新疆甘蓝型油菜下胚轴的组织培养和植株再生研究

以新疆甘蓝型油菜(Brassica napus L.)1khp11品系下胚轴为外植体,不同浓度6-BA与NAA激素组合的分化培养基诱导芽苗的分化,研究发现下胚轴在不同激素及浓度的6-BA与NAA组合中再生频率、分化率存在显著差异.通过种子实生无菌苗苗龄、诱导分化,4-D的预培养、添加AgNO3等因素的系统分析:五日无菌种子实生苗的下胚轴通过3d短时间的预培养,在最适分化培养基MS0+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+3.5mg/LAgNO3中,再生频率和分化率分别为35;和122.5;,初步建立了甘蓝型油菜1khp11品系下胚轴的高频率再生植株体系,为开展优良性状甘蓝型油菜的生物技术育种工作提供了条件保证.     

甘蓝型油菜下胚轴原生质体培养再生植株

油菜是重要的油料作物,我国的油菜种植面积和油菜籽产量均居世界首位。提高油菜籽粒含油量是育种的主要目标之一。我们利用拥有自主知识产权的反义PEP(phosphoenolpyruvate carboxylse）技术获得了超高含油量油菜＾[1]。将超高含油量特性与油菜杂种优势结合是使超高油油菜尽快应用于生产,实现产业化生产的重要途径。而超高含油量不育系的选育是杂种优势利用的前提之一。通过不对称体细胞杂交能“一步法”快速选育不育系＾[2]。为此,建立重演性好、再生额率高的原生质体培养系统十分必要。甘蓝型油菜原生质体的培养已有一些成功的报道＾[3-6],但愈伤组织分化频率都不高。本文以甘蓝型油菜下胚轴为材料,通过琼脂糖包埋法,建立了原生质体高频分裂及植株再生体系,为通过不对称体细胞杂交快速选育超高含油量不育系提供一些科学依据。     

提高甘蓝型油菜下胚轴外植体植株再生的研究

    以甘蓝型油菜品种N1、N2、N3、N4、N5和N6的下胚轴为材料,研究外植体芽再生的影响因素.结果表明:不同植物激素的组合、Ag+、蔗糖浓度、GA3、外植体的生理状态即苗龄以及基因型对外植体的再生均有较大影响.4 d苗龄的下胚轴置于含1.5 mg·L-1 2,4-D的MS培养基中预培养7 d,再转接到含30 g·L-1蔗糖的分化培养基(MS+BA 4 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+AgNO3 2.5 mg·L-1)上,芽再生频率和再生外植体数均较高,其中品种N1分别达到了40%和3.7.添加1.0 mg·L-1GA3可促进胚状体形成,芽苗再生频率显著提高(品种N1达到了95%,比不添加GA3提高了1倍多),但较易形成玻璃苗.     

佛手瓜下胚轴离体培养及再生植株

对佛手瓜下胚轴再生植株、试管苗移栽及大田定植进行了试验，结果表明：在ＭＳ＋ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＬＨ２００ｍｇ／Ｌ培养基上容易形成下胚轴愈伤组织；愈伤组织分化芽的培养基为ＭＳ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ，诱导分化率可达５７５％；顶芽和带腋芽茎段生根的培养基分别为ＭＳ＋ＩＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ和１／２ＭＳ＋ＩＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ，生根率分别为８１．８％和８３．３％；移栽培     

马蹄金下胚轴离体培养与植株再生

探讨了马蹄金（Dichondra repens Forst.）下胚轴离体培养的方法。在黑暗条件下种子萌发培养无菌苗，可迅速获得大量下胚轴，然后将下胚轴接种到MS 0.2mg/L2，4-D 0.5mg/L6-BA中可迅速获得大量愈伤组织，再用B5 2mg/L6-BA 0.2mg/Lα-NAA作分化培养基出苗数效果较好。     

佛手瓜下胚轴离体培养及再生植株

对佛手瓜下胚轴再生植株、试管苗移栽及大田定植进行了试验，结果表明：在ＭＳ＋ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＬＨ２００ｍｇ／Ｌ培养基上容易形成下胚轴愈伤组织；愈伤组织分化芽的培养基为ＭＳ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ，诱导分化率可达５７５％；顶芽和带腋芽茎段生根的培养基分别为ＭＳ＋ＩＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ和１２ＭＳ＋ＩＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ，生根率分别为８１．８％和８３．３％；移栽培养土用土砂粪＝３２１的灭菌土，幼苗成活率达７５％；大田定值，平均单株结果８８．４３个，平均单果重２４０．２３ｇ．     

甘蓝型黄籽油菜下胚轴再生体系的初步研究

以4个甘蓝型黄籽油菜品系为试验对象，采用正交设计，研究了预培养基中2，4-D和6-BA浓度、预培养天数、分化培养基中NAA和6-BA浓度组合、AgNO3浓度等对下胚轴芽再生频率的影响；同时研究了萌发培养基中添加6-BA和NAA对再生频率的影响。结果表明：预培养基中2，4-D及6-BA浓度是影响再生的主要因素；不同材料和不同处理间芽再生频率差异显著，且材料与处理间有明显的互作效应；萌发培养基中添加6-BA和NAA对再生频率无明显影响，但对芽苗的正常形态建成不利。     

油菜下胚轴再生频率影响因素研究

以甘蓝型油菜Brassica napus双低品种湘油13号为材料,对其下胚轴再生频率影响因素诸如种子萌发培养基、外植体、基本培养基、激素、愈伤组织龄期和AgNO3浓度等进行了研究。结果表明,在种子萌发培养基中加入适量激素,种苗质量好,其下胚轴愈伤组织发生早,形成快,诱导频率高,选取4d苗龄的种苗下胚轴靠近根基部或近子叶端0.3～0.5cm长为针植体,能使愈伤组织发生早,形成快,诱导频率也高,以B5 2,4-D0.3mg/L 6-BA3mg/L为诱导培养基,MS 6-BA3mg/L GA30.5mg/L为分化培养基,最终诱导频率高,在分化培养基中再加入适量AgNO3,芽苗分化频率成倍提高,以加入20umol/LAgNO3分化频率最高,选取16d的愈伤组织,分化效果较好。     

甘蓝型黄籽油菜下胚轴再生体系的初步研究

以4个甘蓝型黄籽油菜品系为试验对象,采用正交设计,研究了预培养基中2,4-D和6-BA浓度、预培养天数、分化培养基中NAA和6-BA浓度组合、AgNO3浓度等对下胚轴芽再生频率的影响;同时研究了萌发培养基中添加6-BA和NAA对再生频率的影响.结果表明:预培养基中2,4-D及6-BA浓度是影响再生的主要因素;不同材料和不同处理间芽再生频率差异显著,且材料与处理间有明显的互作效应;萌发培养基中添加6-BA和NAA对再生频率无明显影响,但对芽苗的正常形态建成不利.     

北海道黄杨下胚轴的离体培养及植株再生

 以北海道黄杨(Euonymus japonicus 'Cu zhi')下胚轴为外植体进行离体培养，以MS和B5为基本培养基，附加不同浓度的细胞分裂素（6-BA，KT）及生长素（NAA，IBA）诱导下胚轴直接再生不定芽。结果表明，不定芽未经过愈伤组织而直接产生于下胚轴的表皮或近表皮等表层细胞；不同的激素浓度和组合以及不同的培养基对不定芽的分化有影响；下胚轴的不同部位不定芽的分化能力差异显著。适宜不定芽分化的最佳培养体系为MS+1.5 mg·L-16-BA+0.05 mg·L-1NAA，最佳外植体为靠近子叶端的下胚轴部分，其分化率最高达63.64%；不定芽增殖培养基为MS+2.0 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA，增殖系数为3～5；1/2MS+1.0 mg·L-1IBA+100 mg·L-1活性炭适于再生幼苗的生根，生根苗经移栽成活。     

桃胚轴再生研究进展

以国内外桃胚轴再生方面的相关文献为基础,对影响其再生的相关因子如品种、基本培养基、植物生长调节物质的配比、取材部位、培养条件、胚轴取样时间和放置方式等进行了分析讨论,旨在为建立桃胚轴高频再生体系提供参考。     

甘蓝型油菜子叶原生质体培养及植株再生研究

以甘蓝型油菜中双6号子叶为材料制备原生质体,采用固液结合培养,探讨了其原生质体分离、培养与再生的优化条件,获得了再生植株。结果表明:混合酶液(0.5%纤维素酶+0.1%果胶酶+0.2 mol/L甘露醇+80 mmol/L CaCl2)与SCM溶液按3∶7的比例混合,酶解14 h可获得高产率中双6号子叶原生质体;原生质体在前人设计的B、C固液相结合培养基上培养效果好;最佳分化培养基为E培养基+1.0 g/L 6-BA+0.1 g/L NAA+0.02 g/L GA3+30μmol/L AgNO3;所有再生芽均在无激素的MS培养基上生根。研究结果为建立成熟的甘蓝型油菜原生质体再生体系提供了新的配方与依据。     

甘蓝型黄籽油菜子叶离体培养初报

以甘蓝型油菜黄籽双单倍体品系04K91为供试材料,以无菌苗子叶为离体培养外植体,考察了苗龄(7d、10d、13d)与外植体部位及大小(带柄子叶、1/4子叶片、1/8子叶片和子叶柄切段)对芽再生频率的影响。方差分析结果表明,苗龄对芽再生频率有显著影响,外植体对芽再生频率有极显著影响,而苗龄×外植体对芽再生频率影响不显著。多重比较结果表明,以7d苗龄无菌苗的带柄子叶或1/4子叶片为外植体较好,出芽率较高,达90%以上。     

油菜子叶及下胚轴对潮霉素敏感性研究

[目的]为油菜潮霉素抗性基因的遗传转化提供依据。[方法]以油菜品种沪油19号、苏州青、五月慢的子叶和下胚轴为外植体,研究不同浓度潮霉素处理对其褐化率、出愈率的影响。[结果]潮霉素浓度为3 mg/L时,五月慢、沪油和苏州青的褐化率分别为87.6%、30.7%、40.1%;褐化的临界浓度均为6 mg/L。苏州青下胚轴对潮霉素的耐受性较强,其褐化的临界浓度高于沪油19号和五月慢。潮霉素浓度为6 mg/L时,沪油19号、苏州青、五月慢子叶的出愈率分别为3.7%、2.3%、0,下胚轴的出愈率分别为5.1%、8.1%、2.2%。[结论]以子叶为外植体时,3个品种适宜的潮霉素筛选浓度为6 mg/L;以下胚轴为外植体时,沪油19号和五月慢适宜的潮霉素筛选浓度为6 mg/L,苏州青为9 mg/L。     

Plant Regeneration from Hypocotyl Protoplast of Brassica campestris

以大白菜成青２号为材料,从萌发５天的无菌苗下胚轴分离原生质体,然后以附加８．２％葡萄糖,０．４ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ,０．４ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的改良ＫＭ８ｐ液体培养基进行浅层培养．培养１３天后,用含５．２％葡萄糖的ＫＭ８ｐ培养基以１∶１进行稀释．４～６周后,再生细胞分裂并形成愈伤组织,直径约０．４～０．５ｍｍ的愈伤组织经ＭＳ培养基（附加２％蔗糖,０．８％的琼脂,１．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ,０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ）诱导植株分化．５９％的愈伤组织可分化形成芽,分化的芽经诱导生根发育成完整的植株．０．８ｍｇ／ＬＩＢＡ和４００ｍｇ／Ｌ的羧苄青霉素对分化再生有促进作用．     

结球甘蓝下胚轴培养及植株再生

对５个不同基因型结球甘蓝自交系进行下胚轴和子叶离体培养,结果,理甲和强甲２个自交系植株再生频率达８０％;用ＭＳ培养基,附加０．２×１０（－６）ＮＡＡ,１．０×１０（－６）２,４—Ｄ,１．０×１０（－６）６─ＢＡ培养甘蓝下胚轴,植株的再生频率最高。     

甘蓝型油菜花茎高效再生体系研究

研究了甘蓝型油菜花茎外植体高效诱导不定芽的再生体系,结果表明:以含有2,4-D(0.5￣1.0mg/L)的培养基对外植体进行预培养,以及在分化培养基中加入AgNO3(2￣6mg/L),可显著降低外植体褐化坏死的频率,提高了不定芽的发生频率及其再生能力;6BA(2.5mg/L)与NAA(0.1mg/L)配合使用有利于提高不定芽发生频率;再生的不定芽90%可长根。     

农杆菌介导的甘蓝型油菜“中双11号”的遗传转化

[目的]研究农杆菌介导的甘蓝型油菜"中双11号"的遗传转化过程。[方法]选取甘蓝型油菜"中双11号"为材料,以萌发后5～7 d的无菌苗下胚轴为外植体,采用农杆菌侵染法,建立该品种油菜的转基因方法,分别在卡那霉素和Basta除草剂的条件下筛选再生植株,并用PCR和组织化学的方法对筛选出的再生植株进行分子鉴定。[结果]试验筛选到了阳性植株(T0),并于T1代植株中鉴定到了PCR阳性植株。[结论]该研究为我国油菜转基因技术的完善提供了依据。     

甘蓝型黑籽油菜遗传转化中预培养环节的优化

[目的]对甘蓝型黑籽油菜遗传转化中预培养环节进行优化。[方法]利用甘蓝型黑籽油菜下胚轴为外植体,对油菜下胚轴的预培养及其浸染后影响再生和分化情况进行研究,分别从苗龄、激素两方面讨论了下胚轴再生与分化频率的影响。[结果]苗龄、激素与遗传转化之间存在密切的联系。在农杆菌介导的油菜下胚轴预培养最佳体系是:4 d苗龄的外植体在农杆菌侵染前进行5 d预培养,预培养基是MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L。绿色抗性愈伤组织获得GUS瞬时表达,PCR鉴定再生植株为转基因植株。[结论]该研究获得了最佳的预培养条件,为建立一个高效的遗传转化体系奠定基础。