介绍一种快速提取免疫球蛋白G的方法

介绍一种快速提取免疫球蛋白Ｇ的方法吴健敏，袁书智，贺荣莲广西区兽医研究所５３０００１目前，提取免疫球蛋白Ｇ（ＩｇＧ）常用的方法有饱和硫酸按盐析法、离子交换层析法、凝胶过滤法、亲和层析法等，这些方法往往操作繁琐、费时费力，对ＩｇＧ活性影响较大。现介绍一...     

抗鸡IgG,抗鸭IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的稳定性研究

抗鸡ＩｇＧ、抗鸭ＩｇＧ单克隆抗体杂交瘤细胞株的稳定性研究张春红伍惠卿杜伟贤黄忠（广东省农业科学院兽医研究所，广州５１０６４０）自１９７５年Ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ首次利用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术生产单克隆抗体（ＭｃＡｂ）以来，为所有需要制备和使用抗...     

猪血清中IgG、IgM、IgA含量测定

猪血清中ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量测定王金宝，孙立辉，吕永艳，任慧英，孙月平，于桂江，田春燕（莱阳农学院动科系）（文登市宋村兽医站）目前，国内尚无商品性猪ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ的标准抗血清，影响了对猪免疫功能的研究。国内曾报道猪血清ＩｇＧ、ＩｇＭ的含...     

抗鸡传染性法氏囊病病毒高免血清IgG的制备与标记

抗鸡传染性法氏囊病病毒高免血清ＩｇＧ的制备与标记＊贺荣莲吴健敏韦志锋蒋冬福兰美益黄红梅（广西兽医研究所，南宁５３０００１）自从Ｍａｒｑｕａｒｄｔ等１９８０年将ＥＬＩＳＡ的方法应用于鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的抗体检测以来，经有关学者的不断改进，现已广...     

分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定

从传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系１Ｄ１０、１Ｇ１中得到了３株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白（Ｉｇ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６。其抗体类和亚类均属ＩｇＧ２ｂ，腹水的ＥＬＩＳＡ效价≥１∶２５６００，琼扩效价为１∶８～１∶１６。３株ＭｃＡｂ能与鸡血清中的Ｉｇ出现沉淀反应，琼扩在２４ｈ以内出现清晰的沉淀线，而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，分别用纯化并经辣根过氧化物酶（ＨＰＲ）标记的１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明，３株单抗识别的均为ＩｇＧ、ＩｇＭ分子的轻链     

从无IgG的组织培养基中纯化单克隆抗体

本文介绍的方法，可以从组织培养物上清中，快速纯化单在隆抗体。此法简便，经济，产物纯度的能力。可以将大量的上清快速过柱。但蛋白Ｇ不能区分单克隆抗体（ｍＡｂ）和其他无关的ＩｇＧ，如存在于培养物上清中的牛ＩｇＧ。因此在用作标准组织培养基之前，将胎牛血清（ＦＣＳ）通过蛋白Ｇ，而除去牛ＩｇＧ。将产生大鼠抗小鼠和小鼠抗小鼠ｍＡｂ的杂交瘤培养于无牛ＩｇＧ的培养物中，随后将此培养物上清通过蛋白Ｇ，因而产生高纯度和     

雏鸡感染马立克氏病病毒合体液免疫球蛋白含量的变化

以马立克氏病病毒（ＭＤＶ）感染１日龄肉用雏鸡，在感染后５、２５、４５ｄ分别采取血清、泪液、胆汁、气管液和肠液，用间接酶联免疫吸附试验检测了这些体液中ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ含量的动态变化，结果如下：ＭＤＶ感染雏鸡血肖中ＩｇＧ，ＩｇＭ和ＩｇＡ含量较对照组显著降低，胆汁和肠液中的ＩｇＡ，ＩｇＧ和ＩｇＭ明显减少，泪液和气管液中的ＩｇＧ，ＩｇＭ和ＩｇＡ水平也显著下降。由此表明，ＭＤＶ感染不仅显著降低雏鸡全身     

BCG对妊娠母猪血清及初乳免疫球蛋白含量影响的研究

本试验给妊娠后期的法国大白母猪接种卡介苗（ＢａｃｉｌｌｉＣａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ；ＢＣＧ），以研究ＢＣＧ对母猪血清及初乳中ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｓＡ含量的影响。试验结果表明：一、活或灭活ＢＣＧ均可显著地提高妊娠母猪血清中ＩｇＧ、ＩｇＭ的含量，但对血清ＩｇＡ的含量影响不大。二、分娩前２个月及皮内多点注射活或灭活ＢＣＧ均可显著地提高分娩后２４小时内初乳中ＩｇＭ、ＩｇＧ的含量，但对初乳ＩｇＡ的影响甚微。三、对照组母猪在妊娠后期血清ＩｇＧ、ＩｇＭ呈下降趋势，而血清ＩｇＡ呈上升趋势。     

分泌抗细粒棘球蚴原头节可溶性抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与以羊源细粒棘球蚴原头节可溶性抗原免疫的Ｂａｌｌ／ｃ鼠脾细胞融合，经克隆和筛选后获得８株分泌抗ＳＰＡ的杂交瘤细胞株，即３Ａ４，１ＩＣ２，２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３，３Ｅ６，３Ｆ１０和２Ｃ２。亚类鉴定为ＩｇＧ１（３Ａ４，３Ｅ６，１Ｃ２，３Ｆ１０和３Ｃ２），ＩｇＧ２ｂ（２Ｃ２），ＩｇＧ３（２Ｅ３），ＩｇＧ总（２Ｂ３）。免疫双扩散法显示２Ｃ２腹水及２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３培养上清粗提物与     

SPA／SPG融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达

葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）和链球菌Ｇ蛋白（ＳＰＧ）的ＩｇＧ结合区编码基因合后，克隆到肠杆表达载体ＰＧＥＸ，ＳＰＡ／ＳＰＧ融合蛋白（ＳＰＡＧ）得到高效表达。可溶性ＳＰＡＧ－ＧＳＴ产物可被谷胱甘肽亲和柱一次性纯化。用琼扩和ＥＬＩＳＡ试验测定了表达产物与不同种属动物血清反应的性能。ＳＰＡＧ－ＧＳＴ与所有ＳＰＡ、ＳＰＧ各自反应的动物ＩｇＧ结合，对小鼠ＩｇＧ的反应优于ＳＰＡ或ＳＰＧ。在所测试的２３种动物血清中     

感染鸡传染性贫血病毒的雏鸡新城疫疫苗免疫后局部体液免疫球蛋白含量变化

本试验对感染鸡传染性贫血病毒（ＣＩＡＶ）雏鸡新城疫（ＮＤ）疫苗免疫及其强毒攻击后，其泪液、气管液、肠液和胆汁的免疫球蛋白ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量的动态变化进行了检测。结果发现，感染雏鸡泪液的ＩｇＧ、ＩｇＡ和气管液的ＩｇＧ及胆汁的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量均于接种ＮＤ疫苗后７～２８天明显低于未感染ＣＩＡＶ的免疫对照雏鸡；泪液的ＩｇＭ和气管液的ＩｇＡ含量在ＮＤ免疫后１４～２８天明显降低；肠液的ＩｇＡ和ＩｇＭ、ＩｇＧ含量分别于免疫后７～１４和７、１４天也显著减少。表明ＣＩＡＶ感染雏鸡对ＮＤ疫苗免疫的局部体液免疫应答能力降低。ＮＤ强毒攻击后，ＣＩＡＶ感染ＮＤ免疫雏鸡泪液、气管液、肠液和胆汁的ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ含量及免疫保护率，均明显低于未感染ＣＩＡＶ的免疫对照雏鸡。     

抗牛IgGFc受体单克隆抗体的生产与鉴定

利用阳性表达细胞和荧光激发流式细胞分类器建立了一个单克隆抗体的制备与快速鉴定系统。用克隆于表达性质粒载体ｐＣＤＭ８的牛ＩｇＧ＿１Ｆｃ受体（ｂｏＦｃγＲⅡ）ｃＤＮＡ转染ＣＯＳ７细胞并用被转染细胞作抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ＮＳＯ浆细胞瘤细胞株融合，筛选克隆出３株分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤，即ＣＣ－Ｇ３６、ＣＣ－Ｇ３７和ＣＣ－Ｇ３９。经使用荧光激发流式细胞分类器检测，３个单克隆抗体均识别经ｂｏＦｃγＲⅡ转染的ＣＯＳ７细胞而不识别未经转染的ＣＯＳ７细胞和经牛ＩｇＧ＿２Ｆｃ受体（ｂｏＦｃγ２Ｒ）转染的ＣＯＳ７细胞。３个单克隆抗体分别为ＩｇＧ＿１（ＣＣ－Ｇ３６）、ＩｇＧ＿２ａ（ＣＣ－Ｇ３７）和ＩｇＧ＿３（ＣＣ－Ｇ３９）。本研究还用同样方法验证了单克隆抗体ＣＣ－Ｇ２４抗ｂｏＦｃγ２Ｒ的特异性。     

一种快速提纯兔抗鸡EDS-76病毒IgG的方法

本试验采用辛酸加硫酸铵沉淀二步法提纯兔抗ＥＤＳ－７６病毒血清中的ＩｇＧ。在０．０６Ｍ醋酸盐缓冲液（ｐＨ４．８）稀释的血清中，每ｍｌ血清滴入３３μｌ辛酸时，非ＩｇＧ类蛋白可被基本除去。利用本法提纯的ＩｇＧ，免疫活性和生物活性不发生改变。该方法简便、快速、节约试剂，所获ＩｇＧ纯度高、活性好，适用于从大批量样品中提纯ＩｇＧ。     

建立一种牛血清IgG检测的自动比浊免疫分析法

建立一种自动比浊免疫分析法（ＴＩＡ）用于牛ＩｇＧ的检测。２４头份牛血清样品的ＩｇＧ浓度通过ＴＩＡ法测定，结果与放射免疫扩散法（ＲＩＤ）比较：ＴＩＡ法与ＲＩＤ法之间有显著的正向相关性（γ＝０９９５７，Ｐ＜００５），直线回归方程斜率为０７８７０８，Ｙ轴截距为１０２１０２。ＴＩＡ法用于牛血清ＩｇＧ定量检测是自动、快速和高精度的，溶血对ＩｇＧ测量结果无影响。临床应用：ＴＩＡ法可在约１０分钟内提供样品结果，因此可用于替代手工操作ＲＩＤ法。     

酶标SPA-Western-blot法鉴定猪IgG的研究

用健康二花脸母猪的新生仔猪，随机分为两组：出生后即刻隔离人工哺喂葡萄糖盐水（ＧＳ组）及自然哺乳组（ＰＣ组）。采集出生后２４小时的仔猪血清样品，用酶标ＳＰＡ－Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ法鉴定其中的ＩｇＧ。结果，ＰＣ组仔猪出现阳性反应，在非还原状态ＳＰＡ与ＩｇＧ结合，在还原状态下，ＳＰＡ与ＩｇＧ的重链结合；ＧＳ组仔猪呈阴性反应。表明，酶标ＳＰＡ－Ｗｅｓｔｅｒ－ｌｂｏｔ法鉴定猪ＩｇＧ具有简便、省时、省力、灵敏、准确的优点，值得推广     

鸡贫血因子病全身免疫功能变化的研究

用鸡贫血病毒（ＣＡＶ）感染１日龄ＡＡ雏鸡,以未感染同龄ＡＡ雏鸡为对照,感染后不同时间检测其外周血液Ｔ、Ｂ细胞数量和ＩｇＧ,ＩｇＭ,ＩｇＡ含量,胸腺,法氏囊,脾脏ＩｇＧ,ＩｇＭ,ＩｇＡ抗体生成细胞和Ｔ细胞数量以及Ｔ、Ｂ细胞增殖功能;胸腺和脾脏白细胞介素２（ＩＬ－２）和干扰素（ＩＦＮ）诱生活性等的动态变化。     

雏鸡MD疫苗免疫后体液免疫球蛋白含量动态变化

分别用火鸡疱疹病毒疫苗（ＨＶＴ）和马立克氏病（ＭＤ）三价苗（ＳＢ１＋８１４＋ＨＶＴ）肌肉注射免疫１日龄肉用ＡＡ雏鸡。在免疫后１０、２０、４０、６０和９０天以间接ＥＬＩＳＡ法检测实验雏鸡血清、泪液、气管液、胆汁和肠液中ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ含量的动态变化。结果发现免疫雏鸡血清、泪液和气管液ＩｇＭ、ＩｇＡ和ＩｇＧ为主的免疫球蛋均较对照鸡显著增多，胆汁和肠液中ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ的抗体水平也明显高于对     

雏鸡感染马立克氏病病毒后体液免疫球蛋白含量的变化

以马立克氏病病毒（ＭＤＶ）感染１日龄肉用雏鸡，在感染后５、２５、４５ｄ分别采取血清、泪液、胆汁、气管液和肠液，用间接酶联免疫吸附试验检测了这些体液中ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ含量的动态变化。结果如下：ＭＤＶ感染雏鸡血清中ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ含量较对照组显著降低，胆汁和肠液中的ＩｇＡ、ＩｇＧ和ＩｇＭ明显减少，泪液和气管液中的ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ水平也显著下降。由此表明，ＭＤＶ感染不仅显著降低雏鸡全身体液免疫水平，而且也严重抑制消化道和呼吸道局部体液免疫机能。     

鸡眼区相关淋巴组织对ND疫苗的点眼免疫应答 Ⅰ.局部体液免疫应答

本研究采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ、免疫组织化学方法、病理组织学方法对鸡眼区相关淋巴组织在鸡新城疫（ Ｎｅｗ ｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ， Ｎ Ｄ）疫苗点眼免疫后的局部体液免疫应答进行了研究。研究发现， Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ 疫苗点眼免疫后鸡眼区相关淋巴组织（ Ｈｅａｄａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍ ｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ， Ｈ Ａ Ｌ Ｔ）对 Ｎ Ｄ 疫苗可产生高效的局部体液免疫应答：①免疫组泪液和血清中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ 抗体及哈氏腺（ Ｈａｒｄｅｒｉａｎ Ｇｉａｎｄ， Ｈ Ｇ）中 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ 型浆细胞出现较对照组早，且抗体滴度及浆细胞数量均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１）。免疫组泪液和血清中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ｇ 抗体滴度及哈氏腺中 Ｉｇ Ｇ 型浆细胞数量也均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１），且哈氏腺中 Ｉｇ Ｇ 型浆细胞的出现早于对照组；②点眼免疫后泪液中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ抗体出现较血清中的早，且抗体滴度也显著高于血清中（ Ｐ＜ ０．０５）；③ Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ苗点眼免疫后可使结膜相关淋巴组织的形成和发育明显提前，免疫组结膜相关淋巴组织中的淋巴滤泡数量极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．     

感染鸡传染性贫血病毒雏鸡局部体液免疫球蛋白含量变化

１日龄雏鸡感染鸡传染性贫血病毒（ＣＩＡＶ）后，对其泪液、气管液、肠液和胆汁的ＩｇＧ、ｌｇＭ、ＩｇＡ含量的动态变化进行了检测。结果发现，感染雏鸡泪液、气管液、肠液和胆汁的免疫球蛋白含量均程度不同地低于未感染ＣＩＡＶ的对照雏鸡，其中泪液的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量分别在１４～３５日龄、７～２８日龄、２１～２８日龄明显减少（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；气管液的ＩｇＧ、ｌｇＭ、ＩｇＡ含量分别在１４～３５日龄、７～２１日龄、１４～２１日龄明显减少；肠液的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量分别在７～２８日龄、７～１４日龄、７～２８日龄明显减少；胆汁的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量分别在７～２８日龄、７～２８日龄、１４～２８日龄明显减少。由此表明，感染雏鸡眼部、呼吸道和消化道局部体液免疫功能呈现抑制状态。