乳源酪啡肽及其制备的研究进展

随着具各种生物活性的短肽的不断发现．其研究和开发日益受到各国科学家的关注。大量科学研究表明，通过选择适当的蛋白酶，水解的蛋白质可以得到大量具有各种生物功能的生物活性肽。     

乳蛋白源阿片肽—β—酪啡肽

在动物营养学界，完整蛋白质或其降解产生的寡肽能被动物直接吸收的观点被提出后，肽营养的研究也受到了广泛的重视。本文就目前国际上的研究热点－β-酪啡肽的生理活性和工业化生产作一简要论述，提出了利用基因重组技术生产活性小肽的新观点。     

酪啡肽对21日龄断奶仔猪胃酸分泌的影响

采用放射免疫、RT—PCR等方法,研究了酪啡肽对21日龄断奶仔猪消化道酸度、血清中胃泌素水平和胃肠道胃泌素mRNA表达的影响。将24头仔公猪分对照组(正常哺乳28 d断奶)、试验Ⅰ组(β-酪啡肽-7组) 和试验Ⅱ组(早期断奶组)。试验组于21d断奶后,再连续添喂β-酪啡肽-7或生理盐水,每天2次(共20 mL)。10 d后,3组动物各随机取6头同时宰杀,共测定了18头仔猪胃、空肠和回肠食糜pH值及血清中胃泌素的含量,并对胃幽门和十二指肠胃泌素mRNA的表达进行了分析。结果发现日粮中添加β-酪啡肽-7的仔猪胃内平均pH为2.76±0.51,低于对照组(5.08±0.43)和早期断奶组(4.26±0.62);空肠和回肠食糜中pH值各组无明显差异。血清中胃泌素含量β-酪啡肽-7组最高,为100.03±18.72 pg/mL与对照组相比差异极显著。RT- PCR检测分析表明:β-酪啡肽-7组仔猪胃窦胃泌素mRNA表达量高于对照组(P<0.01)和早期断奶组。十二指肠中胃泌索mRNA表达的变化情况与胃窦相似。认为酪啡肽类可以促进断奶仔猪的胃酸分泌,其机制可能是通过上调胃泌素mRNA的基因表达,使胃泌素分泌增加所至。     

仔猪胃肠道食糜和血液中酪啡肽的检测及阿片样活性分析

将24头仔公猪分为对照组(正常哺乳28 d断奶)、试验I组(添喂β-酪啡肽-7)和试验Ⅱ组(添喂酪蛋白酶解物)。试验组于21 d断奶,再连续添喂酪蛋白胃蛋白酶解液或β-酪啡肽-7 10 d,每天2次(共20mL),至32 d,3组动物各随机取6头同时剖杀,取血、胃食糜和空肠食糜。通过所建立的RP-HPLC方法,在胃食糜和空肠食糜中检测到β-酪啡肽-5、β-酪啡肽-7样物质。对照组、酪啡肽-7组和酪蛋白水解液组,β-酪啡肽-7的平均含量分别为21.12±2.38,23.58±7.49、21.81±9.93μg/g胃食糜和16.99±3.48、19.08±2.85、21.36±4.85μg/g肠食糜;胃食糜中-βCM-7的含量高于空肠食糜,试验组均高于对照组。在各组仔猪的血液中未检测到酪啡肽样物质。肠食糜的细胞生物学试验结果表明:与喂仔猪料的对照组比较,试验I组和试验Ⅱ组对细胞腺苷酸环化酶的活性均具有不同程度的抑制作用,抑制率分别为27.9%和89.0%,抑制作用均能被纳洛酮反转,逆转率分别是43.2%和89.07%。提示在21日龄断奶仔猪饲料中添加酪啡肽或酪蛋白酶解物,其肠道中有酪啡肽释放,阿片总活性升高。     

β-酪啡肽在仔猪营养中的生理功能研究进展

β-酪啡肽可被新生动物吸收入血，影响仔猪机体的内分泌与免疫系统等功能。本文综述了其在仔猪营养中的生理功能研究现状。     

早期断奶仔猪日粮中β-酪啡肽添加时间探讨

将24头21日龄早期断奶仔猪随机均分2组(试验组和对照组),探讨β-CM的适宜添加时间,在3周饲喂期内,和对照组相比,第1周、第2周、第3周,①β-CM能分别提高33.33％(P<0.01)、16.13％(P<0.05)、2.5％(P>0.05)的日增重:②β-CM能分别提高13.73％、6.11％、1.21％的饲料转化率;③β-CM能分别降低41.67％(P<0 05)、6.67％(P>0.05)、0％的腹泻率;④β-CM在仔猪早期断奶后1～2周内的添加,是缓解断奶应激最合理的一种经济方式。     

饲喂β-酪啡肽对大鼠免疫功能影响的研究

β 酪啡肽 (β Casomorphinβ CM)是 β 酪蛋白经过酶解所释放的一类小肽 ,具有类似阿片肽的功能。试验通过饲喂 2种 β 酪啡肽 (β Casomor phin 7,β CM 7) ,和β Casomorphin 3 (β CM 3)来探索其对动物机体免疫活性的影响 ,并以谷胱甘肽 (GSH)作为肽参照组。试验选用SD雄性健康成年大鼠 ,分 3个肽组 (β Casomorphin 7,β Casomorphin 3,GSH)和 1个未给药对照组 ,每组 1 0只。 3种肽均以 1 2× 1 0 - 6 mol/L的浓度添加于饮水中 ,饲喂 3周后 ,分别进行试验检测。淋巴细胞转化试验 (LTT) (n =6)结果表明 :平均刺激指数 (SI)对照组为 1 99;β CM 7组为 2 56 ;β CM 3组为 3 2 3;GSH组为 2 46。3个肽组相对对照组SI有提高趋势 ,其中 β CM 3组相对对照组差异接近显著 (P =0 0 8)。红细胞免疫试验 (EIT ,n=6)测出各组红细胞C3b受体花环率各为 :对照组 4 9% ,β CM 7组 1 6 7% ,β CM 3组 1 5 9% ,GSH组 1 4 7%。 3个肽组相对于对照组均极显著升高 (P <0 0 1 )。腹腔巨噬细胞吞噬活性试验 (MTT ,n =6)测出各组平均OD570 分别为 :对照组 0 2 1 ;β CM 7组 0 2 2 ;β CM 3组 0 2 2 ;GSH组0 3。GSH组相对对照组差异显著 (P <0 0 5)。试验结果表明 β 酪啡肽对大鼠的免疫活性具有一定的促进作用     

β-酪啡肽-7对断奶仔猪胃酸分泌的影响

本试验旨在探讨β-酪啡肽-7对早期断奶仔猪胃酸分泌的影响及其可能机制。选取刚出生健康仔公猪24头,随机分为对照组和β-酪啡肽-7处理组,其中β-酪啡肽-7处理组仔猪在饲喂与对照组相同日粮的基础上,每天灌胃β-酪啡肽-7溶液。仔猪21日龄时一次性断奶,分别在21日龄和35日龄时屠宰,颈部采血分离血清、取胃肠内容物、胃底组织等,测定胃肠食糜的p H值、胃蛋白酶活性、血清中胃泌素的含量以及胃底组织中H~+-K~+-ATP/Na~+-K~+-ATP酶的活性。结果显示:β-酪啡肽-7能降低断奶仔猪胃内食糜p H,其中显著降低35日龄断奶仔猪的胃内p H值(P0.05),而对十二指肠、空肠以及回肠食糜p H无显著影响;β-酪啡肽-7能够升高21日龄断奶仔猪胃蛋白酶的活性,差异不显著(P0.05),但其能显著上调35日龄仔猪的胃蛋白酶的活性(P0.05);放射免疫分析法检测胃泌素结果显示:灌胃β-酪啡肽-7后仔猪血清中胃泌素含量均高于对照组,21日龄时差异不显著(P0.05),35日龄时极显著升高(P0.05);灌胃β-酪啡肽-7对断奶仔猪H~+-K~+-ATP/Na~+-K~+-ATP酶的活性作用不显著(P0.05)。说明添加β-酪啡肽-7可以有效缓解断奶应激引起的胃酸分泌不足以及胃蛋白酶活性较低等问题,其作用途径可能是通过促进胃泌素分泌实现的。     

乳源β-酪啡肽对大鼠小肠葡萄糖吸收及血糖浓度的影响

为了探讨主要的乳源活性肽β-酪啡肽(β-casomorphins,β-CMs)对大鼠小肠葡萄糖吸收及血糖浓度的影响,本试验从体外和体内2个方面对其进行了初步研究.体外试验利用翻转的离体小肠囊研究了浓度为0(对照组)、7.5×10-5(高剂量组)、7.5×10-6(中剂量组)、7.5×10-7mol/L(低剂量组)的β-CM7和β-CM5对离体小肠囊葡萄糖吸收的影响,同时选用阿片特异性阻断剂纳洛酮与β-CM7按物质的量比2:1混合,探讨影响葡萄糖吸收的阿片机制.体内试验选用健康成年SD大鼠21只,随机分为对照组(灌胃生理盐水)、β-CM7组(灌胃7.5×10-6mol/L β-CM7)和β-CM5组(灌胃7.5×10-6mol/L β-CM5).连续灌胃30 d后,断颈处死,取血液、肝脏及肌肉,检测血清中葡萄糖和胰岛素含量以及体内肝糖原、肌糖原含量.体外试验结果显示,不同浓度的β-CM7和β-CM5(7.5×10-7～7.5×10-5)均能抑制离体小肠囊对葡萄糖的吸收,抑制作用的大小与浓度有关;加入纳洛酮阻断剂后没有逆转β-CM7对小肠囊葡萄糖吸收的抑制效用.体内试验结果显示,与对照组相比,试验后期β-CM7组和β-CM5组大鼠的血糖浓度和肌糖原含量均极显著降低(P<0.01),血清胰岛素含量无显著变化(P>0.05);β-CM5组的肝糖原含量极显著降低(P<0.01).以上结果提示,β-CM7和β-CM5具有辅助降血糖作用,其降糖机制可能与肌糖原的消耗和非阿片途径抑制小肠葡萄糖的吸收有关.     

酪啡肽及其酪蛋白水解肽对早期断奶仔猪分泌型免疫球蛋白A和细胞因子水平的影响

本文旨在研究酪啡肽及其酪蛋白水解肽对早期断奶仔猪分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和细胞因子水平的影响。24头仔公猪随机分为对照组(正常哺乳28d断奶)、试验Ⅰ组(添加β-酪啡肽-7)和试验Ⅱ组(添加酪蛋白酶解物)。试验组于21d断奶,再连续添加酪蛋白胃蛋白酶解液或β-酪啡肽-710d,每天2次(共20mL),至32d,3组动物各随机取6头同时剖杀,取血、胃食糜和空肠食糜。观察其血清IL-2、TNF-α和胃肠内容物中SIgA的含量变化。结果表明:添加酪蛋白水解液组仔猪血清中IL-2的水平比对照组高75.9%,差异极显著(P<0.01);试验Ⅰ组血清中IL-2水平比对照组高35.7%,差异显著(P<0.05)。血清中TNF-α水平试验组略低于对照组。在对照组、试验Ⅰ和Ⅱ组仔猪的空肠食糜中均检测到SIgA,平均含量分别为(6.48±0.85)ng/g、(6.30±0.85)ng/g和(8.71±0.54)ng/g。与对照组相比,试验Ⅱ组差异极显著(P<0.05);胃食糜中未检测到SIgA。提示乳源活性肽对早期断奶仔猪细胞免疫和黏膜免疫活性具有一定的促进作用。     

HPLC测定饲料源小肽产品中赖氨酸含量

将蛋白饲料源小肽产品按照GB/T 18246-2000中酸水解法进行水解及相应的处理,获得氨基酸混合液与2,4-二硝基氯苯(CDNB)衍生化反应后,其中赖氨酸生成二硝基氯苯赖氨酸(DNP-LYS),经日本岛津SPD-10AVG高效液相色谱(HPLC),C18柱分离,UV350 nm检测,衍生后氨基酸混合物得到较好的分离,赖氨酸最低检出量2μg.     

苦马豆素来源及其检测方法的研究进展

概述了苦马豆素的来源和理化特性的研究情况,从薄层色谱（TLC）、气相色谱（GC）、高效液相色谱（HPLC）、酶分析法、荧光光谱和离子抑制色谱等几个方面介绍了苦马豆素定性、定量检测方法的研究进展,并对各种检测方法的优缺点进行了比较。     

鸡蛋中四环素类药物残留量测定的高效液相色谱法研究

建立了鸡蛋中土霉素、四环素、金霉素、多西环素残留量测定的高效液相色谱法。样品经弱酸性缓冲液提取后,HLB固相萃取柱净化后,反相液相色谱分离测定,本方法的检出限为10μg／kg,定量限为50μg／kg。四种四环素类药物在50～1000ng／mL范围内呈线性相关。在100～400ng／g添加浓度范围内,平均回收率为60％～110％,批内变异系数在3．2％～13．7％之间（n=5）,批间变异系数在0．9％-5．3％之间（n=4）。结果表明,该法简单、灵敏、特异性强,适用于鸡蛋中土霉素、四环素、金霉素、多西环素残留量的测定。     

高效液相色谱法测定奥芬达唑原料中的有关物质

用高效液相色谱法测定奥芬达唑原料中的有关物质,色谱柱为C 18柱,流动相为乙腈-2 g/L戊烷磺酸钠溶液(36∶ 64,V/V),用2.8%(V/V)的硫酸溶液调节pH值至2.7.流速为1 mL/min,检测波长为 254 nm.     

高效液相色谱法测定液态奶三聚氰胺方法的建立

为建立高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量方法,采取三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取,提取液离心后经混合型阳离子交换固相萃取柱净化,洗脱物用甲醇溶液溶解,最后用高效液相色谱仪进行测定.结果表明,校准曲线在0.05 mg/kg～1.0 mg/kg范围内,相关系数r>0.999,奶与奶制品中三聚氰胺的检测限为0.5 mg/kg,定量限为1 mg/kg.高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺的方法灵敏度高,适用于液态奶中三聚氰胺的测定.     

高效液相色谱法测定饲料中替米考星含量

为建立饲料中替米考星含量的高效液相色谱检测分析方法,实验样品经水-乙腈-磷酸二丁胺溶液-四氢呋喃（805:115:25:55,V:V:V:V）提取后,振荡10 min,超声10 min,4000 r/min离心5 min,取上清液过0.45 μm有机微孔滤膜后供高效液相色谱仪分析测定。结果表明：替米考星在10 ~ 500 μg/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.999,方法检出限为5 mg/kg,定量限为10 mg/kg,平均回收率为92.0% ~ 101.2%,相对标准偏差为1.02% ~ 5.17%。该方法操作简单,重复性好,准确率高,且上机8 min即可完成替米考星的检测,适用于饲料中替米考星含量的测定。[关键词] 饲料|替米考星|高效液相色谱法     

高效液相色谱法检测饲料中的着色剂

实验建立了同时分离检测饲料中叶黄素、斑蝥黄、β-胡萝卜素3种着色剂的高效液相色谱法。样品用乙腈-丙酮提取,以甲醇-二氯甲烷为流动相在1.2 mL/min的流速下进行梯度洗脱。该方法在6 min内实现了3种着色剂的基线分离,叶黄素、斑蝥黄的线性范围为0.05～200μg/mL,β-胡萝卜素的线性范围为0.5～200μg/mL,线性相关系数≥0.9991。叶黄素、斑蝥黄、β-胡萝卜素的检测限分别为0.025、0.020、0.25μg/mL;样品平均回收率为80.1%～105.0%,相对标准偏差<5.00%。     

金芩芍注射液含量测定的不确定度分析

为了探讨金芩芍注射液含量测定的不确定度分析评定,通过分析测量过程,建立数学模型,确定不确定度来源,评价各标准不确定度分量合成标准不确定度,评定扩展不确定度,给出不确定度评定结果报告。金芩芍注射液含量测定结果可表示为(2.96±0.04)mg/m L(k=2)。测量结果不确定度的主要来源为天平称量、高效液相色谱仪和小体积玻璃量具。     

PCR结合变性高效液相色谱法与荧光定量PCR法在检测禽白血病中的比较与应用

本研究旨在比较PCR结合变性高效液相色谱技术(PCR-DHPLC)与荧光定量PCR(Real-time PCR)两种方法在检测禽白血病中的应用。根据禽白血病pol基因序列,设计1对引物和1条探针,利用引物进行禽白血病模板的RT-PCR扩增,产物经变性高效液相色谱上样处理;利用引物及探针进行荧光定量PCR扩增,结果与PCR-DHPLC进行比对。两种方法同时用正常鸡胚尿囊液、鸭瘟病毒、传染性支气管炎病毒、鹅细小病毒、H5N1亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、减蛋综合症病毒做特异性检测;以稀释成不同梯度的AV228毒株核酸做敏感性检测。试验结果表明PCR-DHPLC方法只对禽白血病病原有阳性扩增的吸收峰,Real-time PCR也只对禽白血病病原有阳性扩增,两法均对其他禽源病毒核酸无特异性扩增;PCR-DHPLC与Real-time PCR法相比,灵敏度虽低于Real-time PCR 1个数量级,但检测限仍可达到3 pg核酸模板。两种方法均能检测到感染鸡的泄殖腔拭子所采集的病毒量。采集120份蛋鸡棉拭子同时进行临床检测,两种方法检测ALV的符合率为100%(15/120)。研究表明两种方法均可用于诊断禽白血病病毒。     

氟苯尼考可溶性粉含量测定的不确定度分析

为分析评定氟苯尼考可溶性粉含量测定的不确定度,通过高效液相色谱（HPLC）法进行测定,建立HPLC法测定氟苯尼考可溶性粉含量的数学模型。以Agilent ZORBAX SB-C18（250mm×4.6mm,5μm）为色谱柱,乙腈-水-冰醋酸（100:197:3）为流动相,柱温：30℃,检测波长：224nm。分析各因素引入的标准不确定度分量,合成标准不确定度,评定测定结果在95%置信区间的扩展不确定度,给出不确定度评定结果报告。测定结果表明,含量测定的不确定度主要源于称量、溶液配制及峰面积测定过程。含量测定的标准不确定度为 1.16%,扩展不确定度为2.32%。含量测定结果表示为（97.3±2.32）%,包含因子k＝2。该方法适用于HPLC法测定氟苯尼考可溶性粉含量的不确定度评定,可为氟苯尼考可溶性粉的质量控制和客观评价提供参考。