噬菌体进行效价、裂解谱、最佳感染复数的测定以及形态观察,绘制噬菌体的一步生长曲线,并进行宿主菌的体外裂解试验,此外还研究了噬菌体对温度、pH值、紫外线和氯仿的耐受性。结果表明:噬菌体DE5为短尾噬菌体,形成均匀透亮的蚀斑,效价能达2.4×10~9 pfu/mL,对驴源大肠杆菌的裂解率达32.6%;最佳感染复数为0.000 01;噬菌体潜伏期为15 min,爆发期为20 min,爆发量约为100 pfu/个;噬菌体对温度的耐受性良好,耐强碱但不耐酸;在短时间内对紫外线具有耐受性,对氯仿不敏感。