小鼠精原细胞体外增殖与冷冻保存

利用一步酶法将7日龄昆白系小鼠睾丸分离获得生精上皮单细胞悬液(主要含精原细胞和支持细胞),分别接种于D-MEM、D-MEM/F12和KSOM后,系统研究其精原细胞的存活和增殖情况,并对生精上皮单细胞、曲细精管及完整睾丸进行了-70℃冷冻保存,同时对生精上皮单细胞进行了液氮冷冻(-196℃)保存。结果表明,小鼠精原细胞在D-MEM和D-MEM/F12中均能存活并增殖,表现为在培养的第1～9天/1～8天呈逐渐减少趋势,第9～13天/8～12天呈增殖趋势,第17天/16天以后增殖减缓,而在KSOM中只短暂存活不能增殖。生精上皮单细胞、曲细精管及完整睾丸-70℃短期(1周和2周)冷冻保存及单细胞悬液液氮短期(2周)和中长期(1和3个月)冷冻保存后,均可获得较理想的细胞存活率(均大于85%)。     

植物雌激素对鸡胚精原细胞增殖的影响

精原细胞移植及其介导的转基因技术在农业及生物学领域具有广泛的应用前景.精原细胞的发育受卵泡刺激素和雄激素的调控(米玉玲和张才乔,2004),但雌激素对雄性生殖细胞的发育尚有不同的报道(Vigueras-Villaseflor et al,2006;Gist et al.,2007).体内外的实验都证明大豆黄酮(daidzcin)存在雌激素样活性(Sugimoto and Yamaguchi,2000;赵茹茜等,2002),因此属于植物雌激素.许多研究表明大豆黄酮的生物活性作用与其雌激素样作用相关.     

钝吻黄盖鲽精子冷冻保存及生理特性分析

钝吻黄盖鲽(Pseudopleuronectes yokohamae)是鲆鲽鱼类中重要的天然捕捞和养殖对象,但由于生态环境变化、人工捕捞过度等因素,导致其种质资源数量降低,进行精子冷冻保存技术研究,对其种质资源保存具有重要意义.本研究以性成熟的雄性钝吻黄盖鲽为实验材料,对精子稀释液种类及成分、抗冻剂种类、激活精子海水盐度和冷冻精液授精实验等进行筛选,实验数据利用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析和Student-Newman-Keuls分析.结果表明,利用MFs-3(8 g/L NaCl+0.65 g/L KCl+15 g/L Glucose)稀释液分别与20％1,2丙二醇(1,2-propylene glycol,PG)和20％乙二醇(ethylene glycol,EG)抗冻剂作为精子抗冻保存液时,冷冻效果最好,其中PG组对应的精子活力、快速运动时间和寿命分别为(95.26±0.39)％、(46.00±1.00)s和(124.33±4.04)s,EG组则为(95.15±0.41)％、(45.67±0.58)s和(124.00±3.00)s.利用盐度为10～50的人工配制的海水激活解冻后的精子,发现当盐度为30时,精子活力高达(95.07±0.69)％,与对照组相比不存在显著性差异.将PG组和EG组冷冻保存的精子解冻后分别与其卵进行授精实验,PG组受精率和孵化率为(80.08±0.68)％和(77.44±1.76)％,EG组则为(80.17±0.45)％和(77.92±1.33)％,与鲜精相比无显著性差异.利用计算机辅助精子分析系统(computer-aided sperm analysis,CASA)测定MFs-3+20％ PG和MFs-3+20％ EG冷冻保存的钝吻黄盖鲽精子的各项运动参数,结果显示,二者的曲线运动速度(curvilinear velocity,VCL)、直线运动速度(straight line velocity,VSL)、平均鞭打频率(beat cross frequency,BCF)、运动的直线性(linearity,LIN)和运动的前向性(straightness,STR)的数值差异性不显著.本研究利用MFs-3+20％ PG和MFs-3+20％ EG成功冷冻了钝吻黄盖鲽的精子,为钝吻黄盖鲽精子冷冻保存技术、人工杂交育种繁殖及种质资源库的建立奠定了基础.     

星斑川鲽精子冷冻保存与生理特性分析

针对星斑川鲽(Platichthys stellatus)养殖群体中雄性个体较雌性小,产精液量低,限制了人工繁殖育苗和杂交育种开展等问题,本研究以性成熟的星斑川鲽为实验材料,对精子稀释液成分、稀释液渗透压、激活海水适宜温度和冷冻精液的适宜稀释比例等进行筛选,并用冷冻精液和鲜精分别与星斑川鲽卵进行受精和孵化实验,实验结果利用SPSS软件中单因素方差分析法和Student-Newman-Keuls进行比较分析。结果表明,利用Ts-2(37.65 g/L蔗糖+10.01 g/L KHCO3+1.21 g/L Tris碱)和SFs-4(60 g/L葡萄糖+10.01 g/L KHCO3+1.21 g/L Tris碱)冷冻保存的精子活力最高,分别为(56.67±5.78)%和(66.67±5.77)%。利用计算机辅助精子分析(computer assisted sperm analysis,CASA)系统对星斑川鲽精子进行分析,测定了用Ts-2和SFs-4保存的冷冻精液中精子运动方式的各项参数。结果显示,测定的各项参数(曲线运动速度(curvilinear velocity,VCL)、直线运动速度(straight line velocity,VSL)、平均鞭打频率(beat cross frequency,BCF)、运动的直线性(linearity,LIN)和运动的前向性(straightness,STR)表明,利用SFs-4保存的精子各项运动参数明显高于Ts-2。利用蔗糖、KHCO3和Tris碱配制不同渗透压稀释液中,在渗透压为319.94 Pa时,精子活力最高,为(61.67±5.00)%,与鲜精相比无显著差异(P0.05)。利用3~18℃海水激活精子,结果显示,当激活海水温度在12℃时精子活力最高,与鲜精相比无显著性差异(P0.05),而其他温度下显著低于鲜精活力(P0.05)。将解冻后的精液稀释10~40倍,与星斑川鲽卵受精,结果显示,在稀释20倍后冷冻精液的受精率最高。本研究利用Ts-2+20%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)和SFs-4+20%DMSO对星斑川鲽精子成功进行冷冻保存,为星斑川鲽精子冷冻保存、种质库的建立和应用提供理论和技术依据。     

兔精液冷冻保存的初步研究

以家兔为试验动物,从精液解冻后的精子活率和复苏率2个指标,分别对3种稀释液(1:T ris0.25 m o l/L 蔗糖0.1 m o l/L 柠檬酸钠83 mm o l/L 卵黄10% 二甲基亚砜(DM SO)15%;2:配方1 葡萄糖0.47 mm o l/L;3:T ris 0.29 m o l/L 葡萄糖0.71 mm o l/L 柠檬酸钠67 mm o l/L 卵黄20% 甘油4%)、两种抗冻剂(甘油4%、DM SO 15%)、4°C下平衡时间(30、60、120、180 m in)三个方面进行了比较试验。公兔采精用假阴道法,采精后立即检查精子活率,达0.60以上的供试验用。结果表明:(1)3种稀释液中,用稀释液2稀释的精液,精子解冻后活率和复苏率显著高于稀释液1和稀释液3(精子活率:0.153 vs 0.103、0.109;复苏率:0.205 vs 0.137、0.147,P<0.01),而稀释液1和稀释液3之间差异不显著(P>0.05);(2)在稀释液2中,分别用4%甘油和15%DM SO作防冻剂,两者的精子解冻后活率之间(0.193 vs 0.261,P<0.01),复苏率之间(0.250 vs 0.340,P<0.01)差异极显著;(3)在4°C下平衡30、60、120、180 m in,结果发现,在30~60 m in之间,解冻后精子活率之间(0.261 vs 0.249),复苏率之间(0.340 vs 0.325)差异均不显著(P>0.05),但是随着平衡时间(120~180 m in)的增加,精子活率明显降低,精子几乎死亡。结论:采用稀释液2的配方,在4°C下平衡30~60 m in,可获得较好的兔精液冷冻保存效果。     

氧分压、培养基及微孔对小鼠胚胎体外发育的影响

通过小鼠(Mus musculus)胚胎体外培养,研究了培养基与不同氧分压环境之间是否存在偏好性;同时利用人体呼出的生理混合气体(肺气)对小鼠胚胎体外培养的可行性进行了探索;还比较了微孔(well of the well,WOW)培养法和成组培养法对胚胎发育的影响.结果表明:①在4%CO2+16%O2+78%N2+2%H2O(肺气)、5%CO2+5%O2+90%N2(5%O2,低氧)和5%CO2+20%O2+75%N2(20%O2,高氧)三种气相条件下,CZB和mKSOM两种培养基之间的胚胎卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05),但是,在肺气组中,CZB组的囊胚平均总细胞数明显高于mKSOM组(P<0.05);②低氧条件下,mKSOM组的囊胚率(22.6%)显著高于高氧和肺气条件下mKSOM组的囊胚率(P<0.05);③CZB培养基在低氧条件下获得的囊胚率与高氧或肺气条件下所获囊胚率差异不显著(P>0.05);④WOW培养法的囊胚发育率(74.6±5.1%)和囊胚平均总细胞数(76±2)显著高于成组培养法(分别为38.2±6.6%和58±4)(P<0.05).结果提示:培养基mKSOM和CZB在支持胚胎发育时对氧分压具有偏好性;肺气能有效支持胚胎的正常发育;WOW培养法有利于提高胚胎体外发育能力和囊胚质量.     

Hsp70在小鼠体外早期胚胎发育中的表达

为探究热休克蛋白Hsp70在小鼠体外早期胚胎发育中的表达情况以及Hsp70在胚胎发育中的作用机理,本试验采集8~12周龄SPF小白鼠的卵巢,在体式显微镜下采集卵母细胞并培养成熟,用0.1%透明质酸酶消化卵丘卵母细胞复合体后,放入SrCl₂+CB液中进行5 h(37℃)的孤雌激活,然后移入G1培养液进行培养。取培养至2细胞期、4~8细胞期、9~16细胞期、桑椹期和囊胚期的小鼠胚胎提取总RNA,通过实时荧光定量PCR检测Hsp70在各个时期的表达情况,免疫荧光染色检测其在各个时期小鼠胚胎的表达定位。实时荧光定量PCR结果表明,Hsp70在小鼠体外早期胚胎的2细胞期、4~8细胞期、9~16细胞期、桑椹期、囊胚期都有表达,但在2细胞期胚胎和4~8细胞期胚胎的相对表达水平较高,在9~16细胞期胚胎、桑椹期胚胎和囊胚期胚胎的相对表达水平较低。免疫荧光染色结果显示,Hsp70定位于各个时期胚胎的细胞核和细胞质中,但9~16细胞期以后Hsp70主要定位于细胞核中。综上所述,Hsp70对小鼠体外早期胚胎的发育具有潜在的调控作用,这为进一步明确热休克蛋白Hsp70在胚胎抗热应激中的作用及机理研究提供了理论依据。     

Forskolin对昆明白小鼠卵母细胞体外成熟及卵丘扩展的影响

初步探讨了在体外培养条件下ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ对昆明白小鼠卵母细胞成熟和卵丘扩展的影响,培养体系中存在ＨＸ时,ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ能显著促进卵丘－卵细胞复合体（ＣＥＯ）的卵丘扩展,但对其卵母细胞成熟（即ＧＶＢＤ）无明显影响。没有ＨＸ存在时ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ在培养期的１～６小时内可抑制ＧＶＢＤ发生,该作用一依赖性,１０μｍｏｌ ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ抑制ＧＶＢＤ,但培养至２４小时,ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ对卵母细     

不同血清型马立克氏病病毒在体外相互增殖的影响

通过细胞培养板间接免疫荧光空斑计数法对ＭＤＶ１,２和３型在鸡成纤维细胞上相互增殖的影响进行研究,发现：（１）ＭＤＶ２,３型不影响ＭＤＶ１型形成的空斑数目,但明显地了每一个空斑中的感染细胞;（２）ＭＤＶ２型对ＭＤＶ３型在体外ＣＥＦ上形成的空斑数目也无明显影响,     

木本经济植物苦丁茶组培增殖研究

本文报道了苦丁茶组培中获取无菌材料的方法及组培增殖中的主要影响因素。选择合适的材料、取材季节和灭菌手段可以较易建立苦丁茶的初级培养。试验表明，用市售白砂糖和自来水配制的ＭＳ培养基并添加细胞分裂素６－ＢＡ１．０～４．０ｍｇ·Ｌ－１，即可让苦丁茶快速增殖，而生长素ＮＡＡ对苦丁茶组培增殖没有促进效应。为加快繁殖速度并获取更多的可生根苗，较低的光照强度（ｌ０００ｌｘ左右）和较低的培养基硬度（０．２％琼脂）是必要的     

精原细胞分化与凋亡的影响因素

人们对哺乳动物精子发生过程已经有了相当多的了解，但对精子发生过程的调控机制仍然了解甚少。生殖激素及原癌基因和肿瘤抑制基因的表达产物对维持正常精子发生中各类细胞的存活、增殖和凋亡，以及各类细胞受损伤后的清除均具有十分重要的作用。本文论述了促卵泡激素、雌激素、雄激素、干细胞因子、Bcl-2家族蛋白及p53蛋白在原细胞的分化和凋亡中的作用，以便人们进一步了解精子发生的调控机制。     

用0.25 mL细管冷冻保存猪精液的实验研究

本研究旨在建立优化的猪精液冷冻保存方法。实验表明，采用ZO液对猪精液进行预稀释，室温平衡1h，加入冷冻I液后于5℃水浴平衡1.5 h，再加入冷冻II液平衡2 h后装入0.25 mL细管，液氮面上3 cm处平衡10 min投入液氮，解冻时采用37℃水浴30s，可获得最佳冷冻效果。采用该优化方案，猪冷冻精液解冻后的精子活力可达0.58。     

BRL饲细胞及血清浓度对体外小鼠精原干细胞的影响

分别以大鼠肝细胞(BRL)或小鼠胚胎成纤维细胞(STO)为饲养层．采用含5％、10％及20％胎牛血清的培养液，培养6日龄小鼠生精上皮细胞，研究饲养层和血清浓度对精原干细胞生物学行为的影响。结果表明：在培养的第1周内，2个及4个连成串的精原细胞合胞体数量明显增加，同时大多数精原细胞逐渐退化。培养1周后，大多数精原细胞经短暂的存活及分裂活动后退化消失，培养体系中仅保留下少量单个及由细胞间桥相连的双个及4个成串或成团的A型精原细胞。这些细胞在随后的培养过程中，不表现明显的分裂活动，呈圆球形，表达碱性磷酸酶。不同条件培养体系中的精原细胞及精原干细胞的生物学行为无明显不同，培养20～30d时均有少量精原干细胞存活。这说明BRL细胞能用作饲养层促进精原干细胞存活，但对其更新性增殖没有明显作用；培养液中高浓度胎牛血清对精原干细胞存活和增殖无明显影响，但能促进睾丸体细胞增殖。     

Genetic identity of three mint accessions stored by different conservation procedures: field collection, in vitro and cryopreservation

At the genebank of IPK (Leibniz Institute of Plant Genetics and Crop Plant Research) in Gatersleben, Germany, three long-term conservation methods (field genebank, in vitro slow-growth and cryopreservation) are used for mint germplasm. The plant material of the field genebank was the source to establish the slow-growth in vitro culture collection, from which the cryopreserved collection was set up, using a droplet-vitrification protocol. The genetic identity of 161 samples of three mint accessions (MEN 198, MEN 166 and MEN 186), stored for several years using those three methods, was studied using RAPD markers. Accession ‘MEN 198’ was the only one with a unique RAPD fragment pattern for all its samples, independently of the conservation procedure employed. The field collections of accessions ‘MEN 166’ and ‘MEN 186’ were made up of different genotypes. None of the genotypes detected in the plots of these accessions was represented in the in vitro and cryopreserved samples analyzed, which showed a unique genotype for each accession. From this work we conclude that, for an appropriate management of a germplasm collection of vegetatively propagated species, the determination of the genetic composition of the donor material and a periodical assessment of the preserved material should be carried out.     

Validation of antifreeze properties of glutathione based on its thermodynamic characteristics and protection of baker's yeast during cryopreservation

The antifreeze ability of glutathione was evaluated on the basis of its thermodynamic characteristics and protection of baker's yeast during cryopreservation at -30 degrees C. The thermodynamic characteristics and protection of baker's yeast of glutathione were similar to those of known antifreeze proteins, such as carrot antifreeze protein and holly antifreeze protein. These properties included lowering the freezing point at about 0.20 degrees C non-colligatively, decreasing freezable water content, controlling the movement of free water for its strong hydrophilicity, and improving baker's yeast survival during the simulated processing of frozen dough. Therefore, glutathione was viewed to be an antifreeze protein like substance on the basis of its unique thermodynamic characteristics and protection of baker's yeast. The method combining thermodynamic characteristic analysis and protection evaluation is a new and simple way to screen new antifreeze proteins.     

大花蕙兰离体培养技术研究

以大花蕙兰茎尖为外植体,以MS为基本培养基,探讨外源激素对原球茎分化、增殖与不定根形成的影响,结果表明:MS 6-BA0.5~1.0mg/L NAA0.1~0.3mg/L AC(活性炭)2.0g/L的培养基对原球茎的分化及增殖效果好;1/2MS 6-BA0.1mg/L NAA0.5mg/L AC2.0g/L的培养基,50d内生根率可达93.3%。在水苔或水苔∶椰糠=1∶1的基质中驯苗,成活率可达92%以上。     

铝胁迫对大豆生理特性的影响

本文采用水培法,以3个不同品种大豆为研究材料,研究了铝对大豆一些生理生化指标的影响。结果表明,铝胁迫使大豆积累了大量的脯氨酸、可溶性糖和丙二醛,根系活力下降,且不同品种在铝胁迫的表现性状方面存在差异。此外,根据所计算的耐铝胁迫系数,这3个品种的耐铝胁迫能力为:浙春3号>浙秋3号>华春18。     

植物试管苗离体生根研究进展

综述了植物试管苗生根机理方面的基因表达和遗传转化,内源激素和酶类活性与生根的关系;培养基组成物矿物盐类、附加有机成分(维生素和氨基酸)、生长调节物质、蔗糖、琼脂、活性碳、酚类物质,及pH值,培养条件、通气、湿度、温度和光照对试管苗生根的影响;外植体基因型与插条生理和发育状态与生根的关系,为植物组织培养试管苗生根研究提供一定的参考.     

The habitat of Lythrum hyssopifolia L. in cambridgeshire,its only surviving English locality

Lythrum hyssopifolia, always a scarce species in the British Isles, is now confined to Cambridgeshire and to Jersey, Channel Islands. In Cambridgeshire it is restricted to an area of 10 km², where it occurs locally in shallow depressions in arable fields, consistently associated with Bryum klinggraeffii, Juncus bufonius, Plantago major ssp. intermedia and Polygonum persicaria. it is dependent on both winter flooding and the regular ploughing of these sites for its survival. The vegetation in which it is found is referable to the Isoeto-Nanojuncetea, largely composed of annual flowering plants and ephemeral bryophytes. Lythrum and its most frequent associates share: (1) the ability to germinate in spring; (2) the lack of long-term competitive ability; (3) a similar floral biology, being predominantly self-pollinated; and (4) potentially long-lived seeds. Two groups of bryophytes grow with Lythrum, monoecious species reproducing sexually and dioecious species reproducing vegetatively by rhizoid-tubers.