黄芪解毒汤诱导乳腺癌细胞凋亡及对β-catenin、C-myc基因表达影响的研究

目的 探讨黄芪解毒汤体外干预人乳腺癌细胞MCF-7凋亡及对β-catenin、C-myc基因表达的影响,及该方抑制乳腺癌复发转移的可能机制。方法 培养MCF-7细胞并将其分为黄芪解毒汤组、阿霉素组及空白对照组。以黄芪解毒汤浓缩液、阿霉素液及细胞培养液分别干预各组MCF-7细胞24h后,以流式细胞仪检测其对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响,实时荧光定量PCR检测其对β-catenin, C-myc基因表达的影响。结果 与空白对照组比较,黄芪解毒汤组、阿霉素组可明显诱导MCF-7细胞的凋亡（P<0.01）;黄芪解毒汤组及阿霉素组β-catenin、C-myc表达量明显低于空白对照组（P<0.01）。结论 黄芪解毒可诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡,显著降低β-catenin、 C-myc基因表达,该结果为黄芪解毒汤在乳腺癌术后治疗中的应用提供实验依据。     

p16与CyclinD1在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期调控因子p16和CyclinD1在骨肉瘤中的表达及其临床意义。方法应用S-P免疫组织化学方法检测46例骨肉瘤和l6例骨软骨瘤组织中p16和CyclinD1的表达,并比较p16、Cyclin D1表达在骨肉瘤组织学分型、分化程度间的差异。结果46例骨肉瘤组织中p16和CyclinD1的阳性表达率分别为56.5%和69.6%;而它们在骨软骨瘤的阳性表达率为18.8%和25.0%,与骨肉瘤组比较差异有统计学意义(P<0.01)。骨肉瘤中,低分化组织p16的阳性率明显低于高分化组织(P<0.05);低分化组织CyclinD1的阳性率明显高于高分化组织(P<0.05),p16、CyclinD1在不同组织类型骨肉瘤中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论在骨肉瘤中p16和CyclinD1的表达异常,两者的表达都与骨肉瘤的病理分期无关,但与分化程度有关。提示它们在骨肉瘤的发生、发展中可能起重要作用,可作为判断骨肉瘤患者预后的参考指标之一。     

光照对姜黄素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的 研究光照对姜黄素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,探讨其作为肿瘤光动力学治疗新型光敏剂的可能性.方法 体外培养的MCF-7细胞加姜黄素后进行光照及避光处理24h,MTT法测细胞生长抑制率,Giemsa、Hoechst33258染色观察形态变化,流式细胞术检测凋亡率和细胞周期分布.结果 单纯光照对MCF-7细胞无生长抑制及诱导凋亡作用,光照及避光条件下姜黄素对MCF-7细胞生长抑制的IC50分别为2.68、13.44 μmol/L;细胞在光照条件下经5μmol/L姜黄素处理24h即呈现典型的凋亡形态;光照条件下1、2.5、3、5 10 μmol/L姜黄素及避光条件下5、10、15、20、30μmol/L姜黄素处理细胞24h,凋亡率分别为4.06%、16.79%、19.46%、35.97%、59.27及5.71%、8.88%、12.51%、38.04%、26.60%;姜黄素在光照及避光条件下均可引起细胞周期分布发生改变.结论 光照对姜黄素抑制MCF-7细胞生长及诱导凋亡具有增敏作用.     

ROS对氯化镉诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

为研究活性氧(ROS)对氯化镉(CdCl2)诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,本文采用荧光探针DHR检测CdCl2诱导的MCF-7细胞内ROS的变化水平;分别采用MTT法和DNA Ladder法检测CdCl2对细胞的毒性作用和细胞DNA的凋亡情况;通过加入自由基清除剂LNAC抑制细胞内的ROS水平,从而研究ROS对细胞凋亡的影响。结果显示,1.00×10-3 mol/L的CdCl2处理MCF-7细胞6h,细胞内ROS水平为对照组的2.04倍,细胞存活率为26.54%,DNA出现片段化分解。用CdCl2+LNAC复合处理MCF-7细胞6h,细胞内ROS水平为对照组的1.25倍,细胞存活率为61.17%,DNA不出现凋亡条带。因此,由CdCl2所导致的MCF-7细胞凋亡和DNA片段化分解,与细胞内ROS水平的升高有关。     

Aha1基因过表达对黑色素瘤细胞凋亡的影响

目的 研究Aha1基因在恶性黑色素瘤形成过程中的作用.方法 采用定量PCR和免疫印迹的方法检测并比较小鼠B16F10移植恶性黑色素瘤及瘤旁的组织中Aha1基因的表达.在恶性黑色素瘤B16F10细胞中转染转染真核表达载体过表达Aha1基因后,使用CCK-8法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡.结果 Aha1在恶性黑...     

不同诱导子对黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖积累的影响

[目的]研究水杨酸、茉莉酸甲酯、硝酸银、高糖、高盐、超声等诱导子对黄芪细胞生长和黄芪多糖合成的影响.[方法]向细胞悬浮液中加入各种诱导子或对细胞悬浮液进行超声处理,测定细胞干重增殖倍数和黄芪多糖的合成量.[结果]加入10.0 mg/L水杨酸可使黄芪多糖的含量为对照组的2.04倍;添加较低浓度的茉莉酸甲酯浓度（1.0 mg/L）使黄芪多糖的含量达48.974 mg/g,比对照提高了2.50倍;添加4 mg/L浓度的硝酸银能使黄芪多糖含量提高1.60倍;高糖和高盐胁迫处理均能诱导黄芪多糖的合成.高糖处理能使黄芪多糖的产量比对照提高了1.92倍.低剂量的超声刺激对黄芪细胞生物量的积累有显著的刺激作用.[结论]诱导子的添加可有效促进黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖的积累.     

不同前体对黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖积累的影响

[目的]研究苯丙氨酸、草酸和油酸等前体对黄芪细胞生长和黄芪多糖合成的影响.[方法]在细胞培养的第O天,向细胞悬浮培养液中加入3种前体,测定细胞干重增殖倍数和黄芪多糖的含量.[结果]添加2 mmol/L的草酸可以明显地促进黄芪细胞中黄芪多糖的积累,其含量为对照组的1.80倍;较低浓度苯丙氨酸能有效促进黄芪细胞中黄芪多糖的合成;当苯丙氨酸浓度为1.Ommol/L,黄芪多糖的含量达最大,为33.429 mg/g,为对照组的1.70倍;当油酸添加浓度由0.1mmol/L增加至2 mmol/L时,细胞中黄芪多糖的含量逐渐提高;2 mmol/L的油酸使黄芪多糖的含量达37.565 mg/g,为对照组的1.91倍.[结论]前体的添加可有效促进黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖的积累.     

黄芪种衣剂对2年生黄芪品质的影响

以不同用量(种子干质量的2%、4%、6%和8%)的黄芪种衣剂(AM)包衣为处理,以ND牌种衣剂(种子干质量的8%)包衣和空白种子为双对照,比较研究了不同处理条件下,2年生膜荚黄芪(Astagulus membranceus)植物中黄芪甲苷含量、总黄酮含量、总皂苷含量的变化情况.结果表明,黄芪种衣剂(AM)可以显著改善黄芪药材品质.各质量分数韧皮部处理均能够提高黄芪甲苷含量及总黄酮、总皂苷含量.就有效成分含量而言,在同一质量分数韧皮部下,黄芪种衣剂的处理效果优于大田作物中常用的ND种衣剂.AM(4%)处理为较适宜的包衣质量分数.     

黄芪种衣剂对2年生黄芪生物量的影响

通过黄芪进行种衣剂包衣处理,以ND牌种衣剂包衣和空白种子为双对照,比较研究在不同处理条件下,黄芪种衣剂对2年生膜荚黄芪植物生物性状以及生物量的影响.结果表明:黄芪种衣剂包衣处理后,在生物产量方面,黄芪种衣剂处理组在第2年的生物量增长好于对照,表明黄芪种衣剂在第2年时仍然对植株生物量的增长发挥作用.     

黄芪桂枝五物汤加减治疗乳腺癌术后上肢水肿的临床观察

目的 观察黄芪桂枝五物汤加减治疗乳腺癌术后上肢水肿的临床疗效。方法 选取80例乳腺癌术后上肢水肿患者,随机分为对照组和观察组各40例。对照组予物理疗法,观察组予黄芪桂枝五物汤加减治疗,疗程14d。记录患者治疗前后的臂围,并填写患肢功能评价表。结果 观察组总有效率为87.5%,对照组总有效率65.0%,观察组总有效率明显优于对照组（P<0.05）。治疗后,两组患者患肢功能评分均较同组治疗前明显下降（P<0.05或P<0.01）,两组治疗后患肢功能评分比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 黄芪桂枝五物汤加减可有效治疗乳腺癌术后上肢水肿,并改善患肢功能。     

疏肝健脾解毒方对乳腺癌癌前病变肝郁证模型大鼠血清性激素水平的影响

目的 研究疏肝健脾解毒方对乳腺癌癌前病变肝郁证模型大鼠血清性激素水平的影响。方法 采用二甲基苯蒽灌胃及夹尾法制备乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型,随机分为模型组、疏肝健脾解毒方组、三苯氧胺组、小金丸组,同时设空白对照组,分别干预4周后采用放射免疫法检测血清雌二醇、孕酮、泌乳素、黄体生成素和卵泡刺激素含量。结果 模型组血清雌二醇、孕酮、泌乳素、黄体生成素和卵泡刺激素水平均较空白对照组高,差异均有显著统计学意义（P<0.01）;各用药组血清性激素水平低于模型组,差异均有显著统计学意义（P<0.01）;疏肝健脾解毒方组雌二醇及黄体生成素水平低于对照药三苯氧胺组及小金丸组,差异均有统计学意义（P<0.05）;疏肝健脾解毒方组血清孕酮、卵泡刺激素、泌乳素水平高于三苯氧胺组,低于小金丸组,孕酮水平间差异有统计学意义（P<0.01）,卵泡刺激素、泌乳素水平水平间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 疏肝健脾解毒方可有效降低乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型血清性激素水平。     

扶正活血解毒方干预ANE诱导口腔黏膜成纤维细胞I型胶原表达的实验研究

目的 观察槟榔提取液（areca nut extract,ANE）对口腔黏膜成纤维细胞I型胶原分泌的诱导作用及扶正活血解毒方的干预作用。方法 体外培养口腔黏膜成纤维细胞,ANE为诱导剂,扶正活血解毒中药药物血清（低、中、高）为干预物;用免疫细胞化学法检测细胞内I型胶原的表达,用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）检测培养上清I型胶原的含量。结果 ANE对口腔黏膜成纤维细胞I型胶原的合成有促进作用（P<0.01）,扶正活血解毒方含药血清（中、高）对ANE刺激下的FB胶原合成有抑制作用（P<0.05）。结论 扶正活血解毒中药可下调ANE诱导的口腔黏膜成纤维细胞I型胶原的表达。     

解毒化瘀方对凝血酶合并缺氧诱导PC12细胞损伤ERK1/2信号通路表达的影响

目的 探讨急性缺血性中风（AIS）瘀毒病机的分子机制及解毒化瘀方对凝血酶合并缺氧损伤的保护作用。方法 （1）用凝血酶合并缺氧损伤PC12细胞,模拟急性缺血性中风的体外细胞模型。（2）将细胞分为空白组,模型组,解毒化瘀方含药血浆组和PD98059组（MEK抑制剂组）,应用荧光定量实时RT-PCR方法检测MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达,应用免疫荧光法检测ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达。结果 PCR结果提示：模型组MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达与空白对照组相比显著升高（P<0.01）,解毒化瘀方组和PD98059组MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达较模型组显著降低（P<0.01）,免疫荧光结果提示：解毒化瘀方组和PD98059组ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达较模型组显著降低（P<0.01）。结论 解毒化瘀方以凝血酶为作用的分子靶点,能够显著降低ERK1/2信号通路在缺血性中风体外细胞模型中的表达。     

丹参通络解毒汤对冠心病不稳定型心绞痛患者黏附分子的影响

目的 观察丹参通络解毒汤对瘀热壅毒、毒损心营证不稳定型心绞痛（unstanble angina,UA）患者的血脂以及血清细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的影响。方法 选择瘀热壅毒、毒损心营型冠心病不稳定型心绞痛患者60例。将60例患者随机分为两组,对照组30例给予常规西药治疗,观察组30例在对照组治疗基础上加服丹参通络解毒汤治疗,观察两组治疗2个月后的中医证候积分、心电图疗效、心绞痛疗效以及治疗前后血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、ICAM-1和VCAM-1的水平变化。结果 观察后,观察组中医证候积分心电图疗效,心绞痛疗效均较对照组高,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后两组TC、TG、LDL-C、ICAM-1和VCAM-1水平较治疗前降低,HDL-C水平较治疗前增加,且观察组血脂、黏附因子水平改善程度优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 丹参通络解毒汤治疗瘀热壅毒,毒损心营型冠心病不稳定型心绞痛疗效确切,其作用机制可能与调节血脂代谢、降低ICAM-1和VCAM-1水平有关。     

滋阴活血解毒方对AGEs诱导VEC损伤黏附分子及凝血相关因子表达的影响

目的 观察滋阴活血解毒方对糖基化终末产物（advanced glycation end-producs,AGEs）诱导血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）损伤的影响及其黏附分子、凝血相关因子表达的变化,进一步探讨该方对AGEs诱导VEC损伤的保护作用。方法 以人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）作为实验对象,以终浓度（100 mg/L）的AGEs诱导HUVEC损伤。各模型组及给药组细胞分别继续培养12、24、48 h。在显微镜下观察各组细胞形态变化,并以Western-blot法检测各组黏附分子VCAM-1、ICAM-1的表达;以RT-PCR方法检测TF、TM mRNA表达。结果 相对于空白组细胞,模型组细胞出现异常增殖,细胞数量明显增多,多数细胞变形皱缩,胞膜轮廓模糊,细胞内出现粗糙样颗粒变化,VCAM-1、ICAM-1、TF表达明显上调,TM表达下调,且在作用24 h后差异有显著性意义（P<0.01）;相同时间点,给药组较模型组圆缩形细胞减少,能下调VCAM-1、ICAM-1、TF表达,上调TM表达,且随着作用时间的延长更明显（P<0.01）。结论 滋阴活血解毒方能抑制AGEs对VEC的损伤,降低黏附分子的表达,下调表达组织因子mRNA转录,上调血栓调节素mRNA转录。     

黄连解毒汤对雏鸡免疫功能及免疫器官的影响

研究了黄连解毒汤对人工感染传染性法氏囊病毒雏鸡的免疫器官和免疫功能的影响。将21日龄的艾维茵雏鸡180只随机分成5组,前4组用传染性法氏囊病毒(IBDV)进行攻毒,攻毒后用黄连解毒汤分别以1.5、1.0、0.5mL/只的用量进行饮水治疗,连续7d,攻毒对照组和空白对照组不作处理。结果表明:法氏囊病毒主要侵害免疫器官胸腺、法氏囊和脾脏,其损伤主要体现为感染后7d时胸腺、法氏囊萎缩,脾脏肿大,与感染对照组相比,给药组患病鸡的胸腺、法氏囊、脾脏等器官的损伤程度显著降低,并且黄连解毒汤治疗Ⅰ组(1.5mL/只)外周血ANAE+T细胞数显著升高,抑制了雏鸡免疫功能的降低和红细胞免疫黏附功能的下降,表明黄连解毒汤对受法氏囊病毒感染的雏鸡的免疫器官和免疫功能具有较好的保护作用。     

中药保肝解毒汤对实验性铜中毒欧鳗鳃、肝、肾组织中Na+-K+-ATPase活性的影响

应用生物化学方法研究了由茵陈、龙胆、甘草、大黄及栀子组成的中药保肝解毒汤对铜中毒欧鳗鳃、肝、肾组织中Na -K -ATPase活性的影响。健康组欧鳗养于清水中,4个处理组先暴露于0.12mg.L-1Cu2 溶液4d,然后以其中一组作为阳性空白对照组不治疗,其余3组为中药治疗组,即保肝解毒汤治疗低剂量组(200mg.L-1)、保肝解毒汤治疗高剂量组(400mg.L-1)和降酶灵(所含成分为五味子)治疗对照组(100mg.L-1)。结果显示(:1)健康欧鳗鳃、肾组织中Na -K -ATPase活性分别是肝的3.61倍和3.50倍;(2)铜中毒可致鳃、肝、肾组织中Na -K -ATPase活性分别下降5.09%、85.98%和30.15%;(3)保肝解毒汤对铜中毒欧鳗肝组织中Na -K -ATPase活性的恢复效果最明显,肾组织次之,鳃组织则效果不明显;(4)3个治疗组中以治疗低剂量组和治疗对照组升高Na -K -ATPase活性的效果最为显著,治疗高剂量组效果较差。表明中药保肝解毒汤对铜中毒欧鳗肝、肾组织中Na -K -ATPase活性具有恢复作用,但剂量对其药效有影响。