磁场对白僵菌菌丝生长和产孢量的影响

优质菌株能获得最佳产品和防治效果。长期以来,研究菌种退化问题,从不同途径和处理方法提高产孢量。宋明芝(1976)用钴₆₀和化学药剂处理白僵菌株;张爱文(1991)紫外线诱变选育等,都获得优质菌株^[2],但随转代递增退化严重。为此,本着简单易行经济有效的原则,应用磁场处理白僵菌株达到加快菌丝生长,提高产孢量的作用。     

磁场对白僵菌菌丝生长和产孢量的影响

优质菌株能获得最佳产品和防治效果。长期以来,研究菌种退化问题,从不同途径和处理方法提高产孢量。宋明芝(1976)用钴_(60)和化学药剂处理白僵菌株;张爱文(1991)紫外线诱变选育等,都获得优质菌株,但随转代递增退化严重。为此,本着简单易行经济有效的原则,应用磁场处理白僵菌株达到加快菌丝生长,提高产孢量的作用。     

球孢白僵菌生物学特性与其对小菜蛾致病力相关性分析

为明确球孢白僵菌的各项生物学指标与其对小菜蛾致病力间的相关性,对一株球孢白僵菌菌株GXU-Bb进行单孢分离,测定了菌株GXU-Bb及其分离子菌株GXU-Bb16、GXU-Bb10、GXU-Bb13和GXU-Bb05这5个菌株的生长速率、产孢量、孢子萌发率、胞外蛋白酶水平和几丁质酶水平等多项生物学指标。结果表明,各菌株间生长速率和孢子萌发率无显著差异;产孢量变化范围1.54×10^7-2.98×10^7个/ml;胞外蛋白酶水平变化范围1.04-1.19;几丁质酶水平变化范围1.05-1.14;各菌株间对小菜蛾二龄幼虫的致病力差异较大,校正死亡率变化范围为39.81%-83.79%。将各生物学指标与菌株对小菜蛾二龄幼虫的校正死亡率进行回归分析得出,球孢白僵菌对小菜蛾的致病力与菌株生长速率、孢子萌发率无显著相关关系;与产孢量、胞外蛋白酶水平呈极显著正相关关系;与几丁质酶水平呈显著正相关关系。     

假隔链格孢SF-193菌丝的生长特性及其寄主选择性

室内条件下,研究了不同培养条件和营养条件对空心莲子草生防真菌假隔链格孢Nim- bya alternantherae菌株SF-193菌丝生长的影响,测定其对27科86种植物的安全性。结果表明,生防真菌SF-193菌株的最佳生长温度约为30℃,最适生长pH值为10～11,生长过程中需要适当的空气,光照条件对SF-193生长没有影响;以玉米粉、黄豆粉作为碳源,以蛋白胨、牛肉膏作为氮源的培养基成分最有利于SF-193菌株的生长。SF-193菌株对绝大多数非靶标植物、尤其是对大田主要农作物和蔬菜均不致病,安全性良好。     

桃小食心虫病原菌—球孢白僵菌TST05菌株生物学特性研究

[目的]研究从自然染病的桃小食心虫幼虫上分离的球孢白僵菌TST05菌株的生物学特性.[方法]测定不同培养基、外界不同温度和湿度对该菌株菌丝营养生长及孢子萌发的影响.[结果]该菌株在PDA、PPDA、SDAY、SMAY 4种培养基上均生长良好,菌落厚而致密,产孢量均大于3.95×107孢子/mL;菌株适应的温度和湿度范围宽,15～30℃之间,RH 30 ％～100％之间孢子均可萌发、生长和产孢.随着温度接近25℃、湿度增大,孢子的萌发率、菌落的生长速率和产孢量都显著增加.15℃、RH 100％时产孢量为1.32× 107孢子/mL;25℃、RH 30％时,产孢量也能达到1.37×107孢子/mL;25℃、RH 100％时产孢量达到6.19×107孢子/mL.15℃、RH 100％孢子萌发率为52.28％;25℃、RH＞80％时,孢子萌发率都能达到90％以上.[结论]TST05菌株能适应北方干旱低温条件,可开发成为防治桃小食心虫的生物制剂.     

藜麦灰霉病病原菌鉴定及环境因子对其菌丝生长和分生孢子萌发的影响

为明确我国藜麦灰霉病病原菌的归属及环境因子对其菌丝生长和分生孢子萌发的影响,在藜麦灌浆期从山西省忻州市原平市和五台县采集具典型症状的藜麦标本,应用直接挑取法分离病原菌,选取代表性菌株对其形态学特征、系统发育、致病性及生物学特性进行观察和测定。结果表明,综合形态学特征及基于G3PDH、HSP60和RPB2多基因系统发育分析结果,最终确定引起我国藜麦灰霉病的病原菌为灰葡萄孢Botrytis cinerea。致病性测定发现接种6 d时,接种处密生灰色霉层,籽粒霉变,与田间症状基本一致,说明分离菌株确为藜麦灰霉病的病原菌。灰葡萄孢在燕麦琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基和察氏酵母培养基上培养后可产生菌核,而在麦芽浸粉琼脂培养基上培养可产生分生孢子;在察氏酵母培养基上培养的菌丝生长速率最快,平均为16.8 mm/d。适宜灰葡萄孢菌丝生长和分生孢子萌发的温度为15～25℃、水活度≥0.96、pH 5～6。     

球孢白僵菌对小菜蛾的侵染相关基因分析

本文研究球孢白僵菌对小菜蛾的侵染相关基因,为提高球孢白僵菌的致病力提供基因靶点,从而提高球孢白僵菌对小菜蛾的防治效果。通过室内生物测定,筛选出球孢白僵菌对小菜蛾的高毒力菌株;采用新一代Solexa高通量测序技术对纯培养的球孢白僵菌和球孢白僵菌侵染小菜蛾48 h的虫菌混合样品分别进行转录组测序,筛选差异表达基因;结合生物信息学方法分析差异表达基因涉及的基因功能及细胞通路等;应用荧光定量PCR技术验证20个基因的差异表达。转录组测序结果显示,纯培养的球孢白僵菌与侵染小菜蛾幼虫48 h的球孢白僵菌转录组对比分析共得到8383个差异表达基因,其中显著差异表达基因716个,上调基因350个,下调基因366个。本研究筛选获得的差异表达基因,特别是上调表达的基因可能与球孢白僵菌对小菜蛾的侵染有关。GO二级分类表明,DEGs被注释到26个GO term中,包括11个生物学过程,8个细胞组分和7个分子功能;Pathway分析表明共有12个Pathway,93个上调基因和61个下调基因参与了这些途径。深入分析发现,胞外丝氨酸富集蛋白、细胞壁蛋白、胞外双加氧酶、铁转运蛋白、细胞壁半乳糖抗原蛋白等在侵染过程中与毒力相关的基因均具有显著性差异表达。研究结果为阐明球孢白僵菌对小菜蛾的侵染机制提供了基础。     

培养条件对柑橘黑斑病菌丝生长的影响

以南丰蜜桔黑斑病菌为实验材料,研究了不同生长环境下病原菌生物学特性。结果表明,病菌在5~35℃的范围内均能生长,25℃为菌丝生长的最适温度。适宜pH值范围为5~7,最适pH值为6;在不同培养基中,菌丝在PDA培养基上生长最快,在OA培养基上菌落周围产生一定量的黄色素;光照时间长短对菌丝生长几乎无影响。     

球孢白僵菌液体生长营养和培养条件优化

以菌株液体发酵过程中菌丝干重和芽生孢子浓度为测试指标, 对球孢白僵菌DZDC-9菌株液体发酵营养需求进行优化, 结果表明, 菌株生长的适宜碳源为葡萄糖, 适宜氮源为酵母粉, 在基础培养液中添加0.000 5 mol/L KCl可以显著提高菌丝和芽生孢子浓度。通过单因素分析和正交设计对不同培养条件下菌丝生长量进行测定, 结果表明, 在培养温度26 ℃, 培养液装样量1/5, 初始接菌量107个/mL, 转速200 r/min的培养条件下, 菌株液体发酵能在60 h达到最大菌丝生长量(13.184±0.328 6)g/L。利用筛选出的培养基和培养条件进行液固双相发酵试验, 得到的孢子粉产量为(22.30±1.78)g/kg大米, 显著高于优化之前的产量(13.04±1.90)g/kg大米。     

球孢白僵菌DNA甲基转移酶基因Dim-2的克隆及其表达分析

本研究运用RACE技术,从球孢白僵菌中克隆出完整的DNA甲基转移酶基因Dim-2的编码区序列。该基因c DNA全长4021 bp,5′端非翻译区283 bp,3′端非翻译区303 bp,开放阅读框(ORF)3429 bp,编码1142个氨基酸。蛋白理论分子量为128 k D,理论等电点为6.13。结构域分析显示,该基因编码蛋白含有1个BAH结构域和合成5-甲基胞嘧啶的活性区域。Real-time PCR与HPLC检测表明,球孢白僵菌DNA甲基化程度会随着其生长发育的变化而不断改变。结果显示,球孢白僵菌Dim-2基因的转录表达量与基因组DNA的5-甲基胞嘧啶百分含量在菌体培养初始产孢阶段(即培养第7 d),均出现了1个低谷。这可能意味着球孢白僵菌Dim-2基因所引起的DNA甲基化与其生长发育之间具有内在的联系。本研究将为进一步探索DNA甲基化在虫生真菌生长发育中具体功能机制奠定基础。     

球孢白僵菌不同分离株的生物学特性的研究

为了明确不同白僵菌菌株的生物学特征,对15株白僵菌菌株的ITS片段进行测序分析,并对这些菌株的菌落生长速率、产孢量、孢子萌发率、单芽管孢子萌发比例、单芽管平均长度和长芽管平均长度等多项生物学指标进行测定。结果表明,单芽管孢子萌发比例变化范围在11．91％～96．03％;单芽管平均长度和双芽管平均长度分别为6．28-21．43μm和10．338～19．902μm;各菌株间孢子萌发率差异很大,变化范围22．09％-86．32％。对菌株的培养特性（孢子萌发率、产孢量和菌落生长速率）与孢子萌发特性（单芽管孢子萌发比例、芽管总平均长度和芽管整齐度）这两个主因子进行典型相关分析,两性状集团总体相关不显著（P=0．341）,而孢子萌发率与单芽管孢子萌发比例相关显著,菌落生长速率与芽管总平均长度呈显著相关。     

球孢白僵菌BB-T02生物学特性及对两种检疫性粉蚧的侵染活性

南洋臀纹粉蚧和石蒜绵粉蚧是近年我国新记录的两种检疫性有害生物,目前分别在福建省的番荔枝果园和多肉植物种植基地发生为害严重。为明确球孢白僵菌BB-T02对这2种检疫性粉蚧的生防潜力,本研究在该菌株生物学特性的基础上,测定该菌株对两种检疫性粉蚧的致病力和胞外酶活性。结果表明,球孢白僵菌BB-T02培养最适的温度为28℃、光周期8L:16D、碳源为麦芽糖、氮源为蛋白胨,在此条件下培养10 d菌落直径和产孢量分别可达5.60 cm和4.22×10⁸孢子/cm²。菌株BB-T02侵染南洋臀纹粉蚧和石蒜绵粉蚧10 d后的LC₅₀分别为5.00×10⁵孢子/mL和2.17×10⁵孢子/mL,1.00×10⁸孢子/mL处理的累计致死率分别为85.39%和88.76%、LT₅₀分别为5.78 d和5.19 d。菌株BB-T02蛋白酶活性的变化幅度较大,在第5 d达峰值22.68 U/mL;几丁质酶和脂肪酶活性的变化幅度相对平稳,均在第6 d分别达到峰值13.19 U/mL和9.77 U/mL。综上,球孢白僵菌BB-T02生长速度快、产孢量高,对南洋臀纹粉蚧和石蒜绵粉蚧的侵染活性强,可用于这两种检疫性粉蚧的生物防治。     

新疆葡萄枝孢果腐病病原菌的鉴定及生物学特性

2019年在新疆葡萄上发现一种新病害,主要危害成熟葡萄果实。感病果实病部产生橄榄绿色霉层,导致葡萄产量和品质严重下降。为明确该病害病原菌种类及其生物学特性,从南北疆11个葡萄园采集80个病样,用常规稀释分离法和单孢分离法对病原菌进行分离和纯化,根据采集地点、葡萄品种、菌落生长速度等特征选取21个代表性菌株进行形态学鉴定、分子生物学鉴定和致病性测定以明确病原菌种类;并研究了温度、光照、培养基、pH对病原菌生长及产孢的影响。结果表明,引起新疆葡萄果腐病的病原菌为枝孢菌,有两个种,即枝状枝孢Cladosporium cladosporioides和柠檬形枝孢Cladosporium limoniforme,其中枝状枝孢为优势种。两种病原菌的适宜生长和产孢的温度均为25℃,适宜生长和产孢的培养基是PDA,不同光照条件下都可大量产生分生孢子,最适宜生长和产孢的pH为7。明确了新疆葡萄枝孢果腐病病原菌及其生物学特性,为今后该病害的预测预报、发生规律和防治方法的研究打下基础。     

三株球孢白僵菌的分离鉴定与其对粘虫的室内毒力

通过黄粉虫虫饵法从河北省采集的土样中分离得到三株昆虫病原真菌,结合形态学特征和rDNA序列分析对菌株进行了鉴定,结果表明：三株均为球孢白僵菌Beauveria bassiana,编号依次为Z-G2-5、M-G4、M-G3。通过生测发现3株球孢白僵菌菌株均能有效感染粘虫幼虫,三株球孢白僵菌对粘虫3龄幼虫的毒力不同：在5×10⁸孢子/mL剂量下,菌株Z-G2-5第6 d时对粘虫的累计校正死亡率达到96.77%,LT₅₀为3.02 d,LC₅₀为4.95×10⁶个孢子/mL。而菌株M-G3、M-G4的累计死亡率分别为66.67%、71.11%;LT₅₀分别为4.89 d、3.97 d;LC₅₀分别为1.18×10⁸个孢子/mL、1.13×10⁷个孢子/mL。上述结果表明,相比其他两株菌,菌株Z-G2-5对粘虫的致病力更强,致死速度更快,具有较大的应用价值,可作为粘虫幼虫生物防治的候选菌株。     

枸杞根腐病的发生及防治研究

宁夏枸杞根腐病普遍发生。作者对其病原进行了分离鉴定,有4种病原菌:尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schlecht)、腐皮镰刀菌[F.solani(Mart,)Sacc]、同色镰刀菌(F.concolor Reinking)和串珠镰刀菌(F.moniliforme Sheldon)。其中尖孢镰刀菌致病力最强。对上述病原的生长温度、pH值作了室内测定。此病病原菌能随病株、病残体和病果种子越冬。枸杞不同品种对此病抗性有明显差异。田间积水和根部损伤利于发病。45％代森铵药液灌根对此病有良好的防治效果;培土垄作和中耕时不伤根的防治效果达74.4％。     

球孢白僵菌对两种植物病原镰孢的拮抗作用

体外测定了球孢白僵菌Beauveria bassiana对两种棉花病原镰孢——棉花枯萎病菌Fusarium oxysporium f.sp.vasinfecturn和棉花红腐病菌Fusarium verticillioides的拮抗作用。平板对峙培养时,两种镰孢的生长均受到明显抑制。不同含孢量的球孢白僵菌对两种镰孢的抑制效果不同,且抑制率与孢子浓度成显著的线性量效关系;在接种量为6×107孢子.mL-1时,对两种菌的抑制率均达到90%以上,对红腐病菌的抑制率稍高。白僵菌代谢液对两种植物病原菌也表现出抑菌作用,并且抑制率与代谢液浓度呈显著的线性量效关系。综上述,球孢白僵菌对两种镰孢拮抗作用的机制主要涉及营养和空间竞争以及抗生作用,其中抗生作用对拮抗作用的贡献更大。对抗生性代谢液的初步分析发现,醇沉后的上清液冻干粉经4种有机溶剂浸提后,无明显的抑菌作用;而向培养基中添加球孢白僵菌多糖和蛋白粗提物均能显著抑制两种镰孢菌的菌丝生长。因此,抑菌活性物质主要是大分子的多糖和蛋白。     

无壳葫芦根腐病病原菌的鉴定及生物学特性初步研究

近年来随着内蒙古无壳葫芦种植面积不断扩大,其病害也越来越严重,其中无壳葫芦根腐病是最普遍、最严重的一种病害。通过对无壳葫芦根腐病的病原菌进行分离、鉴定,确定该病原菌为茄镰孢(Fusarium solani)。本试验利用孢子悬滴法测量孢子萌发10 h后菌丝长度来研究病原菌的生物学特性,比较方便、省时、降低试验费用。该病菌在25℃条件下,菌丝生长速度最快,适应的pH范围较广,偏向于酸性;大型分生孢子萌发条件要求比较宽泛,小型分生孢子萌发条件要求较高,在PS培养液中萌发最好,土壤浸液能够促进分生孢子萌发以及菌丝生长;分生孢子的致死温度为60℃。     

Endophytic Beauveria bassiana activates expression of defence genes in grapevine and prevents infections by grapevine downy mildew Plasmopara viticola

Fungal entomopathogens like Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales) are known as antagonists of insects with multiple functional and ecological roles, and have attracted increased attention as biocontrol agents in integrated pest management programmes. For some crop plants, it has been proven that endophytic B. bassiana, besides its entomopathogenic habit, can provide protection against plant pathogens or limit their damaging effects. However, for grapevine, limited knowledge is available on the influence of endophytic B. bassiana on fungal pathogens and about the mechanisms underlying putative protection effects. This study assessed the protective potential of endophytic B. bassiana against grapevine downy mildew Plasmopara viticola in greenhouse experiments. Three and seven days after a B. bassiana treatment, potted grapevine plants were inoculated with P. viticola and the evolving disease severity was assessed. Disease severity was significantly reduced in B. bassiana-treated plants compared to control plants, depending on the age of leaves. Furthermore, a microarray and an RT-qPCR analysis were performed to work out fundamental aspects of genes involved in the interaction between grapevine and B. bassiana. The results indicate an up-regulation of diverse defence-related genes in grapevine as a response to endophytic establishment of B. bassiana. Thus, endophytic establishment of an entomopathogenic fungus such as B. bassiana in grapevine plants would represent an alternative and sustainable plant protection strategy, with the potential for reducing pesticide applications in viticulture.