检测犬瘟热病毒的单克隆抗体胶体金试纸条的制备

将从水貂中分离的犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）HB株经培养和纯化后免疫小鼠,制备分泌抗CDV-HB的杂交瘤细胞株,分别命名为2E1和7F3,ELISA测定腹水效价均大于107。亚类鉴定结果表明单抗2E1的分子亚类为IgM,7F3的分子亚类为IgG1,间接免疫荧光试验表明,这两株单抗均可以与CDV-HB特异性结合。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒并标记2E1单克隆抗体,获得检测貂犬瘟热病毒抗原的胶体金免疫层析试纸,且鉴定证明制备的检测CDV的胶体金试纸条具有良好的的特异性。     

湖北省武汉市某门诊猫传染性腹膜炎病例统计分析

为了解湖北省武汉市猫传染性腹膜炎的流行情况,以华中农业大学动物医院的门诊临床病例为研究对象,运用猫传染性腹膜炎抗原快速诊断试纸条和RT-PCR检测技术,对2017年11月至2018年9月的1 036例临床病例进行猫传染性腹膜炎检测,并对病例的发病情况和特点进行统计分析。共检出猫传染性腹膜炎阳性病例61例,检出率为5.9%。从时间分布看,2018年1月的检出率最高,占13.4%,其余月份的检出率为6.0%～8.0%。从群间分布看,英国短毛猫、田园猫、美国短毛猫的患病比例较高,占总阳性病例的76.7%;雄性猫(70.0%)患病比例高于雌性猫(30.0%),1岁以下幼猫的阳性占比为72.1%。本研究对于了解猫传染性腹膜炎流行发病特点以及该病的临床防治具有一定参考价值。     

犬瘟热病毒单克隆抗体的研制及胶体金试纸条检测方法的建立

本研究利用原核表达、纯化的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)N 蛋白免疫BALB/C小鼠,成功筛选到两株分泌CDV N 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为D3、D6。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性、特异性良好,能识别不同来源的犬瘟热病毒株,单抗亚类均为IgG1。以D3作为金标抗体,D6作为检测抗体,兔抗鼠IgG作为质控线抗体,制备犬瘟热病毒胶体金检测试纸条,检测犬瘟热病毒敏感性为1000TCID50,能有效检测区分犬瘟热病毒、犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒2型(Canine adenovirus type 2,CAV2)、狂犬病病毒(Rabies virus,RV)。综上,本研究建立的胶体金试纸条检测方法,灵敏度高、特异性强,适用于犬瘟热病毒临床快速诊断。     

湖北省武汉市某门诊犬细小病毒病病例统计分析

[目的]了解武汉市犬细小病毒病(CPD)的流行情况和特点。[方法]以华中农业大学动物医院门诊为依托,应用胶体金试纸条和PCR检测技术,对2015年9月至2016年9月的犬门诊病例进行调查分析。[结果]共检测门诊犬病例2 728例,检出CPD阳性121例,阳性检出率为4.4%。从时间分布看,该期间大部分月份的阳性检出率在3%~5%之间,2015年10月的最高,2016年6—9月的最低。从群间分布看,阿拉斯加、边牧、哈士奇、比熊、萨摩耶、博美、巴哥等犬种的CPD阳性数量均占该品种就诊犬总数量的10%以上,而拉布拉多、雪纳瑞、德牧、贵宾、金毛犬则在5%以上;雄性犬的CPD阳性检出率明显高于雌性;在阳性病例中,2~4月龄幼犬的占比最高,在40%~60%之间;未免疫或未按规定免疫犬的CPD阳性数量与总阳性数量的占比高达86.7%,而按规定免疫犬仅为13.3%。[结论]CPD的发生与犬的品种、年龄、性别、免疫状况和气候等因素存在一定的关系,尤其是其年龄和免疫状况。本研究有助于了解该病的流行特点,并可为该病的防治提供参考。     

一种犬瘟热病毒强弱毒株鉴别PCR检测方法的建立和初步应用

为了建立犬瘟热病毒(CDV)强弱毒株的鉴别PCR检测方法,根据犬瘟热病毒强弱毒株H基因的保守区域各设计了两对特异性引物,制备阳性对照模板,优化反应体系及反应程序;采集CDV自然感染犬只病料样本,利用该方法和胶体金试纸条进行对比检测.结果表明,PCR产物扩增判断为356 bp,最佳扩增体系20μL,最佳模板浓度为5 ng...     

犬瘟热病例的诊断体会

犬瘟热病是由犬瘟热病毒引起的主要危害幼犬的传染性极强的传染病。由于发病率高、死亡率高，给养犬者带来严重损失。     

一例犬瘟热的RT-PCR诊断

采用特异性引物，对一例犬瘟热疑似病例的肺脏及肝脏样品进行RT-PCR扩增(反转录多聚酶链式反应试验)，结果得到两份与预期相符合的阳性产物，而在对牛瘟疫苗进行扩增时则未得到阳性结果，表明该方法对犬瘟临床病例的诊断特异而有效。     

RT-PCR检测贵州犬瘟热病毒

根据犬瘟热病毒H基因核苷酸序列 ,设计合成一对引物对贵州临床诊断为犬瘟热 (CD)病死犬的心、肝、脾、肾、粪便进行RT PCR检测。结果表明 :从心、脾、肾病料上清液中可扩增出 760bp的特异性带 ,与预期扩增片段长度相同 ;粪便和肝脏上清液RT PCR结果为阴性 ,但粪便上清液接种Vero细胞后连续传代 3代 ,每代细胞培养液RT PCR结果均为阳性 ;在检测的 2 2条病死犬中 ,有 1 9条病死犬检测到犬瘟热病毒H基因的特异性核酸片段 ,阳性率为 86 4% (1 9/ 2 2 )。     

犬瘟热RT-POR快速诊断方法的建立

本研究建立了快速诊断犬瘟热感染的RT-PCR方法,并应用该方法对犬瘟热病死犬的脏器及感染犬体表采集样品进行了检测。为确定犬瘟热最佳的隔离检疫周期及采样部位,本研究对一例CDV攻毒犬感染病程收集的口鼻液、粪便、尿液样品进行了对比检测,结果证实粪便、口鼻液等易于获取的样品中CDV病毒滴度较高,并可在发病全程检测到,因此,它们可作为理想的受试样品。     

犬瘟热RT-PCR快速诊断方法的建立

本研究建立了快速诊断犬瘟热感染的RT-PCR方法,并应用该方法对犬瘟热病死犬的脏器及感染犬体表采集样品进行了检测。为确定犬瘟热最佳的隔离检疫周期及采样部位,本研究对一例CDV攻毒犬感染病程收集的口鼻液、粪便、尿液样品进行了对比检测,结果证实粪便、口鼻液等易于获取的样品中CDV病毒滴度较高,并可在发病全程检测到,因此,它们可作为理想的受试样品。     

某动物医院2017—2018年犬病用药情况分析

[目的]分析某动物医院2017—2018年犬病用药情况,以便掌握周围地区的犬病流行状况及药物使用情况,为临床用药提供基础数据。[方法]采用回顾性研究法,对2017—2018年的4 562张犬病门诊处方中的药物品种、用药金额、用药频度、日均费用、药物利用指数等进行分析。[结果]抗生素药物品种多;肤多乐浴液、聚维酮碘乳膏用药金额较高;地塞米松磷酸钠注射液、复方甘草酸铵注射液、托芬那酸片等用药频度较高;双甲脒销售金额与用药次数同步性好;2017—2018年药物利用指数均小于1。[结论]基于分析结果说明该动物医院犬用药情况基本合理。     

犬瘟热病毒的结构多肽分析

差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化经鸡胚成纤维细胞蚀斑克隆后的犬瘟热毒Ｓ＿８毒株，采用ＳＤＳ－ＰＡＥＧ电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ转印技术详细分析了犬瘟热病毒的结构多肽。回收凝胶中１条６３Ｋｄ的蛋白带，经３种不同的蛋白酶消化后，首次证明在犬瘟热病结构多肽中，融合蛋白Ｆ多肽的两个亚单位（Ｆ＿１和Ｆ＿２）是以胰蛋白酶的特异性水解位点精氨酸为桥梁连接形成Ｆ多肽的。试验结果表明，犬瘟热病毒主要包括Ｌ（２００．５Ｋｄ）、ＨＡ（７４Ｋｄ）、Ｐ（６８Ｋｄ）、Ｆ（６３Ｋｄ）、ＮＰ（５６Ｋｄ）、Ｍ（３５Ｋｄ）等６条结构多肽，同时下蛋白可在电泳中裂解成Ｆ＿１（４１Ｋｄ）和Ｆ＿２（２７Ｋｄ）２个亚单位。试验还发现其它３条分子量分别为５２Ｋｄ、４４Ｋｄ、３２Ｋｄ的病毒蛋白成分，它们是否均为病毒的结构多肽仍需深入研究。     

犬瘟热免疫预防研究进展

犬瘟热是由犬瘟热病毒感染引起的急性、高度接触性传染病.病犬通过眼、鼻分泌物、唾液、尿和粪便排出病毒,污染饲料、水源及用具等,经消化道感染其他易感动物.也可通过飞沫经呼吸道传播,偶尔也可见到胎盘感染,引起流产和死胎.康复犬尿液中也长期带毒.一旦发生CD,除早期应用抗血清及对症疗法有效外,中晚期病例多预后不良,因此,必须依靠免疫预防控制该病的发生.文章对其流行病学、发病机理、机体免疫和免疫程序进行了综述,特别是对犬瘟热的免疫类型、疫苗种类以及免疫程序进行了详细阐述.     

犬瘟热荧光抗体技术的应用研究

用硫酸铵盐析法和蔗糖梯度离心法，从犬瘟热病毒人工感染犬的肝，脾中浓度提纯犬瘟热病毒，以其免疫家兔，制备兔抗犬瘟热病毒免疫血清，再经硫酸铵沉淀与ＱＡＥ－葡聚糖凝胶Ａ５０层析提取ＩｇＧ，于４℃低速搅拌标记异硫氰酸荧光素，制成兔抗犬瘟热病毒抗原荧光抗体。用上述荧光抗体检测２１只犬瘟热病毒人工感染犬和３５只自然感染犬的１１６份白细胞，抗原阳性１０９份，而健康犬，传染性肝炎犬，犬细小病毒肠炎犬的３７份血液白     

郑州市犬瘟热病毒感染血清学调查

为了解郑州市犬瘟热流行情况,为犬瘟热的预防提供参考依据。采用间接ELISA法对来自郑州市480份血清进行抗体水平的检测,结果显示480份犬血清中犬瘟热抗体平均阳性率为16.04%,其中3岁以下犬犬瘟热阳性率为13.13%,3岁以上犬犬瘟热阳性率为 2.91%。犬瘟热的发病率仍然很高,尤其是3岁以下的犬犬瘟热阳性率较为高,应引起高度重视,防止犬瘟热的传播。     

水貂犬瘟热流行病学调查

为了调查山东省水貂犬瘟热的流行病学情况,对2010年8月－2012年8月期间由诸城、文登等地养貂场送诊的996份水貂病例进行了临床诊断和病原学检查。结果显示,共检出犬瘟热病毒阳性病料223份,阳性率为22.39%。其中,犬瘟热病毒与其他病原混合感染136例,占阳性病例的60.99%;阳性样本中未免疫病例116个;诸城检出阳性病例数最多,为147例;3月龄水貂发病率最高,占阳性病例的43.0%;水貂感染犬瘟热病毒主要症状为眼、鼻黏液性分泌物增多、脚垫增厚、呼吸困难;主要病理变化为肠、脑部出血。结果表明,犬瘟热依然是危害水貂养殖的重要疫病,且犬瘟热病毒易与其他病原混合感染;免疫接种能有效预防水貂犬瘟热,且宜在3月龄以前进行。     

犬瘟热病毒检测方法研究进展

犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)引起犬的一种急性、高度接触性传染病.该病的流行严重危害犬及毛皮动物养殖业的健康发展,且对濒危物种保护造成严重威胁.因此,准确、快速检测CDV感染是有效防控疫病传播的关键技术手段.论文介绍了CDV基因组结构、犬瘟热流行病学特点和临床症状,综合论述了CDV检测方法的研究进展,包括病毒分...