CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在血液系统疾病中的研究进展

CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Foxp3＋regulatory Tcell,Tregs）是能抑制自身免疫T细胞活化的T细胞亚群,具有免疫无能和免疫抑制两大特征。Tregs的数量和功能在移植排斥反应、多种自身免疫性疾病的发生及肿瘤免疫逃逸中发挥着重要作用,它与血液系统疾病的发生发展密切相关,对预后判断及指导治疗具有一定的意义。本文就Tregs的来源、功能及其与血液系统疾病的关系作一综述。     

人CD8~+T细胞基因调控网络研究

为研究CD8~+ T细胞的功能异常机制,对功能异常状态CD8~+ T细胞和3种正常CD8~+ T细胞亚型[中央记忆CD8~+ T细胞(HCM)、效应记忆CD8~+ T细胞(HEM)和na?ve CD8~+ T细胞(HW)]的ATAC-seq(Assay for transposase accessible chromatin with high-throughput sequencing)数据进行基因调控网络比较,结果表明,3种正常CD8~+ T细胞特异表达的基因参与维持相应T细胞正常功能的信号通路,功能异常CD8~+ T细胞特异的基因参与癌症相关通路。转录因子调控网络比较分析发现功能异常CD8~+ T细胞GMEB2转录因子表达关闭。细胞表面受体调控网络比较分析发现功能异常CD8~+ T细胞CD7和P4HB受体的表达关闭。采用基因调控网络的数据进行比较分析,发现CD8~+ T细胞功能异常机制可能与GMEB2转录因子、CD7和P4HB受体表达关闭有关,这为抗病育种寻找特定基因提供新思路。     

抗原浓度和DC数量对OT-I小鼠CD8+ T细胞分化与增殖的影响

【目的】探讨细胞毒性T细胞(CTL)表位肽SIINFEKL浓度和树突状细胞(DC)数量对CD8+T细胞活化和增殖的影响。【方法】用小鼠重组粒细胞集落刺激性生物因子(GM-CSF)和IL-4诱导骨髓细胞来源的DC增殖和分化,将所得成熟树突状细胞(maDC)和SIINFEKL抗原肽,与免疫磁珠法分离的OT-I小鼠CD8+T细胞共培养。用不同质量浓度的SIINFEKL(100,10,1,0.1,0.01和0.001 ng/mL)或不同数量的DC(DC/T比例分别为1/20和1/5)与CD8+T细胞共培养,刺激CD8+T细胞增殖分化。于共培养不同时间收集细胞,流式细胞术测定CD8+T细胞的数量、分裂速度、细胞表面活化分子的表达丰度,碘化丙叮(PI)染色测定细胞活力。【结果】在任一DC/T比例下,SIINFEKL浓度过低,均不能引起CD8+T细胞的充分增殖,而高于CD8+T细胞最佳增殖浓度的SIINFEKL则导致CD8+T细胞数量减少;在SIINFEKL质量浓度为0.001~0.1 ng/mL时,增加DC数量能促进CD8+T细胞的扩增;而SIINFEKL质量浓度为1~100 ng/mL时,提高DC数量反而导致CD8+T细胞数量减少;高浓度抗原和DC数量能有效诱导CD8+T细胞的活化和分裂增殖,但过量刺激会使细胞死亡,导致CD8+T细胞数量减少。【结论】CD8+T细胞的增殖受DC数量和抗原肽浓度的共同调节,要获得持久有效的CD8+T细胞免疫,必须保证CD8+T细胞得到足够的抗原信号,同时避免抗原信号过强导致的细胞活化后死亡。     

蒲公英多糖对雏鸡外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的影响

为研究蒲公英多糖对雏鸡免疫功能的调节作用机制,采用流式细胞技术检测了健康雏鸡、环磷酰胺处理雏鸡在服用蒲公英多糖[剂量80 mg/(kg·d)]和不服用蒲公英多糖情况下,外周血CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴细胞数量的动态变化.结果发现蒲公英多糖能显著提高健康雏鸡外周血CD4<'+>T淋巴细胞数量(P<0.05),但对CD8<'+>T淋巴细胞数量及CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴细胞比值作用不显著(P>0.05);能够提高环磷酰胺诱导免疫抑制雏鸡外周血中CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴细胞数量(P<0.05),且对环磷酰胺诱导免疫抑制雏鸡外周血中CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴细胞比值降低效果显著(P<0.05).本研究表明蒲公英多糖通过上调雏鸡血液中CD4<'+>T淋巴细胞水平,增强机体对抗原的免疫应答反应,从而增加机体免疫抵抗力,促进动物的生长和发育.     

小鼠黑色素瘤功能异常CD8~+T细胞基因调控网络构建与分析

疾病是全球范围内危害畜禽健康的主要问题,解析免疫系统调控相关基因成为当前抗病分子育种的研究热点。为研究小鼠黑色素瘤模型功能异常CD8~+T细胞对免疫抗体处理的应答机制,通过基因调控网络方法筛选功能异常CD8~+T细胞在Ig G和PD1抗体处理的特定基因、转录因子和细胞表面受体。结果发现对照组、PD1抗体与Ig G抗体处理组分别有28、17、33个特定表达基因。与对照组相比,Ig G和PD1处理组有2个转录因子Zfx、Zfhx3关闭表达,PD1处理组细胞表面受体Raet1b表达。Raet1b基因的表达可能使小鼠黑色素瘤功能异常CD8~+T细胞恢复功能,结果为抗病育种的相关基因研究提供理论基础。     

轮状病毒肠炎患儿外周血CD4+CD29+T细胞表达及其与治疗关系

目的 了解轮状病毒(RV)肠炎患儿外周血CD4+CD29+T细胞表达及其与治疗关系.方法 69例RV肠炎患儿分为观察组及对照组,分别给予抗RV免疫球蛋白及常规抗病毒治疗;比较两组患儿治疗前后外周血CD4+CD29+T细胞、IL-2、IL-12水平变化,粪便内RV-RNA含量及腹泻天数差异.结果 观察组治疗后CD4+CD29+T细胞、IL-2及粪便内RV-RNA水平均显著低于治疗前及对照组(P＜0.01),而IL-12水平显著增高(P＜0.01).观察组腹泻天数明显少于对照组(P＜0.01).RV肠炎患儿粪便内RV-RNA、腹泻天数与外周血CD4+CD29+T细胞、IL-2水平呈正相关(P＜0.01或0.05),而与IL-12呈负相关(P＜0.05).结论 外周血CD4+CD29+T细胞、IL-2水平升高及IL-12水平降低是RV肠炎的细胞免疫特征,且与病毒数量及腹泻程度明显相关.     

子宫内膜异位症不孕患者手术前后CD4+CD29+T细胞变化与妊娠率的关系

目的 了解子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)不孕患者手术前后CD4+CD29+T细胞变化及其与妊娠率的关系.方法 收集具有手术指征的EMS致不孕患者36例(手术组),无手术指征EMS患者38例(非手术组),同时选取38例健康女性作对照(健康组).观察EMS患者治疗前后外周血CD4+CD29+T细胞及其细胞因子白介素1(IL-1)、白介素4(IL-4)及CA125水平的变化,并将其与妊娠率进行相关性分析.结果 EMS不孕患者CD4+CD29+T细胞、IL-1、IL-4及CA125水平均显著高于健康女性(P＜0.01).治疗后,手术组和非手术组的CD4+CD29+T细胞、IL-1及CA125水平均显著低于治疗前,且手术组明显低于非手术组(P＜0.01);手术组的妊娠率明显高于非手术组(P＜0.05).CD4+CD29+T细胞、IL-1及IL-4与CA125均呈显著正相关,而与妊娠率呈显著负相关(P＜0.05或0.01).结论 CD4+CD29+T细胞升高是EMS不孕患者的重要免疫学表现,手术可显著降低该细胞及其细胞因子水平,提高妊娠率.     

杨树皮类脂对感染鸡传染性贫血病毒鸡外周血T细胞亚群含量的影响

[目的]从细胞免疫学角度探讨杨树皮类脂(PBL)对改善感染鸡传染性贫血病毒(CIAV)鸡的免疫器官的细胞免疫水平的影响。[方法]以人工感染与未感染CIAV的1日龄SPF鸡作为试验模型,分别连续饲喂PBL 7 d,在第7、27、47天采用流式细胞术检测外周血中CD4+和CD8+的含量,并计算CD4+/CD8+。[结果]PBL能够增加健康SPF雏鸡外周血的CD4+T淋巴细胞的数量,提高非特异性细胞免疫功能和体液免疫功能。[结论]杨树皮类脂对CIAV诱导的免疫抑制雏鸡外周血的CD4+和CD8+T细胞水平的降低具有一定抑制作用。     

猪圆环病毒2型感染猪肠上皮细胞对CD4+T细胞分化关键分子mRNA的影响

[目的]探讨猪圆环病毒2型感染的猪肠上皮细胞对CD4+T细胞分化关键分子mRNA的影响.[方法]利用免疫磁珠法分离猪外周血CD4+T细胞,与猪圆环病毒2型感染48 h的猪肠上皮细胞共培养,收集共培养后72 h的T细胞,荧光定量PCR检测CD4+T细胞分化关键分子变化.[结果]荧光定量PCR检测显示,细胞因子 IL-4、IL-17A、IFN-γ、TGF-β1 与转录因子 T-bet、GATA3、RORγt、Foxp3的 mRNA 水平均被显著下调,而IL-10的mRNA水平被显著上调.[结论]感染猪圆环病毒2型猪肠上皮细胞抑制CD4+T细胞分化关键分子mRNA水平,提示CD4+T细胞向Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞、调节性T细胞分化被抑制,而IL-10的上调激活CD4+T细胞向高分泌IL-10的CD4+T细胞分化.     

c-Jun蛋白对A型流感病毒H1N1感染小鼠体内CD4~+和CD8~+T细胞增殖的调节作用

通过构建A型流感病毒H1N1感染小鼠模型,并使用c-Jun蛋白的特异性核酶Dz13抑制该蛋白的表达,探索c-Jun蛋白在流感病毒感染后对T淋巴细胞增殖和炎性反应的调节作用。蛋白质印迹法(Western-blotting)结果表明,核酶Dz13作用后c-Jun蛋白的表达量明显降低,且c-Jun蛋白的活化也随之降低。此外,用流式细胞术测定感染后3 d和6 d外周血内辅助性T细胞(CD4~+T)和杀伤性T细胞(CD8~+T)的增殖情况,同时用实时荧光定量聚合酶链式反应测定外周血内细胞因子IFN-γ、IL-6和IL-10表达。结果显示:小鼠感染病毒后,外周血CD4+和CD8+T细胞明显增多,相关细胞因子的表达量也明显上调;而抑制c-Jun蛋白表达后,CD4~+和CD8~+T细胞的增殖受到抑制,且相关细胞因子IFN-γ、IL-6和IL-10的表达量亦受到抑制。说明c-Jun蛋白参与调节A型流感病毒H1N1感染后引起的T淋巴细胞增殖和相关细胞因子的表达。     

SLE患者CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3基因表达的研究

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD 4 CD 25 调节性T细胞及Foxp3基因的表达水平,了解它们在SLE发病机制中的作用。方法:分别收集25例SLE患者(SLE组)及健康人(对照组)外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。PE标记抗CD 4单抗,F ITC标记的抗CD 25单抗,作双色流式细胞术,分析SLE患者外周血CD 4 CD 25 调节性T细胞百分率,RT-PCR检测T细胞Foxp3 mRNA表达。结果:SLE组外周血CD 4 T、CD 4 CD 25 T细胞百分率及T细胞Foxp3 mRNA水平均低于对照组(P<0.01),并且CD 4 CD 25 T细胞百分率与Foxp3mRNA水平呈依赖关系(P<0.01)。结论:SLE患者外周血存在细胞免疫功能失调,CD 4 CD 25 调节性T细胞数量减少和Foxp3mRNA表达下调可能与SLE的免疫学发病机制有关。     

马齿苋多糖对雏鸡胸腺免疫功能的影响及其机制

为了观察马齿苋多糖(Portulace oleracea polysaccharide,POP)对雏鸡胸腺免疫功能的影响,并探讨其可能的作用机制,试验通过对雏鸡灌注不同剂量的POP,测定雏鸡胸腺指数,应用MMT(四甲基偶氮唑盐比色法)方法测定雏鸡胸腺淋巴细胞转化率,利用流式细胞器测定雏鸡胸腺淋巴细胞周期与胸腺T淋巴细胞亚群的变化.结果表明,POP能显著增加雏鸡胸腺淋巴细胞转化率和胸腺指数(P＜0.05),淋巴细胞增殖指数显著提高(P＜0.05),CD4+T淋巴细胞含量显著增加(P＜0.05),CD8+T淋巴细胞数量变化不明显,CD4+/CD8+T淋巴细胞比值显著升高(P＜0.05).POP可通过调节雏鸡胸腺内细胞水平的变化,增强雏鸡细胞免疫功能,促进免疫系统发育.     

AA肉鸡生长过程中血液CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化规律

为了进一步了解AA肉鸡血液T淋巴细胞及其CD4 、CD8 亚群所占比例的变化规律及对免疫系统中的重要作用,使用流式细胞仪对1、3、5、7、14、21、28、35、42、的日龄AA肉鸡血液CD3 T淋巴细胞和CD4 、CD8 T细胞亚群比例进行检测.结果表明,1～5日龄CD3 T淋巴细胞含量逐渐升高,7日龄突然下降,14～21日龄急速升高,并达到最高峰后急速下降至28日龄,35～49日龄时相对趋于平稳状态;CD4 T细胞含量1～3日龄明显低于其余日龄,3～5日龄急速上升,7～14日龄增加缓慢,21日龄时达到最高峰后急速下降至28日龄,35～49日龄时基本趋于平稳状态;CD8 T细胞含量1～5日龄缓慢上升,5～7日龄急速下降后,再急速上升到14日龄,14～28日龄再下降,此后直至49日龄均在此水平上处于平稳状态.CD4 /CD8 比例:1～7日龄缓慢增加,7～14日龄比例急速下降至最低,14～21日龄时比例增加到最高峰后急速下降至28日龄,但比例数值高于前1～7日龄,28～49日龄比例趋于平稳状态.表明AA雏鸡在1～7日龄时其免疫功能逐渐提高,14日龄时细胞免疫功能明显减弱,这可能与CD8 T淋巴细胞含量高有关,21日龄时机体细胞免疫水平达最高状态,在28日龄后肉鸡细胞免疫功能基本保持稳定状态,但仍需要加强饲养管理.     

抑制细胞毒性CD8+T细胞治疗白癜风研究进展

白癜风是一种色素脱失性皮肤病,易诊治难根治,致病机制可能涉及遗传、自身免疫、氧化应激、黑色素细胞破坏等方面,最终致病环节为细胞毒性CD8⁺T细胞异常增殖靶向损伤黑素细胞。综述了阻断细胞毒性CD8⁺T细胞应激损伤黑素细胞途径治疗白癜风研究进展。     

鸡CD4和CD8α基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建

用Trizol提取6周龄白莱航鸡胸腺组织的总RNA．再用Oligo—dT纤维素富集mRNA后，用RT—PCR分别扩增出鸡CD4和CD8α基因cDNA。PCR产物切胶回收后连入T载体，测序正确后再连入pcDNA3．1( )。将重组质粒pcDNA3．1-CD4和pcDNA3．1一CD8分别转染COS-7细胞，用已知的抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体检测到转染细胞中CD4和CD8α分子的表达，这说明构建的真核表达质粒正确，为下一步用DNA免疫方法研制抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体以及研究鸡CD4和CD8分子的结构和功能打下基础。     

人外周血CD4+ T细胞F-actin的超分辨SIM成像

通过合成lifeact序列,将其克隆到pEGFP-C1载体上,构建了pEGFP-C1-Lifeact质粒,转染原代CD4+T细胞,实现对CD4+T细胞F-actin的荧光标记,结合超分辨3D-SIM荧光成像技术,研究人外周血CD4+T细胞F-actin的精细结构,并对其动力学过程进行连续观察。结果表明,CD4+T细胞F-actin分布在细胞膜周围,处于解聚和聚合的动态平衡状态,与普通荧光显微镜相比,超分辩SIM成像F-actin结构更加清晰,分辨率提高2~4倍。     

小鼠骨髓源CD103+DC分离培养及LPS对其形态与功能特征的影响

旨在建立C57BL/6小鼠骨髓源CD103⁺树突状细胞(CD103⁺ dendritic cell,CD103⁺DC)分离培养方法,阐述LPS对其形态与功能特征的影响。在无菌条件下分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,并用重组GM-CSF和FLT3L对其进行体外联合诱导培养;利用光镜、扫描电镜、荧光显微镜和流式细胞术,分别对LPS作用前后细胞形态、表型及功能进行了分析。结果表明,细胞培养至第3天有零星集落出现,第13天后集落开始分散,可见典型的树突状突起,第15天后可得到大量的CD103⁺DC,加LPS刺激培养24 h后细胞表面树突样结构更加明显;分离培养的骨髓细胞能够表达表面分子CD103,其表达率达90%以上。RPMI-1640组(LPS未刺激组)可吞噬VOA的CD103⁺DC比例为25.70%,能够表达MHC-Ⅱ和CD83阳性细胞分别为41.31%和13.79%;LPS刺激组可吞噬VOA的CD103⁺DC比例为10.33%,能够表达MHC-Ⅱ和CD83的阳性细胞分别为68.10%和24.71%。MTT法检测结果显示,经LPS处理的CD103⁺DC刺激T细胞增殖的能力明显增强。综上所述,分离于C57BL/6小鼠的骨髓细胞,可在体外经FLT3L和GM-CSF共同诱导培养出CD103⁺DC,LPS可促进CD103⁺DC的成熟。     

重组鸡α-干扰素对鸡外周血T淋巴细胞亚类的影响

重组鸡α-干扰素(rChIFN-α)静脉注射4~6周龄SPF鸡,24 h后采血分离淋巴细胞,通过流式细胞术测定不同时间外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞的百分率。结果显示,rChIFN-α可以在48~72 h内明显提高CD4+T淋巴细胞的百分率,并下调CD8+T淋巴细胞的百分率,证明rChIFN-α具有显著的免疫调节作用。     

中医情志疗法对三阴性乳腺癌患者术后恢复期的生存质量的影响

目的 观察中医情志疗法对三阴性乳腺癌患者术后恢复期的生存质量的影响。方法 选择90例三阴性乳腺癌患者术后恢复期患者为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组,各45 例。所有患者均参照NCCN 指南进行乳腺癌基础治疗及常规护理干预,观察组联合应用中医情志疗法。观察治疗前后抑郁评分变化,采用乳腺癌患者生命质量测定量表( Functional Assessment of Cancer Therapy-Breast,FACT-B)评估两组生存质量,并通过T细胞亚群检测CD4+百分比、CD8+百分比、CD4+/CD8+的数值。结果 治疗后观察组CES－D 评分、HAMD－17评分明显低于对照组（P＜0.05）;情感状况、功能状况、附加关注、总量表等生活质量评分均明显低于对照组(P＜0.05);观察组CD4+百分比、CD4+/CD8+明显高于对照组,CD8+百分比明显低于对照（P＜0.05）。结论 中医情志疗法能有效缓解三阴性乳腺癌术后抑郁症状,改善免疫功能,提高患者整体生活质量。     

米糠多糖对不同免疫状态雏鸡外周血CD4^＋和CD8^＋ T淋巴细胞亚群的影响

为探讨米糠多糖对不同免疫状态雏鸡免疫功能的调节作用机理,采用流式细胞技术检测了健康雏鸡、环磷酰胺处理雏鸡和人工感染传染性法氏囊病毒雏鸡在服用米糠多糖（剂量150 mg/（kg.d））和不服用米糠多糖情况下,外周血CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群数量的动态变化。结果表明：米糠多糖能够提高健康雏鸡外周血CD4^＋T淋巴细胞比率,对CD8^＋T淋巴细胞作用不明显;能够提高环磷酰胺和传染性法氏囊病毒诱导免疫抑制雏鸡外周血中CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞数量。