硫酸化20(S)一人参皂苷Rh2对小鼠脾淋巴细胞分泌IL -4和IFN -γ的影响

为了进一步评价硫酸化修饰后人参皂苷Rh2的免疫活性变化,试验分别采用MTI法和ELISA法对比研究了浓度为0.2 mg/L、1 mg/L、5 mg/L的人参皂苷Rh2及其硫酸化衍生物(S -Rh2 -1和S - Rh2 -2)对ConA刺激小鼠的脾淋巴细胞增殖和分泌IL -4、IFN -γ的影响.结果表明:S-Rh2 ...     

人参皂苷-Rh2的硫酸化衍生物鉴定及其对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

为了评价硫酸化修饰后人参皂苷-Rh2的活性变化,利用薄层色谱、红外光谱及质谱鉴定所用Ⅱ a、Ⅱb为人参皂苷-Rh2的硫酸化衍生物,并探讨了人参皂苷-Rh2及其硫酸化衍生物Ⅱa、Ⅱ b对小鼠的巨噬细胞吞噬中性红和在LPS刺激下分泌TNF-α量的影响.结果显示,衍生物Ⅱ a、Ⅱ b在1 mg/L时均能显著促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性(P＜0.05),Rh2在0.2mg/L和5mg/L亦可显著促进巨噬细胞吞噬中性红(P＜0.05).Ⅱa 0.2、5 mg/L时,Ⅱb在为5 mg/L时其在LPS的协同作用下能极显著促进小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α(P＜0.01),而Rh2在5mg/L表现出极显著的抑制 LPS促进小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α作用(P＜0.01).结果提示,Rh2硫酸化修饰后对巨噬细胞的功能有显著增加作用.     

硫酸化人参总皂苷体外对免疫活性细胞功能的调节

采用MTT法及形态学观察法研究4种硫酸化人参总皂苷衍生物对体外ConA促淋巴细胞增殖、转化的影响,并采用乳酸脱氢酶释放法探讨了其对NK细胞杀伤活性的影响.结果表明,人参总皂苷对淋巴细胞增殖影响不明显,较高质量浓度(>150 mg/L)能抑制淋巴细胞增殖(P<0.01);硫酸化人参总皂苷衍生物2、3在一定质量浓度下都能明显或极明显增加淋巴细胞(鸡的外周血淋巴细胞,小鼠脾淋巴细胞)增殖活性(P<0.05,P<0.01),且所试质量浓度硫酸化人参总皂苷衍生物的D值显著或极显著高于同质量浓度人参总皂苷(P<0.05.P<0.01);人参总皂苷、衍生物2、3都能提高小鼠NK细胞的活性(P<0.01),且衍生物2、3的作用比人参总皂苷更强(P<0.05,P<0.01).结果提示,人参总皂苷经硫酸化修饰后,在体外能明显增强免疫活性细胞功能.     

硫酸化人参总皂苷对人工感染MDV鸡淋巴细胞活性的调节

鸡马立克氏病病毒（MDV）经腹腔注射感染8日龄雏鸡,攻毒15 d后检测硫酸化人参总皂苷对鸡外周血白细胞数和淋巴细胞增殖活性的影响,并利用半定量RT-PCR方法分析外周血淋巴细胞IFN-γmRNA的表达水平。结果表明,MDV感染能引起鸡淋巴细胞百分比相对增多（P〈0.01）,人参总皂苷及其硫酸化人参总皂苷不能改变MDV所致变化（P〉0.05）,且硫酸化人参总皂苷与人参总皂苷之间没有差异（P〉0.05）;MDV感染极显著抑制淋巴细胞增殖（P〈0.01）,人参总皂苷能明显改善MDV对感染鸡淋巴细胞增殖的抑制（P〈0.01）,硫酸化人参总皂苷促进了MDV所致的抑制状态（P〈0.01）;人参总皂苷及其硫酸化人参总皂苷均能增强MDV所致鸡淋巴细胞IFN-γmRNA的表达,与健康组相比,硫酸化人参总皂苷极显著增加IFN-γmRNA表达（P〈0.01）。结果提示,硫酸化人参总皂苷对人工感染MDV鸡的淋巴细胞活性具有调节作用,其作用比人参总皂苷的作用更强。     

硫酸化人参总皂苷的制备及其对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响

用氯磺酸-吡啶试剂制备了硫酸化人参总皂苷衍生物，采用红外光谱仪检测到制备的硫酸化人参总皂苷衍生物中在1230cm^-1和810cm^-1有硫酸酯键的特征吸收峰。为了初步探讨硫酸化人参总皂苷的免疫学活性．以MTT法测定了人参总皂苷及其衍生物对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响。结果表明，150μg／m1人参总皂苷和衍生物均能显著抑制鸡外周血淋巴细胞的增殖（P〈0．05），10μg／ml的衍生物能极显著促进淋巴细胞增殖，与同浓度人参总皂苷相比活性极显著增强（P〈0．01）。实验结果提示，对人参总皂苷进行硫酸化修饰是可行的，经硫酸化后人参总皂苷衍生物的免疫活性明显增强。     

硫酸化20（S）-人参皂苷Rh2体外对鸡免疫活性细胞功能的影响

为了评价硫酸化人参皂苷Rh2化学修饰前后免疫活性变化，采用MTT法及流式细胞术研究体外对ConA促鸡外周血淋巴细胞增殖的影响，采用乳酸脱氢酶释放法研究体外对鸡外周血NK细胞杀伤活性的影响。结果表明：Rh2、Rh2溶剂及硫酸化Rh2低浓度时都能促进淋巴细胞增殖，高浓度时能抑制淋巴细胞增殖，Rh2溶剂及硫酸化Rh2都显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）高于同浓度的Rh2。Rh2及Rh2溶剂都能显著促进鸡外周血NK细胞杀伤活性，但Rh2极显著（P〈0．01）低于同浓度Rh2溶剂，而硫酸化Rh2表现一定促进作用。结果提示：Rb2体外能抑制免疫活性，化学修饰后的硫酸化Rh，体外能促进免疫活性。     

人参总皂苷及其衍生物对小鼠淋巴细胞和NK细胞免疫活性的影响

为了提高人参总皂苷的生物学活性,对其进行了硫酸化修饰,并探讨总皂苷及其衍生物对小鼠脾T、B淋巴细胞增殖（MTT法）和NK细胞杀伤活性（乳酸脱氢酶释放法）的影响。结果表明,2种衍生物质量浓度在50～500 mg/L时可以促进小鼠脾T、B淋巴细胞的分化增殖和NK细胞对YAC-1的杀伤作用,质量浓度较高时促进作用明显优于总皂苷;衍生物质量浓度达到1 400 mg/L时,仍然可以显著促进T淋巴细胞的增殖。试验结果提示,人参皂苷的这种衍生物有可能成为一种毒副作用较小、免疫活性更强的药物。     

中药地翁颗粒对小鼠脾淋巴细胞功能的影响

为观察中药地翁颗粒在体外对小鼠脾淋巴细胞功能的影响,设置高（100mg/L）、中（10mg/L）、低（1mg/L）3个剂量组,采用3 H法进行刀豆蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）诱导脾淋巴细胞增殖试验,ELISA方法检测ConA或金黄色葡萄球菌Cown株灭活菌体（SAC）刺激的脾淋巴细胞上清液IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α的含量。结果显示,在安全浓度范围内,地翁颗粒能够明显促进T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖;能够促进ConA刺激的淋巴细胞分泌INF-γ;能够促进SAC刺激的淋巴细胞分泌IL-12、INF-γ和IL-6,并抑制IL-10的分泌。结果表明,地翁颗粒能够有效调节小鼠脾淋巴细胞的功能,促进细胞免疫。     

蓝黄青口服液对小鼠体外诱生细胞因子的影响

在对体外诱生小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子的影响试验中,用双抗体夹心ELISA法测定蓝黄青口服液(LHQY)对脾淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ及INF-α含量的影响,结果显示,LHQY在有无诱生剂ConA存在的条件均能极显著促进小鼠T淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ(P<0.01),加入诱生剂的组,分泌的量较大;在PHA-M的协同作用下,除药物浓度为1:10外,均可极显著促进小鼠脾淋巴细胞分泌INF-α(P<0.01),但其本身对于INF-α的分泌主要起抑制作用.     

人参皂苷Rh2硫酸化衍生物抗炎作用的分子机制

通过构建的细菌脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞（RAW264．7）的体外炎症模型,研究了不同质量浓度人参皂苷Rhz硫酸化衍生物B2（Rh2-B2）对TNF-a、IL-6、IL-1β和IL-10合成的影响,以及对NF-kB信号通路的影响。结果显示,1mg／L和5mg／L的人参皂苷Rh2-B2能显著抑制RAW264．7合成TNF-a、IL-6和IL-18（P〈0．01）,同时显著促进IL-10的合成（P〈0．01）,并且通过显著抑制IkBa的降解而阻止NF-kB／p65易位入核（P〈0．01）。结果表明,人参皂苷Rh2—B2可能通过阻断NF-kB信号通路,抑制LPS诱导的炎性细胞因子的产生,进而发挥其抗炎作用。     

1，25-(OH)_2D_3对体外培养围产期奶牛外周血淋巴细胞转化率及γ-干扰素(IFN-γ)的影响

体外培养围产期奶牛外周血淋巴细胞,分别添加0、0.01、0.1、1、10和100nM的1,25(OH)_2D_3,研究1,25-(OH)_2D_3对奶牛外周血淋巴细胞免疫功能的影响。结果表明,1,25-(OH)_2D_3对淋巴细胞转化率没有影响,但可以通过抑制IFN-γ的分泌影响奶牛的细胞免疫功能。添加0.01～100nM的1,25-(OH)_2D_3对淋巴细胞的转化率没有显著影响,但剂量依赖性抑制了ConA和PWM诱导的淋巴细胞IFN-γ的产量。当1,25(OH)_2D_3浓度达到0.1nM、1nM时与对照组相比分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)抑制ConA诱导的淋巴细胞IFN-γ的产量。以PWM激活的细胞在培养48h、72h,1,25-(OH)_2D_3添加量在0.1～100nM范围均极显著抑制IFN-γ的产生(P<0.01)。添加0.01nM 1,25(OH)_2D_3对IFN-γ的抑制作用相对较小(P>0.05),在培养48h后并未表现出显著的抑制作用,但培养72h后也极显著的抑制了IFN-γ的产生(P<0.01)。     

人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖抑制作用及其机理

以不同质量浓度的人参皂苷Rh2与马立克氏病肿瘤细胞系MSB-1细胞共同作用,利用改良MTT法测定了人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖抑制作用,并通过流式细胞术、荧光检测和电镜形态学观察等方法探讨其抑制机理.结果显示:人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖存在押制作用,并呈剂量依赖性,人参皂苷Rh2与MSB-1细胞培养72 h后的半敷抑制质量浓度为0.65 mg/L;流式细胞术测定表明,人参皂苷Rh2可阻滞MSB-1细胞于S期;荧光检测和透射电镜观察表明,人参皂苷Rh2可以诱导部分MSB-1细胞发生凋亡.     

经分子修饰后的人参皂苷-Rh2对小鼠免疫功能的影响

为了提高人参皂苷-Rh2的生物学活性和水溶性,对其分子结构进行了一定的化学修饰,并考察其修饰后对小鼠免疫功能的影响。结果与对照组比较,衍生物浓度在5-100μg/ml时可显著促进小鼠B淋巴细胞的增殖(P<0.05),但对T淋巴细胞增殖的促进作用不明显;浓度在50-300μg/ml时可极显著提高NK细胞对YAC-1的杀伤作用(P<0.01);浓度在5-200μg/ml时极显著增强小鼠的代谢功能(P<0.01),一定程度促进了巨噬细胞吞噬中性红作用。试验结果提示,经化学修饰后的人参皂苷-Rh2水溶性良好,可显著提高机体的免疫力。     

富硒女贞子蛋白对奶牛外周血淋巴细胞增殖活性及其细胞因子的影响

通过提取富硒女贞子蛋白和普通女贞子蛋白,采用MTT和ELISA法检测其对奶牛外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte;PBL)增殖活性和多种细胞因子分泌功能的影响。试验结果表明,2种蛋白均可促进ConA刺激下的奶牛外周血淋巴细胞增殖,效果随浓度的增加而上升,在浓度高于400 mg/L时普通女贞子蛋白较对照组效果显著(P<0.05),富硒女贞子蛋白差异极显著(P<0.01),且富硒女贞子蛋白在各个浓度均优于普通女贞子蛋白,差异显著(P<0.05)。富硒女贞子蛋白组的IL-2、IL4、IL-6、IFN-γ水平均显著高于对照组(P<0.05),其中IL-4水平与对照组差异极显著(P<0.01),普通女贞子蛋白的IL-4和IFN-γ较对照组也有显著提高(P<0.05)说明富硒女贞子蛋白可以进一步提高奶牛外周血淋巴细胞细胞活性,并调升细胞因子的分泌。     

香芪汤及其有效成分对LPS诱导的巨噬细胞MAPK信号通路的影响

为揭示中药香芪汤及其有效成分的体外抗炎作用机理,利用ELISA法研究了不同质量浓度(0.2、1、5 mg/L)的香芪汤对细胞因子TNF-α分泌的影响,并运用Western blot法检测了香芪汤及其有效成分黄芪甲苷、α-香附酮和穿心莲内酯对ERK1/2和JNK1/2的影响.结果显示,1、5 mg/L质量浓度的香芪汤能够极显著抑制RAW264.7巨噬细胞TNF-α的分泌(P＜0.01),香芪汤及其有效成分能够极显著降低JNK1/2和ERK1/2的磷酸化水平(P＜0.01).由此推论,中药香芪汤及其有效成分可能通过抑制炎症因子的分泌,降低MAPK信号通路的活性发挥其抗炎作用.     

玉米赤霉烯酮对小鼠脾淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的影响

采用MTT法、细胞因子ELISA法来分析玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)对离体培养的小鼠淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响。结果表明,不同浓度ZEN对LPS、ConA活化的脾脏T/B淋巴细胞的增殖均具有极显著的抑制作用(P＜0.01),且这种增殖抑制表现出剂量依赖性;低浓度ZEN(1 μg/mL)能显著促进脾脏淋巴细胞分泌IL-10(P＜0.05),而高浓度ZEN(10、25 μg/mL)均能极显著抑制脾脏淋巴细胞分泌IL-10(P＜0.01),并表现出剂量依赖性;不同浓度ZEN(1、10、25 μg/mL)均能显著或极显著抑制脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ(P＜0.05或P＜0.01),并表现出剂量依赖性。     

人参皂苷-Rh2衍生物体外诱生小鼠细胞因子的作用及对NO水平的影响

探讨了经分子修饰后的人参皂苷-Rh2(衍生物)对小鼠脾T淋巴细胞分泌IL-2与IFNγ-、腹腔巨噬细胞分泌TNF-α与NO水平的影响。应用双抗体夹心ELISA法测定3种细胞因子的含量,硝酸还原酶法测定NO的含量。结果表明,衍生物的3个浓度(100,200和300μg/mL)均抑制了IL-2(P<0.01)和NO(P>0.05)的分泌,明显促进了IFN-γ和TNF-α的分泌(P<0.01)。提示衍生物可能是通过细胞因子途径来调节机体的免疫功能。     

蕨麻多糖对小鼠淋巴细胞增殖和一氧化氮分泌的影响

为探讨蕨麻多糖（Potentilla anserine polysaccharide，PAP）免疫调节的作用机理，观察了PAP对小鼠脾淋巴细胞体外增殖和分泌一氧化氮的影响。结果显示，50mg／L PAP配合ConA或LPS（lipopolysaccharide，脂多糖）能使小鼠脾淋巴细胞在体外显著增殖（P〈0．05）；100、200及400mg／L PAP配合ConA或LPS可使小鼠脾淋巴细胞在体外极显著增殖（P〈0．01）；与对照组相比，PAP以不同浓度（50～400mg／L）处理小鼠脾淋巴细胞后一氧化氮分泌量均显著升高（P〈0．05）。试验结果表明，蕨麻多糖能明显促进体外培养的小鼠脾淋巴细胞增殖和分泌一氧化氮，与ConA或LPS有协同作用。     

猴头菇多糖协同ConA对小鼠脾细胞分泌Th1、Th2细胞因子及基因表达的影响

研究了猴头菇多糖协同ConA对小鼠体外脾淋巴细胞分泌Th1、Th2细胞因子的量及mRNA表达量的影响,旨在探讨其协同免疫调节机制。用ELISA法检测HEP协同ConA刺激脾淋巴细胞细胞上清液中Th1、Th2细胞因子的量;RT-PCR法检测Th1、Th2细胞因子和转录因子mRNA的表达。结果显示,HEP在25~400mg/L质量浓度范围内能显著协同ConA刺激T细胞亚群Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ、TNF-α)和Th2细胞因子(IL-4、IL-6)的分泌及mRNA的表达(P0.05),并显著促进转录因子(T-bet、Gata-3)mRNA的表达(P0.05)。结果表明,HEP能协同ConA促进小鼠脾淋巴细胞Th1、Th2细胞因子的分泌及基因的表达,通过调节Th1/Th2平衡,发挥双重免疫调节作用。     

蛹虫草多糖对鸡脾脏淋巴细胞的影响

试验将7种浓度蛹虫草多糖(CMP)单独或与刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)同时加入鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖(A570值)的变化;将5种浓度的CMP 40%乙醇提取物(CMP40)、CMP 50%乙醇提取物(CMP50)分别与ConA加入到鸡脾淋巴细胞的培养体系中,培养24 h后收集细胞培养上清液,测定白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素(IFN-γ)的含量。结果显示,CMP在31.25~2 000μg/mL时,CMP40+ConA组的A570值显著高于ConA对照组;CMP在31.25~500μg/mL时,CMP50+ConA组A570值显著高于ConA对照组,CMP40+LPS组、CMP50+LPS组的A570值显著高于LPS对照组;CMP40在125~1 000μg/mL时、CMP50在500μg/mL时,各多糖组的A570值显著高于细胞对照组;CMP40和CMP50在250~1 000μg/mL时,各多糖组的IL-2和IFN-γ浓度显著高于对照组。结果表明,CMP40和CMP50在合适的剂量能单独或协同ConA、LPS刺激鸡的T、B淋巴细胞增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,从而增强鸡的细胞免疫能力。