鸡新城疫强度株的分离鉴定与免疫保护试验

从河北省保定地区发病鸡群中分离到2株有血凝性的分离物,其血凝作用可被NDV阳性血清所抑制,而不能被AIV(H9亚型)、EDS 76所抑制,表明2株分离物均为新城疫病毒。对2株NDV的毒力指数(MDT、IC-PI、IVPI)测定结果显示:MDT分别为40.8 h和53.7 h,ICPI分别为1.96和1.86,IVPI分别为2.89和2.72,表明2株NDV均为新城疫强毒株。采用分离的HBW株制成油乳剂灭活疫苗,分别以HBW株和LaSota株的灭活苗免疫试验鸡,进行疫苗免疫效果比较和交叉免疫保护试验。结果显示:(1)分离株灭活苗免疫组鸡各个时期所产生的HI抗体效价和Lasota灭活苗免疫组鸡的抗体效价相差不明显,2组的升降规律也基本一致。(2)分离株灭活苗免疫组鸡(HI抗体效价为6log2以上时)对相同剂量F48E9标准毒株和2个分离株的攻击可给予100%的保护,Lasota灭活苗免疫组鸡(HI抗体效价为6log2以上时)对相同剂量F48E9标准毒株和2个分离株的攻击不能给予100%的保护。说明NDV不同基因型毒株间的毒力和抗原性有一定的差异。     

不同基因型NDV灭活油乳苗与La Sota株灭活油乳苗的免疫效果比较

用地方分离的基因Ⅵ型和Ⅶ型代表株 (LD - 3- 0 0株和LD - 7- 0 2株 )配以传统的LaSota株所制备的灭活油乳苗与LaSota株单价灭活油乳苗进行的免疫效果比较显示 :前者在接种后各个时期所产生的HI抗体效价与LaSota株灭活苗免疫鸡所产生的HI抗体效价无明显差异 ,至接种后第 4 2天两者均具有 7.3log2 的HI效价。在对具有不同HI抗体水平的试验鸡进行的攻毒试验中 ,对F4 8E9标准强毒株的攻击 ,无论是LaSota株疫苗免疫鸡 ,还是不同基因型灭活苗免疫鸡 ,在HI抗体效价为 6log2 以上时均能 10 0 %地被保护 ;但对不同基因型野毒株的攻击 ,尤其是基因Ⅶ型野毒株的攻击 ,2种疫苗则呈现出明显的差异。在LaSota株疫苗免疫鸡HI效价为 6log2 时 ,对不同基因Ⅶ型野毒株的攻击 ,保护率只有 0～ 2 0 % ;而具有 6log2 效价的不同基因型疫苗免疫鸡则对不同基因Ⅶ型野毒株的攻击具有 6 0 %～ 70 %的保护率 ;当HI效价达 8log2 左右时 ,LaSota株疫苗免疫鸡对基因Ⅶ型野毒株的攻击也只有 80 %的保护率 ,而不同基因型疫苗免疫鸡已能 10 0 %地被保护 ;LaSota株疫苗免疫鸡只有在HI效价在 9log2 以上时 ,方可 10 0 %地抵抗基因Ⅶ型野毒株的攻击。     

新城疫分离株与La Sota疫苗交叉免疫保护性研究

用新城疫(ND)分离强毒油佐剂灭活苗和NDV La Sota油佐剂灭活苗分别免疫带有新城疫母源抗体的雏鸡,免疫后每7d采集血清,用微量血凝抑制试验方法检测HI抗体.并于免疫后第21、28、35 d用鸡新城疫分离毒和NDV F_(48)E_9分别进行攻毒试验,结果显示,免疫鸡的HI抗体水平没有大的差异,分离毒株灭活苗对鸡新城疫强毒感染的免疫保护效力优于La Sota灭活苗.     

抗独特型单克隆抗体在鸡中诱导的抗新城疫病毒保护性免疫——新城疫单克隆抗独特型疫苗研究(Ⅲ)

用AFE_8Id_(16-6)和ALA_(15-6)Id两株新城疫病毒(NDV)的抗独特型单抗(MAb_2)分别免疫接种一组(18只)无HI抗体鸡,并以一组(7只)Lasota苗常规免疫鸡和一组(12只)不免疫的易感鸡分别作为免疫阳性和阴性对照。在两株MAb_2末次免疫后8天,用微量血凝抑制(HI)试验检测了4组鸡的血清中HI抗体水平。结果:两株MAb_2和Lasota苗免疫的鸡全都产生了HI抗体,非免疫鸡均未测到HI抗体。AFE_8Id_(16-6)免疫鸡的HI滴度为1～5log_2;ALA_(15-6)Id免疫鸡的HI滴度为1～4log_2;Lasota苗免疫鸡的HI滴度高达7～10log_2。在HI抗体检测后2天,用100LD_(50)F_(48)E_8株NDV强毒攻击4组鸡,隔离观察10天,AFE_8Id_(16-6)和ALA_(15-6)Id免疫鸡的保护比值分别为17/18和10/18,Lasota苗免疫鸡保护比值达7/7,而非免疫对照鸡在攻毒后6天全部死亡。试验结果证明,上述两株MAb_2是NDV保护性抗原的模拟物,在多次注射后可诱导鸡产生抗NDV的血凝抑制抗体,并能使鸡抵抗NDV强毒的人工感染。因此,这两株抗独特型单抗,尤其AFE_8Id_(16-6)有希望用作新城疫抗独特型疫苗。     

鹅副粘病毒感染的诊断

[目的]为了确定江苏省某养鹅场2007年春季发生传染病的病因。[方法]从发病鹅群采集病料进行流行病学调查、病原分离鉴定、红血球凝集试验和红血球凝集抑制试验,通过交叉HI试验测定F2代分离株和Lasota毒株的HI效价,并用稀释的F2代感染鸡胚尿囊液分别感染鹅和SPF雏鸡,观察其发病和死亡情况。[结果]通过SPF鸡胚接种与传代从病、死鹅的脑、脾、胰混合病料分离到1株病毒。经HA和HI试验证明该分离株为禽I型副粘病毒。人工感染鸡和鹅试验表明该分离株对鸡和鹅都具有高致病性,同群混饲试验表明该分离株具有很强的传染性,属强毒型NDV。这进一步证实该病毒属禽副粘病毒的新成员,即鹅副粘病毒I型。[结论]该研究为NDV出现了某些新的致病特点以及其对鹅同样具有致病性提供了佐证。     

IB(M41株)种毒代次和免疫原性的关系

评估不同代次IBV M41株种毒是否可以作为生产用种子。将M41株种毒用SPF胚连传8代,从中选出第3、第5、第7代,测定其EID50。并用此3代M41株鸡胚尿囊液制毒的油乳苗免疫易感鸡,以HI试验检测其抗体水平。3种疫苗免疫鸡均保护9/10以上,对照鸡全发病;对免疫后与免疫前HI抗体水平的比较表明,免疫后抗体平均滴度提高3倍以上。不同代次的M41毒株的免疫原性仍然保持良好,可以正常用来制造疫苗和建立种子批。     

免疫增强剂提高禽用二联苗免疫效力的研究

为评价免疫增强剂(VA5)对禽用联苗的免疫增强作用,将VA5分别与市售鸡新城疫-传染性法氏囊(新法)二联苗合用免疫SPF鸡和蛋鸡、与新城疫-H9亚型禽流感(新流)二联苗合用仅免疫SPF鸡,评价免疫后的抗体效价和SPF鸡攻毒后的保护效力。结果显示,SPF鸡或蛋鸡免疫含VA5的新法二联苗、新流二联苗后,新城疫血凝抑制(HI)抗体效价比常规苗组提前1周达到6 log2,禽流感HI抗体效价比常规苗组提前1周达到7 log2,法氏囊血清琼扩抗体和中和抗体比常规苗组均提前1周合格,且3种抗体持续高于常规疫苗组。免疫含VA5疫苗组的SPF鸡对新城疫强毒攻毒,以临床症状判断,可达全保护;以囊病变和临床症状判断,对法氏囊的攻毒提供全保护;H9变异株攻毒后不排毒。对上述3种病毒的保护力均高于常规苗。上述结果表明,VA5免疫增强剂能够提高鸡新法二联苗、新流二联苗对鸡的免疫效力,具有很好的应用前景。     

鸭病毒性肝炎多价卵黄抗体的研制

选取4株不同地区分离的适应鸡胚的鸭肝炎病毒作为疫苗株制备灭活苗,免疫试验鸡制备卵黄抗体。鸡胚中和试验表明,第三次免疫后15天,抗体中和效价(PD50)都在29以上,卵黄抗体保护雏鸭试验显示,本试验制备的卵黄抗体有着显著的预防效果,并大大提高攻毒后雏鸭的存活率。     

禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究Ⅱ报——疫苗的免疫持续期及保存期试验

采用新城疫病毒(NDV)Lasota株感染鸡胚尿囊液毒和多杀性巴氏杆菌(禽A型)接种固体培养基收获茵液,经灭活后制备成5批油乳剂灭活苗(批号2001-1～2001-5),用于免疫2月龄以上的青年鸡,试验分一次免疫组和二次免疫组,分别在免疫后1个月、3个月、6个月、9个月进行ND和FC强毒攻击保护试验,结果表明,相同剂量分两次免疫,近期效果差异不明显.一次免疫组,6个月攻毒ND的保护为100%、FC保护为80%;8个月攻毒ND的保护为95%、FC保护为52.5%.二次免疫组.6个月攻毒ND的保护为100%,HI抗体1:64以上;FC攻毒保护87.5%;8个月攻毒ND的保护为100%,FC保护为77.5%.疫苗保存期试验证明,4～8℃冰箱保存可达18个月,10～20℃保存的有效期为4个月.     

一株鸽副粘病毒分离株的毒力及免疫原性

从病/死鸽中分离到1株病毒,血清学鉴定该分离病毒为禽Ⅰ型副粘病毒(PPMV);该病毒经毒力测定结果显示,PPMV的毒力与鸡新城疫病毒(NDV)La Sota株的毒力相似,为自然弱毒株;对该分离株F基因裂解位点的序列分析结果表明,PPMV F裂解位点附近的氨基酸序列为112G-R-Q-G-R-L117,属于弱毒株的特征性序列.将该株病毒制备成灭活疫苗,分别免疫鸽、鸡,结果都能诱导鸽、鸡体产生较高水平的HI抗体;分别以鸡新城疫标准强毒株F48E9、本组分离于鸡的野毒株CPMV( MDT 45.4 h,ICPI 1.85,IVPI 2.42)和分离于鹅的野毒株GPMV( MDT 59 h,ICPI 1.88,IVPI 2.39)攻击免疫鸡群,免疫鸡群可得到保护,而非免疫鸡群被攻击后全部致死.结果表明,用该分离毒制成的油乳剂灭活苗对鸡安全,具有良好的免疫效果,可抵抗鸡新城疫、鹅副粘病毒的攻击.用HI方法检测该株病毒与La Sota株之间的交叉血凝抑制试验,结果显示La Sota株与PPMV两毒株间的抗原性差异较小.     

一例产蛋鹌鹑混合感染病例的诊断

某鹌鹑养殖场有部分产蛋鹌鹑发病,病鹌鹑在死前无特别明显的临床症状。对病(死)鹌鹑作病理剖检后取9羽鹌鹑内脏及脑进行实验室诊断,分别做细菌学检验和病毒学检验,结果显示:通过细菌学检验从病料中分离的分离物多为大肠杆菌,另外分离到少数克雷伯氏菌;通过病毒学检验分离到的病毒能与鸡红细胞发生血凝并能被新城疫病毒阳性血清所抑制。因此,该次病例由病毒与细菌混合感染所致。     

"呼感特"对NDV和AIV的抑制试验

观察了抗病毒新药“呼感特”对鸡新城疫病毒 (NDV)和禽流感病毒 (AIV)在鸡胚中生长的抑制情况 ,结果发现 :经不同药物浓度感作的NDV和AIV在相应鸡胚中生长时 ,和对照组相比 ,鸡胚的保护率明显升高 ,病毒的增殖效价显著降低。同时 ,药物浓度越高 ,这种影响愈明显 ,且AIV组的变化比相应NDV组的变化更明显。     

鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定

[目的]为研究传染性支气管炎(IBV)的流行变异及其防治奠定基础。[方法]从辉县某大型养鸡场疑似IBV的发病鸡群中采集病料,进行病毒分离和鉴定,并对分离病毒的M基因进行RT!PCR扩增。[结果]从鸡病料中分离到1株IBV,命名为IBV!HN05。经浓度1%胰酶、卵磷脂酶C和10%乙醚处理后,该病毒尿囊液可以凝集鸡、绵羊、人、小鼠和兔的红细胞,而未处理的病毒尿囊液则无此凝集活性。该分离株IBV-HN05和标准毒株IBVM41对NDVLaSota都有抑制作用。该病毒对9日龄鸡胚的致病变率达100%。通过鸡胚矮小试验和动物回归试验,发现该分离株能引起鸡胚和病鸡典型的临床症状和病理变化。PCR扩增结果进一步证实了该分离株为IBV病毒。[结论]该研究为SARS病毒的研究提供了动物模型。     

15株NDV地方株的分离鉴定与生物学特性

从1998~2002年河南省洛阳地区代表性新城疫发病禽群中分离鉴定了15株新城疫病毒(NDV),并对其生物学特性进行了研究。结果表明,15株NDV均呈现良好的血凝活性和特异的血凝抑制特性;对鸡胚的致病作用可被新城疫阳性血清所抑制;对鸡胚最小致死量的平均死亡时间(MDT),1日龄雏鸡脑内接种的致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉内接种的致病指数(IVPI)的测定证实,LD-6-01和LR-2-00株是弱毒株,其余均为强毒株;弱毒株的血凝素热稳定性较好,属慢速血凝解脱型;强毒株的血凝素热稳定性差,属快速或中速血凝解脱型;所有毒株均可较好地凝集鸡和人(O型血)的红细胞,但对其他动物的红细胞凝集性差异较大。对HI抗体为6log2的12日龄雏鸡攻毒试验结果表明,15个分离株中2个弱毒株可得到100%保护;13个强毒株中,LG-1-99,LR-1-98,LD-4-01和LD-3-00得到了70%~90%的保护,而其他9个分离株(LD-1-98,LD-2-99,LD-5-01,LD-7-02,LR-3-02,LW-1-02,LG-2-00,LA-1-99和LE-1-01)基本上得不到保护(0~20%),但所有得不到保护的试验组鸡的发病死亡时间均明显向后推迟。     

猪副粘病毒感染的初步诊断和病毒分离

在临床症状复杂的不同猪群中 ,分离出 4株副粘病毒。该病毒能凝集鸡红细胞 ,其血凝性能被鸡新城疫标准血清抑制。病毒能在鸡胚中生长繁殖。电镜观察不是冠状病毒而是副粘病毒。该病毒能引起猪的腹泻、呼吸急促、繁殖障碍、神经症状和体温升高等临床症状。     

中药制剂SHY对新城疫、禽流感H9、H5亚型病毒的抑制和攻毒保护效果

本试验利用蔷薇科植物提取物（SHY）分别与新城疫、禽流感H9、H5亚型病毒作用后,接种10 d SPF鸡胚,评价SHY对病毒的抑制作用;给21 d SPF鸡连续口服该中药提取物5 d后,分别用新城疫、禽流感病毒攻击,观察对SPF鸡的保护作用.结果表明：SHY测试剂量对SPF鸡胚没有毒性;20、10、5和2.5 mg/mL提取物与一定量的新城疫、禽流感H9亚型病毒作用后,鸡胚全部存活,病毒测定为阴性;与禽流感H5亚型病毒作用后,2.5 mg/mL组不能完全保护鸡胚存活（6/8）,病毒分离阳性.在攻毒试验中,SPF鸡分别按60、50、40和20 mg口服后,用新城疫和禽流感H9亚型攻毒保护分别为5/5、5/5、5/5和4/5.显示SHY不但能显著抑制新城疫、禽流感H9和H5亚型在鸡胚上增殖,而且能保护新城疫、禽流感H9亚型病毒的攻击.对SHY深入的研究,有望开发出有效抗禽流感药物.     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病原特性与多肽分析

从患传染性腺胃病的病鸡中分离到4 株病毒,其中H95株在SPF鸡胚上已稳定传代。病料及H95 传代后的鸡胚尿囊液经蔗糖梯度和CsCl密度梯度离心后的纯化物,电镜下为大小80～160 nm 、有囊膜的病毒颗粒,囊膜表面有纤突,呈冠状形态。病毒在CsCl中的浮密度为1.19～1.23 g/cm 3, 对热和氯仿敏感,耐酸,能抵抗1% 胰酶,无直接血凝性,经卵磷脂酶C处理后的病毒则能凝集鸡红细胞,能干扰新城疫病毒在鸡胚上的增殖。应用杂交瘤技术筛选出4 株抗H95株的阳性克隆,经Western blotting, 其中3 株单抗能识别54 kd 蛋白多肽,该条带也能与来自鸡传染性支气管炎病毒(IBV) M41 株的针对N 蛋白的单抗反应。中和试验表明, H95株与其它IBV 毒株在血清型上存在差异。上述研究结果初步表明,鸡传染性腺胃病的病原是冠状病毒科的成员,并且很可能是鸡传染性支气管炎(IB)中以腺胃病变为主要特征的一种新的致病病型。     

鹌鹑新城疫病毒的分离鉴定及病原学特性的研究

从某一表现呼吸道症状和拉黄绿色稀便的发病鹌鹑群中分离到 1株病毒 ,经HA、HI试验、血清中和试验、动物回归试验和病毒生物学特性测定 ,最终确认所分离毒株为新城疫病毒 ;经对分离株的MDT、ICPI和IVPI等致病指数的测定 ,表明该毒株为新城疫强毒株。     

禽流感病毒江西株的分离与初步鉴定

从临床主要表现为呼吸道症状和产蛋严重下降蛋鸡群的病例中．分离到1株病毒(GN9901)。该病毒株可在鸡胚中传代．可以凝集鸡、鸭和人的红细胞．不被新城疫阳性血清所抑制。经血清学鉴定为A型禽流感病毒(HA、NA亚型未测定)，该病毒株具有良好的免疫原性。