桑树原生质体分离条件的优化

为了获得桑树原生质体分离的最优条件,为今后桑树原生质体融合、新种质的获取等植物遗传改良提供理论基础,采用酶解法和血球板计数法,对桑树原生质体分离的影响因素进行研究。结果表明,酶、酶液组合、酶解时间和渗透压稳定剂等都对原生质体的制备有显著的影响,较适宜桑树叶片游离的组合条件是1.0%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.2%离析酶+0.6mol/L甘露醇+CPW盐溶液,酶解温度为28℃±2℃,酶解时间为6h。在此条件下可获得高产量的原生质体。     

正交实验优选非洲菊叶片原生质体分离条件研究

以非洲菊叶片为材料,采用正交实验方案对非洲菊叶片原生质体分离条件进行研究,经综合分析结果表明：以1.0%的纤维素酶和0.75%的果胶酶为混合酶液、6%的甘露醇为渗透压稳定剂的条件下,酶解5h能达到较好的分离效果,获得高质量的非洲菊叶片原生质体。     

卡特兰叶片原生质体分离条件的研究

试验以卡特兰叶片组织为材料,研究了预处理时间、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量等不同因素对其原生质体分离的影响.结果表明,以1%的纤维素酶+0.3%的果胶酶为混合酶液,11%的甘露醇为渗透压稳定剂,在25±1 ℃的条件下,pH为5.8的酶液组合中酶解8 h,获得的原生质体产量最高,可达8.9×106/g鲜重,存活率高达91.2%.     

酶解条件对甘蓝和萝卜原生质体产量及活力的影响

在甘蓝子叶原生质体解离中,加入1%纤维素酶解液和0.1%果胶酶液于50r/min振荡条件下解离效果最佳。在含果胶酶的酶液中,甘蓝子叶原生质体不宜长时间处理。萝卜子叶原生质体在2%纤维素酶液和0.2%果胶酶液中,下胚轴原生质体在1%纤维素酶液和0.1%果胶酶液中可获得较好的分离效果。     

红叶石楠叶片原生质体分离条件的研究

以红叶石楠(Photinia×frasery)叶片为试验材料,研究了预处理时间、酶类组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量及酶解温度等不同因素对其原生质体分离的影响。结果表明,以1.0%的纤维素酶+0.3%的果胶酶为混合酶液,11%的甘露醇为渗透压稳定剂,在25℃±1℃的条件下,酶解8h,获得的原生质体产量最高,可达14.7×106个/g(FW),原生质体活力可达84.5%。     

石斛兰叶片原生质体分离条件研究

[目的]探讨了石斛兰原生质体分离过程中的影响因素,建立最佳的原生质体制备体系。[方法]以石斛兰叶片为材料,采用正交设计研究纤维素酶浓度、酶解时间、温度、pH值以及甘露醇浓度对石斛兰原生质体分离的影响。[结果]以3%纤维素酶R-10＋0.6%果胶酶Y-23为混合酶液,0.5mol/L甘露醇为渗透压稳定剂,在26℃的黑暗条件下,pH值为5.4的酶液组合中,黑暗条件下振荡,酶解15h,获得的原生质体产量最高。[结论]该制备体系为后续原生质体培养和体细胞杂交奠定良好的基础。     

花椒原生质体分离与培养研究

以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响。在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6~0.7 mol·L^-1时分离效果最佳。以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-0.7 mol·L^-1甘露醇+1.0%(w/v)纤维素酶R-10+1.5%(w/v)果胶酶,酶解时间为10 h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×10⁵ 个·g^-1和72.74%。以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6 mol·L^-1甘露醇+2.0%(w/v)纤维素酶R-10+0.5%(w/v)果胶酶,酶解12~14 h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×10⁵ 个·g^-1、59.15%和53.87×10⁵ 个·g^-1、63.92%。以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×10⁵个·mL^-1,培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3~5次,原生质体28 d后形成微细胞团,培养60 d后可形成2 mm左右的愈伤组织。     

卡特兰叶片原生质体分离条件的研究

试验以卡特兰叶片组织为材料,研究了预处理时间、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量等不同因素对其原生质体分离的影响.结果表明,以1%的纤维素酶＋0.3%的果胶酶为混合酶液,11%的甘露醇为渗透压稳定剂,在25±1℃的条件下,pH为5.8的酶液组合中酶解8 h,获得的原生质体产量最高,可达8.9×10^6/g鲜重,存活率高达91.2%.     

酶解时间对灯盏花原生质体产量及活力的影响

原生质体是进行单细胞测序和基因编辑研究的理想材料。为了研究不同酶解时间对灯盏花原生质体分离的影响,采用纤维素酶1%+果胶酶0.3%+半纤维素酶0.5%酶液处理愈伤组织悬浮细胞2,3,4,5,6 h,纤维素酶0.5%+果胶酶0.2%+离析酶0.5%酶液处理幼叶4,6,8,10,12,14,16 h。结果表明,不同酶解时间,灯盏花悬浮细胞和幼叶的原生质体产量及活力均差异显著。悬浮细胞酶解5 h,原生质体的产量和活力达到最高,分别为3.73×105个·g-1、75.84%;幼叶酶解12 h,原生质体产量最高,达到1.17×106个·g-1,酶解10 h,原生质体活力最高,为80.98%。叶片的原生质体产量和活力明显高于悬浮细胞。     

洋葱内表皮原生质体分离和纯化研究

通过酶解法降解洋葱细胞壁释放出原生质体,利用离心从粗提取液中纯化出原生质体,并通过血球计数板计数来比较制备洋葱内表皮原生质体的效果.结果表明:酶解时间、pH值、渗透压稳定剂(甘露醇)及酶的种类是影响原生质体制备的重要因素.酶解时间2 h,pH值5.0～6.0之间,甘露醇0.5～0.7 mol/L,纤维素酶含量1.5%、果胶酶含量0.1%和0.1%牛血清蛋白组合时原生质体的分离效果最佳.     

罗汉果原生质体分离条件

以罗汉果叶片为材料,研究了酶解法分离原生质体的条件.结果表明:罗汉果叶肉细胞原生质体分离的最佳酶液组成为:2％纤维素酶+0.5％果胶酶+ 0.6 mol/L甘露醇+CPW盐溶液,pH值为5.8.用该酶液对罗汉果叶片酶解2h,原生质体产量可达5.75×105个/g.     

盾叶薯蓣原生质体分离

以盾叶薯蓣叶片、种子愈伤为材料,探讨了不同的酶浓度、酶解时间及渗透压对原生质体分离的影响.结果表明:生长5～10d的叶片置于0.6%纤维素酶、0.5%果胶酶、0.9mol/L甘露醇的酶液中、黑暗处理21h,其原生质体产量和活力最高;悬浮培养5～10d的愈伤组织在2.0%纤维素酶、1.0%果胶酶、0.7mol/L甘露醇的混合酶液中黑暗处理6～8h原生质体产量和活力最高.     

矮牵牛叶肉原生质体分离条件的优化

以幼嫩叶片为试材,探讨了渗透压(甘露醇浓度)、水解酶浓度、酶解时间等关键因素对矮牵牛叶肉原生质体分离效果的影响。研究结果表明,以2%纤维素酶R-10+0.2%果胶酶Y-23+0.4%离析酶R-10+20 mmol/L 2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)+0.1%牛血清白蛋白(BSA)+0.11%无水氯化钙(CaCl_2)为酶解液,在0.5mol/L甘露醇浓度下静置酶解5h,1 100r/min离心2min沉淀原生质体,原生质体产量及活性分别为2.90×106个/g和88.1%,可为后续原生质体培养及融合提供材料。     

水稻纹枯病菌原生质体制备与再生条件的优化

为获得进行水稻纹枯病菌遗传转化所需的高质量原生质体,选用该病菌强致病力菌株GD-118,分别从酶种类、菌龄、酶解时间、酶解温度、酶液pH值和渗透压稳定剂及其浓度6个方面优化了原生质体的制备条件,从酶解时间和渗透压稳定剂及其浓度2个方面优化了原生质体的再生条件。结果表明:优化后的水稻纹枯病菌原生质体制备的最佳条件组合是"纤维素酶+溶菌酶+崩溃酶"组合酶、总酶终质量浓度10mg/mL、菌丝菌龄15h、酶解时间3h、酶解温度35℃、酶液pH5.6、以0.6mol/LMgSO4.7H2O为渗透压稳定剂,此最佳条件组合所制备的原生质体产率高达4.00×107/g;原生质体最佳的再生条件是酶解3h的原生质体在含1.0mol/L甘露醇的再生培养基上26℃时进行培养,在此条件下可获得最佳的再生效果,再生率为39%。     

月季原生质体分离条件的研究

采用质壁分离和冰冻预处理月季幼叶.用纤维素酶、果胶酶、甘露醇的混合酶液分离原生质体,并对影响原生质体产量及活力因素进行分析.结果表明,纤维素酶对原生质体产量有极显著影响,适宜月季幼叶原生质体提取的酶液组合为:纤维素酶1.5%、果胶酶0.5%、甘露醇0.6 mol/L、酶解12 h;质壁分离后,原生质体产量增加,但活力降低;冰冻处理使产量提高,处理12 h时,原生质体活力达到最高.     

烟草原生质体分离纯化条件的优化

为提高烟草原生质体的产量和活力,对影响烟草原生质体分离纯化的酶解液组合、酶解时间、酶解渗透压、离心转速、基因型等因素进行了优化。结果表明:以1%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.6mol/L甘露醇+0.1%MES的酶解液组合经6h酶解,700r/min离心5min得到的原生质体产量和活力相对较高;生理状态相近的不同烟草材料在产生原生质体的能力上存在一定差异。     

云南疣粒野生稻原生质体高效分离培养体系的建立

【目的】为云南疣粒野生稻原生质体的培养、细胞融合、细胞再分化成植株奠定基础。【方法】测定不同酶解组合及浓度、酶解时间、渗透压稳定剂浓度下云南疣粒野生稻原生质体的产量和活力,同时筛选云南疣粒野生稻原生质体分离和培养的较优条件。【结果】优化后建立云南疣粒野生稻胚性悬浮细胞系的周期可缩短至45～60 d;在纤维素酶1.5%+果胶酶0.3%+甘露醇0.6 M+MES 5 mM+CaCl_(2 ) 5 mM条件下酶解2 h,云南疣粒野生稻原生质的产量为1.45×10~(6 )个/g·FW,活力达到90.17%,制备出的原生质体在固液培养下得到云南疣粒野生稻原生质体再生植株。【结论】建立了一套快速高效分离培养云南疣粒野生稻原生质体的体系,对研究重要植物资源、种质创新和发掘其优良基因具有重要意义。     

二倍体马铃薯原生质体培养与植株再生

原生质体培养是体细胞杂交的基础,同时也是获得变异材料的重要手段。以引进的4个二倍体马铃薯为材料,研究了渗透浓度、酶液组成、酶解时间及材料预处理对原生质体产量和活力的影响。结果表明:预处理是原生质体成活、分裂及后期发育的重要条件,处理D预处理效果最好,原生质产量和活力最高,且有较多细胞分裂;马铃薯原生质体适宜的渗透浓度为0.35~0.40mol·L-1;RH2和RH3酶解时间以4h为宜,RH1和RH4酶解时间以4.5h为宜;酶解液为2.0%纤维素酶和0.2%果胶酶的混合液。基因型对原生质体培养影响较大。经过培养,有2个二倍体材料获得了再生植株。     

响应面法优化紫球藻原生质体的制备

[目的]优化紫球藻细胞原生质体制备条件。[方法]利用Box-Benhnken的中心组合实验设计,进行三因素三水平的实验设计。[结果]得到二次回归方程:Y=55.10+5.19X1-0.075X_2+1.76X_3-0.85X_1X_2-3.13X_1X_3-4.20X_2X_3-9.09X_1~2-6.66X_2~2-7.49X_3~2,确定了混合酶浓度(X1)、纤维素酶和果胶酶的比例(X2)和pH(X3)三因素对紫球藻原生质体制备率(Y)的组合效应,得到了混合酶浓度2.2%、纤维素酶与果胶酶体积比2∶3、pH 7、渗透压稳定剂为0.2mol·L-1 KCl、30℃下轻微振荡、酶解6h的最优制备条件,在此条件下得到68.5%的原生质体制备率。[结论]本研究提高了紫球藻原生质体的制备率,能够满足后续基因工程和遗传育种研究的需要。     

不同酶解条件对普通红豆草子叶原生质体分离的影响

以普通红豆草子叶为材料,研究了预处理、酶液组合和渗透压浓度等因子对其原生质体分离效果的影响。结果表明,子叶在含有0．70mol／L甘露醇的CPW溶液中预处理60min,获得的原生质体产量、存活率均高于其他预处理;酶液组合为1．0％纤维素酶＋0．8％果胶酶＋0．5％离析酶,25℃黑暗条件下酶解6h可获得大量有较高活力的原生质体;酶解液中添加浓度为0．55mol／L的甘露醇较适合原生质体分离。