自杀基因治疗鼻咽癌的研究现状

鼻咽癌是我国南方常见的恶性肿瘤,放射治疗是首选,但效果尚不理想。肿瘤自杀基因疗法是一种具有很大临床应用前景的治疗策略,应用于鼻咽癌治疗的研究才刚起步,本文就自杀基因治疗鼻咽癌的研究现状做一综述。     

慢病毒介导的靶向Vegfr2 shRNA干扰对血管内皮细胞生长的影响

为评价慢病毒介导的Vegfr2 shRNA干扰对内皮细胞中VEGFR2的沉默效应,及对血管内皮细胞生长的影响,构建靶向大鼠Vegfr2基因的shRNA干扰慢病毒载体,并感染血管内皮细胞。通过RT-PCR和Western blot检测Vegfr2的mRNA及蛋白表达水平,评价所建慢病毒载体对靶基因的干扰效率;通过BrdU增殖试验、划痕试验和基质胶-管形成试验,评价对血管内皮细胞生长、迁移的影响。结果表明:靶向Vegfr2基因的重组慢病毒,能显著抑制大鼠血管内皮细胞中Vegfr2的mRNA和蛋白表达,抑制率均达70%。对内皮细胞的增殖、迁移及管形成有极显著抑制作用。这一研究提示慢病毒介导的靶向RNA干扰能有效沉默血管内皮细胞中VEGFR2的表达,显著抑制内皮细胞的生长和体外管样结构的生成。     

鼻咽癌组织中WWOX基因和蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨WWOX基因和蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理特征关系.方法 收集52例鼻咽癌和25例正常鼻咽组织,采用实时荧光定量PCR和免疫组化染色分别检测WWOX mRNA、蛋白表达.结果 鼻咽癌组织中WWOX基因、蛋白表达显著低于正常鼻咽组织（P＜0.05）.癌组织中WWOX基因、蛋白表达与分化程度、TNM分期有关（P＜0.05）.结论 检测WWOX表达可能有助于鼻咽癌诊断及预后判断.     

肿瘤靶向递呈外源蛋白减毒沙门菌的构建与鉴定

利用沙门菌膜插入和分泌蛋白(MisL)能展示外源蛋白于细菌表面的能力,构建血管内皮生长因子受体单链抗体(scFv-KDR)的原核表达载体(pYA3332-misL-scFv-KDR),将scFv-KDR展示于减毒沙门菌表面,获得的KDR沙门菌(KDR-X4450)有助于沙门菌靶向肿瘤和肿瘤血管细胞;利用环氧合酶(COX-2)具有高度的肿瘤组织特异性,构建COX-2启动子介导的GFP真核表达载体(pGL3-basic-hCOX2-GFP)。将真核载体转化展示有scFv-KDR的KDR-X4550得到KDR-GFP沙门菌(KDR-GFP-X4550), KDR-GFP-X4550感染肿瘤细胞, COX-2启动子启动外源基因GFP的表达; SDS-PAGE检测scFv-KDR在沙门菌的表达,细菌计数KDR-X4550进入肿瘤细胞的数量;荧光显微镜观察COX-2启动子启动外源基因表达及KDR-GFP-X4550靶向递呈外源蛋白的能力。结果表明:scFv-KDR能展示在沙门菌表面,展示有KDR单链抗体的沙门菌比野生菌更容易进入肿瘤细胞;与正常细胞相比, COX-2启动子能在肿瘤细胞内启动GFP表达, KDR-GFP-X4550具有靶向递呈GFP的能力。这一研究为重组沙门菌进一步应用研究奠定了基础。     

VEGFR2低表达的CRL2830细胞体外模型的建立和生物学特性研究

采用3-D培养和shRNA技术首次建立了VEGFR2低表达的人源性多囊肾CRL2830细胞体外模型，进一步考察该基因表达抑制对多囊肾细胞生物学特性的影响.研究结果表明：与亲本细胞相比，VEGFR2表达抑制虽然不影响细胞生长速度和侵袭能力，但能引起细胞形态明显改变，细胞和细胞核的体积增大，细胞容易形成团状结构；3-D培养结果表明VEGFR2低表达能显著延缓囊肿的生长速度，有效诱导囊肿细胞早期凋亡.     

血管内皮生长因子C的研究进展

1989年,Gospodarowicz等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先提纯得到了一种具有强大促血管生成作用的细胞因子——血管内皮生长因子(VEGF)。至此,对VEGF的研究开始拉开帷幕并逐渐成为热点。随着分子生物学技术的发展,人们对VEGF的研究更加深入,发现了VEGF家族的新成员VEGF-、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E及胎盘生长因子(PIGF)。而其中血管内皮生长因子C(VEGF-C)又因其强大特异的淋巴管生成作用于近年来引起了人们的关注,国内外学者围绕VEGF-C及其与肿瘤的关系开展了大量的研究。下面就对VEGF-C在该领域的研究进展作一简要综述。     

血管内皮生长因子研究进展

血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)是一种由各种正常细胞或肿瘤细胞合成和分泌的糖蛋白。人类医学研究证明,VEGF有两种受体——KDR/FLK-1和FLT-1。VEGF与受体结合,具有促进血管内皮细胞的增生和提高微血管对大分子物质的通透性作用。人的VEGF 基因由8个外显子构成,主要有VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189和VEGF206等5个同型异构体。等电点的差异和肝素亲合力的差异可能是造成VEGF 生物活性差异的主要原因。     

原发性肝癌的自杀基因治疗

原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一,传统的治疗方法主要是手术切除,放射治疗和化学药物治疗。这些疗法对早期肝癌可获得较满意的疗效,但对晚期肝癌伴有局部扩散和远处转移者,疗效往往较差。分子生物学的发展使基因治疗成为可能。肝癌基因治疗策略主要包括:①免疫基因治疗,又称细胞因子基因治疗,通过转导细胞因子基因,增强机体抗肿瘤免疫能力;②自杀基因治疗,使肝癌细胞产生对某些药物前体的特异敏感性而被杀灭;③基因置换或补充,置换突变的基因或补充缺失的抑癌基因;④反义核苷酸技术,用于抑制癌基因的表达。其中自杀基因治疗是近年来研究的一个热点,本文对近年来肝癌的自杀基因治疗研究情况作一综述。1自杀基因治疗系统自杀基因是指存在于细菌、病毒和真菌中的一类基因,其编码的酶能活化一些抗感染药物前体,从而产生细胞毒作用。由于这类酶并不存在于哺乳动物中,因此,前体药物对哺乳动物细胞通常是低毒或无毒的。肿瘤的自杀基因治疗策略就是将这类基因用基因工程技术构建在一定的表达载体上并导入肿瘤细胞中,利用其在特定条件下高效表达的酶将无毒性的药物前体转化为细胞毒性药物,从而达到杀伤肿瘤细胞的治疗目的[1]。自杀基因治疗系统种类较多,主要包括单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激...     

血管内皮生长因子对缺血性脑血管病血管生成的作用研究

血管内皮生长因子是血管特异性生长因子,有促进内皮细胞增生、转移,增加血管通透性和促进血管生成的作用.阐述了血管内皮生长因子的生物学特性和功能,以及血管内皮生长因子与缺血性脑血管病的关系.     

肿瘤血管生成抑制因子Arresten基因克隆及其对烟草的转化

肿瘤血管生成抑制因子Arresten是人Ⅳ型胶原蛋白α1链羧基末端NC1结构域多肽片段,可抑制新血管生成。研究拟实现该基因对烟草细胞的转化,为进一步利用植物细胞表达该蛋白奠定基础。①采用RT-PCR法从人胎盘组织克隆Arresten基因cDNA,克隆产物经酶切后定向插入到植物双元表达载体pCAMBIA1301的NcoⅠ和BstEⅡ位点之间,构建成含有目的基因的植物表达载体pCA,经PCR、限制性内切酶检测及序列测定正确后,转化根癌农杆菌LBA4404,获得携带目的基因的重组农杆菌。②采用叶盘转化法,以重组农杆菌转化烟草。在hygromy cin选择压力下获得烟草转化不定芽和完整植株,经PCR检测初步证实,Arresten基因已导入烟草基因组中。该研究首次将Arresten基因导入高等植物基因组中,为避免利用原核细胞或动物细胞表达Arresten的潜在问题,以及进一步利用植物进行该基因的大规模廉价表达奠定了基础。     

bcl-x基因在两株鼻咽癌细胞中的转录和表达

目的：研究细胞凋亡相关基因bcl-x在人鼻咽癌高分化上皮细胞株CNE-1和低分化上皮细胞株CNE-2Z中的转录和表达。方法：分别抽提两种细胞的总RNA，通过逆转录PCR(RT-PCR)检测bcl-x基因的转录；同时制备两种细胞的蛋白质样品。经免疫印迹检测bcl-x基因的表达。结果：在两株鼻咽癌细胞中均检测到bcl-xL的转录和表达。但没有bcl-xs的表达。结论：bcl-xL在人鼻咽癌高、低分化上皮细胞株中均有表达。但表达量没有明显差异提示其表达可能与细胞分化程度无关。     

湖南地区汉族人群mir-499基因多态性与鼻咽癌发生发展的关联性研究

目的研究mir-499(rs3746444)位点多态性与鼻咽癌发病风险及临床病理因素的关系。方法采用病例-对照研究方法,用PCR-RFLP检测152例湖南地区汉族鼻咽癌患者(病例组)及性别、年龄匹配的197例正常人(对照组)mir-499(rs3746444)多态性分布,分析其与鼻咽癌风险及临床病理因素的关系。结果 mir-499基因多态性位点rs3746444的基因型和等位基因分布在病例组和对照组中差异无统计学意义(P>0.05)。T3、T4期鼻咽癌患者携带CC基因型的比例低于T1、T2期患者(P=0.027)。结论 mir-499基因多态性与湖南地区汉族人鼻咽癌的疾病发生无关,与鼻咽癌的疾病进展有关。     

鼻咽癌高淋巴道转移裸鼠移植瘤的细胞遗传学研究

研究鼻咽癌克隆株ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５高淋巴道转移裸鼠移植瘤离体培养细胞的细胞遗传学改变并探讨这种改变与肿瘤生物学特性之间的关系。方法染色体Ｇ显带后按人类细胞遗传学国际命名体制进行核型分析。     

鼻咽癌放疗患者恶性肿瘤特异性生长因子含量的动态观察

目的 :探讨血清恶性肿瘤特异性生长因子 (TSGF)含量对鼻咽癌放疗的监测作用。方法 :用 TSGF诊断试剂盒检测 ,对 34例鼻咽癌患者血清 TSGF放疗前后的含量作了动态观察。结果 :鼻咽癌患者血清 TSGF含量为 (86 .6 6± 9.72 ) U/ m L,与正常人差异有显著性 (P<0 .0 0 1) ,且 TSGF含量随病情的发展而显著增高 (P<0 .0 5 )。放疗后血清 TSGF水平明显下降 ,于第 8周降至正常水平。结论 :血清 TSGF水平检测可作为鼻咽癌病情变化、进展的一个监测指标。     

异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的影响

目的 观察异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的抑制作用.方法 采用不同质量浓度(10、20、40、80 mg/L)异鼠李素处理CNE-2细胞,分别用MTT法、台盼蓝染色、平皿培养和倒置显微镜观察细胞生长抑制率、细胞活力、集落形成、形态变化.结果 异鼠李素组的CNE-2细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05),且抑制作用呈...     

3种耳后野放疗方案治疗鼻咽癌的疗效比较

目的：比较3种不同的耳后野照射方案治疗鼻咽癌的疗效。方法：90例茎突后间隙受犯的鼻咽癌初治患者，第l段放疗采用面颈联合野放疗，第2段放疗采用耳前野加耳后野放疗。按第2段放疗耳后野不同照射时间、分次剂量随机分为3组：常规剂量组(n＝30)、低剂量组(n＝31)和后加量组(n＝29)。常规剂量组耳后野剂量为每次2Gy，与耳前野相隔6h后照射；低剂量组耳后野剂量为每次lGy，与耳前野相隔6h后照射；后加量组为耳前野照射结束后耳后野照射，每次剂量为2Gy；3组耳后野放疗剂量为10--20Gy，放疗总剂量为肿瘤量(DT)68—80Gy。结果：常规剂量组、低剂量组和后加量治疗3个月后完全缓解率(CR)分别为83．3％、90．3％和82．8％，差异无显著性(P＞0．05)；而中耳炎发生字分别为71．9％、47．4％和44．4％．Ⅲ-Ⅳ级口腔粘腰反应发生率分别为53．3％、28．8％和17．2％，常规剂量组与低剂量组或后加量组比较，差异均有显著性(P值均为＜0．05)、但低剂量组与后加量组比较差异无显著性(P＞0．05)。结论：耳后野低剂量或后加量放射治疗方案的疗效稳定且毒副反应较低。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂系统在鼻咽癌细胞系及其两个克隆株中的表达和意义

目的：研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)系统3种主要成分(uPA、uPAR、PAI—1)在一鼻咽癌细胞系(CEN—2Z)及其它的两个克隆株(CNE—2Z—H5、CNE—2Z—H5—9)中的作用。方法：应用逆转录聚合酶反应(RT—PCR)方法检测uPA系统各因子在基因转录水平的表达。结果：uPA，uPARmRNA在CNE—2Z—H5—9中表达最高，在CNE—2Z中表达最低；PAI—1mRNA在CNE—2Z—H5—9中无表达，在CNE—2Z，CNE—2Z—H5有表达，但差异无显若性。结论：uPA、uPAR可能促进鼻咽癌细胞侵袭、转移，PAI—1可能起抑制作用。     

人低分化鼻咽癌裸鼠移植瘤的微血管构筑

目的：观察人低分化鼻咽癌裸鼠移植瘤的微血管形态。方法：将人低分化鼻咽癌细胞单克隆株（ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５）接种于裸鼠皮下,然后对荷瘤鼠进行ＡＢＳ血管灌注,扫描电观察;移植瘤组织用因子Ⅶ相关抗原免疫组化（Ｓ－Ｐ）方法观察血管形态。结果：（１）肿瘤微血和构筑表现为外形不规则,窦状,囊腔状血管形成,血管分级不明显;（２）血管壁薄,血管腔数量少,管壁仅有一层内皮细胞,缺乏平滑肌,基底膜薄或缺如,内皮细胞间联     

川芎嗪逆转人鼻咽癌顺铂耐药细胞系多药耐药性的实验研究

目的探讨川芎嗪（TMP）对人鼻咽癌顺铂（DDP）耐药细胞系（CNE2/DDP）多药耐药性的逆转作用。方法 TMP处理CNE2/DDP细胞后,分别用MTT法、流式细胞术、RT-PCR检测其对DDP耐药性的逆转作用、细胞凋亡和bcl-2mRNA表达的影响。结果 50、100mg/LTMP处理后,CNE2/DDP细胞对DDP耐药性的相对逆转率分别为57.50%、85.72%,差异有统计学意义（P〈0.01）。与对照组比较,50mg/LTMP处理可使CNE2/DDP细胞凋亡率明显增高（P〈0.01）,而bcl-2mRNA表达明显降低（P〈0.05）。结论 TMP可部分逆转CNE2/DDP细胞对DDP的耐药性。TMP可增强DDP对CNE2/DDP细胞的促凋亡作用,下调bcl-2mRNA表达。