无核葡萄与中国野生葡萄杂种的胚挽救技术研究

 通过无核葡萄与中国野生葡萄杂交, 获得了4个杂交组合的后代植株, 确定了各杂交组合取胚珠培养的最佳时期。1Flame ×山葡萄; 2红宝石×爱莫无核; 3红宝石×北醇; 4爱莫无核×山葡萄在授粉后45 d取样培养效果较佳; 5长穗无核白×山葡萄授粉后30 d; 6无核白自交在授粉后35 d培养效果较佳。以NitSchs为基本培养基, 附加0.5 mg·L ^{- 1} 6-BA + 0.5 mg·L^-1 GA₃ + 2.5 mg·L ^{- 1} IBA + 0.1 mg·L^-1ZT, 适合于1、3、5号杂交组合; 而0.5 mg·L^-1 6-BA + 0.5 mg·L^-1 GA₃ + 2.0 mg·L^-1 IBA + 0.1 mg·L^-1ZT适合2、4、6号杂交组合; 胚萌发培养基为2.0 mg·L^-1 IBA + 1.0 mg·L^-1 6-BA +0.2 mg·L^-1 GA₃ , 适合1、2、3、5、6号杂交组合, 而爱莫×山葡萄在1.5 mg·L ^{- 1} IBA + 1.0 mg·L^-1 6-BA + 0.2 mg·L^-1 GA₃培养基上表现较佳, 生根培养基为1 /2MS基本培养基添加0.15 mg·L^-1 IBA + 0.02 mg·L^-1 6-BA, 它适合1号与5号组合, 0.10 mg·L^-1 IBA + 0.02 mg·L^-1 6-BA适合4号与6号组合。     

食用仙人掌‘米邦塔’的试管快繁

 对食用仙人掌‘米邦塔’的试管快繁研究结果表明: 初代培养基以MS + 6-BA 0.6 mg·L^-1 +NAA 1.0 mg·L^-1 + 2 ,4-D 0.1 mg·L^-1为最佳处理, 接种60 d 后, 外植体上刺座下的潜伏芽萌发率可达67 %。继代增殖培养适宜培养基为MS + 6-BA 0.1 mg·L^-1 + NAA 1.0 mg·L^-1 + 2 ,4-D 0.2 mg·L^-1 或MS + 6-BA 0.1mg·L^-1 + NAA 0.5 mg·L^-1 , 平均每50 d 继代增殖培养1 次, 增殖倍数可达5～6 , 且新生的小子茎生长旺盛。在培养过程中, 虽然部分外植体切口处发生大团绿色至黄绿色小颗粒状愈伤组织, 然而均没有分化不定芽。在生根培养基MS + IAA 0.1 mg·L^-1 或MS + IBA 0.1 mg·L^-1 上, 2～3 cm 高的小子茎培养10 d 左右发根,形成完整植株。当试管苗高达5 cm时移入砂床, 成活率高达99 %, 经约60 d , 试管苗发出第一批掌片。     

大葱茎尖脱毒苗培养及增殖技术的研究

 章丘大葱茎尖外植体启动培养基以MS + NAA 0.1 mg·L^-1 + 2iP 0.4 mg·L^-1最佳, 诱导率为100 % , 生根壮苗最佳培养基为1/ 2 MS + NAA 0.01 mg·L^-1 + IBA 1.5 mg·L^-1, 生根率100 %。驯化移栽成活率100 %。分化培养基以MS + NAA 0.1 mg·L^-1 + 2iP 0.6 mg·L^-1最佳, 丛生率100 % , 平均分化苗数6.8 。根尖染色体观察, 遗传表现稳定。     

‘雪青’梨叶片高频再生体系的建立

 以‘雪青’梨叶片为外植体, MS为基本培养基, 培养温度(25 ±1) ℃, 光照强度2 000 lx,14 h /d, 继代周期30 d。在MS + 2,4-D 2 mg·L ^{- 1} + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1}培养基中, 外植体脱分化率达100% ,愈伤组织增殖倍数达12.05; 在MS + 6-BA 5 mg·L ^{- 1} + IAA 0.1 mg·L ^{- 1}中, 不定梢诱导率达100% , 在MS+ 6-BA 2 mg·L ^{- 1} + IAA 0.1 mg·L ^{- 1} +CH 100 mg·L ^{- 1}中, 1～6代不定梢平均繁殖系数达7; 在1 /2MS +IBA 2 mg·L ^{- 1} + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1} +AC 500 mg·L ^{- 1}中, 不定梢生根率达67.50%; 68株试管苗移栽到珍珠岩营养钵中, 30 d成活46株, 成活率为67.65 %。     

梨矮化中间砧S2 、S5 和PDR54的离体培养研究

 以梨矮化中间砧S2、S5和PDR54试管苗为试材, 探讨了培养基和植物生长调节剂对梨矮化中间砧试管苗增殖和生根的效应。其结果表明: MS培养基较QL、AS和WPM培养基更有利于中间砧茎的增殖, 2～3 mg·L ^{- 1} 6-BA、0.1～0.2 mg·L ^{- 1} IBA和1～2 mg·L ^{- 1} GA₃组合能有效促进S2、S5和PDR54试管苗的增殖, 其增殖倍数达3.71～5.83。综合各品种增殖倍数、茎高度以及茎质量等指标表明, MS + 3.0 mg·L ^-1 6-BA + 0.2 mg·L^-1 IBA + 2.0 mg·L^-1 GA₃是S2的最佳增殖培养基; MS + 2.0 mg·L^-1 6-BA + 0.1 mg·L^-1 IBA + 1.0 mg·L^-1 GA₃是S5和PDR54增殖的最佳培养基。同时, S2、S5和PDR54增殖的试管苗在不同的生根条件下分别获得了67%、50%和86%的生根率。     

核桃离体培养和植株再生

 以5个核桃品种(株系) 10年生植株的茎段为外植体, 进行了离体培养和植株再生的研究。结果表明, 附加2 g·L^-1聚乙烯吡咯烷酮的DKW + 6-BA 1.0 mg·L^-1 + IBA 0.01～0.10 mg·L ^-1是诱导茎段萌发最适宜的培养基, 5个品种(株系) 间的萌发率存在差异; DKW + 6-BA 110 mg·L^-1 + IBA 0.01mg·L^-1 + 蔗糖40 g·L^-1是最适宜的增殖培养基; 采用二步生根法最高生根率为41.67% , 生根试管苗移栽于草炭土∶河沙= 1 ∶1的基质中, 控制温度20～30 ℃, 保湿20 d, 期间遮荫, 40 d后成活率95%。     

葡萄器官离体再生和遗传转化体系的建立

以‘森田尼无核’为试材,研究了生长调节物质、外植体类型、抑菌素等主要因素对葡萄离体不定芽再生和转化效率的影响,建立和优化了葡萄的再生和转化体系。结果表明：相对于BA和KT,细胞分裂素TDZ无论单独使用还是与生长素配合使用均可使葡萄不定芽再生频率达到最高;在MS + TDZ 2.0 mg·L^-1 、MS + TDZ 4.0 mg·L^-1 或MS + TDZ 4.0 mg·L^-1 + IAA0.1 mg·L^-1培养基上均可以较好地诱导森田尼无核葡萄再生不定芽,再生频率分别为37.4%,40.2%和50.0%;叶盘、茎段和叶柄都可以诱导再生不定芽,在同一种培养上再生频率有差异,但差异不大;采用根癌农杆菌介导的叶盘法转化葡萄时,卡那霉素抗性筛选浓度为20 mg·L^-1;抑菌抗生素使用头胞霉素适宜浓度为400 mg·L^-1,而使用羧苄青霉素时以300 mg·L^-1最佳;获得转化芽45个,部分株系用PCR和Southern 杂交证实,外源基因已整合在葡萄基因组DNA上。     

同源四倍体青花菜离体再生及其倍性鉴定

以同源四倍体青花菜带柄子叶为外植体,研究其离体再生体系。结果表明： 10 d苗龄外植体在MS + 0.05 mg·L^-1 NAA + 3.0 mg·L^-1 6-BA+0.8% 琼脂 + 3% 蔗糖培养基上不定芽的再生频率最高为63.3％;继代培养(MS + 0.04 mg·L^-1 NAA + 4.0 mg·L^-1 6-BA + 0.8% 琼脂 + 3% 蔗糖)增殖系数为6,诱导(1/2MS + 0.1 mg·L^-1 NAA + 0.7% 琼脂 + 3% 蔗糖)生根率100％,移栽成活率90％。流式细胞技术分析及染色体计数鉴定结果表明,再生植株的DNA相对含量为二倍体的2 倍,染色体数为2n=4x=36。     

枣离体叶片高效再生植株的研究

 以‘黄骅冬枣’组培苗叶片为试材, 研究了叶片幼嫩程度、叶片来源、组培苗状态以及植物生长调节剂等对离体叶片诱导不定芽再生的影响, 并获得了完整的再生植株。结果表明, 以未生根组培苗中上部叶片再生效果较好; TDZ诱导叶片再生不定芽的效果显著优于BA; 离体叶片在MS + TDZ 1.0 mg·L ^{- 1} + IBA 0.1 mg·L ^{- 1}培养基中诱导培养28 d后, 转入MS + IBA 0.1 mg·L ^{- 1} + GA₃ 0.05 mg·L ^{- 1}培养基中二次培养, 叶片再生效果最好, 再生率可达92.45%。将叶片再生植株转入MS +BA 1.0 mg·L ^{- 1} + KT0.5 mg·L ^{- 1} + IBA 0.1 mg·L ^{- 1}培养基中继代增殖培养, 增殖系数达3.64。以1 /2MS + IAA 1.0 mg·L ^{- 1}培养基诱导生根, 生根率87.1%。生根苗大田移栽成活率达到57%。     

草本威灵仙的组织培养与快速繁殖

 用种子切段作外植体，建立了草本威灵仙的组织培养和再生体系。试验结果表明：草本威灵仙种子切段诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA 3 mg·L^-1 +NAA 0.3 mg·L^-1，诱导率达86.7％；附加6-BA 2 mg·L^-1+NAA 0．2 mg·L ^-1的Ms培养基有利于芽的分化和增殖，培养60 d左右，每个外植体分化形成的再生小植株数达到12～18个；在1/2 MS+IBA 0.5 mg·L^-1 的培养基中生根效果最好。移植时喷施营养液可以提高幼苗的成活率。     

牛皮杜鹃的组培快繁及种质试管保存技术

 以牛皮杜鹃休眠芽为外植体,筛选最适合萌发、再分化、生根和种质试管保存的培养基。结果表明最适合休眠芽萌发的培养基为：1/4 MS + GA3 1.5 mg·L^-1 + 维生素C 20 mg·L^-1 ;基部直接再分化培养基为：1/4 MS + 6-BA 4.0 mg·L^-1 + NAA 0.3 mg·L^-1 ;生根培养基为：MS + IBA 0.46 mg·L^-1 + 活性炭450 mg·L^-1 ;种质试管保存培养基为：1/6 MS（大量元素）+ 1/4 MS（微量元素）+ 1/2 MS（铁盐）+ 1/4 MS（有机物质）+ B9 3.5 mg·L^-1 。牛皮杜鹃组织培养的不同阶段需要不同的培养基,常温条件下,利用低营养矮化常温的方法在试管内保存种质资源。     

山杜英离体培养植株再生的研究

 研究了山杜英[Elaeocarpus sylvestris(Lour．)Poir．]带芽茎段的离体培养及植株再生。筛选出最佳培养基：(1)启动培养：Ms+BA 1.0～2.0 mg·L^-1 (单位下同)+NAA 0.05+蔗糖3%；(2)愈伤组织发生型丛生苗增殖培养：MS+BA 1.0+NAA 0.5+蔗糖3%；腋芽发生型丛生苗增殖培养：MS+BA2.0+IBA 0.1+蔗糖3%；(3)有效苗诱导培养：MS+BA 0.5+IBA 0.1+GA 1.0+蔗糖3%；(4)生根培养：1/2 MS+IBA 3.0+蔗糖2%。用透气膜封FI比用聚乙烯菌膜生根率明显提高，生根明显提前。     

单倍体甜瓜离体繁殖的方法

以单倍体甜瓜无菌苗的顶芽和腋芽为外植体进行离体繁殖研究。结果表明：单倍体甜瓜最佳增殖培养基为MS + 6-BA 0.5mg·L^-1,最适生根培养基为1/2MS + IBA 0.5mg·L^-1,增殖系数为3.57。染色体计数表明没有倍性变化发生。     

平欧杂交榛组织培养与快速繁殖技术研究

 以达维、金铃、玉坠、平顶黄、薄壳红等5个平欧杂交榛品种茎段和根蘖苗茎段为外植体,进行适宜基本培养基的筛选、不定芽的诱导和快速繁殖研究。结果表明：（1）分别以茎段、根蘖苗茎段为外植体进行初代培养,污染率为75%以上和20%以下,外植体存活率为15%以下和65%以上,增殖倍数为低于0.3和高于1.5;（2）在NRM、DKW、WPM、NN、MS等5种基本培养基中,NRM培养基最适宜平欧杂交榛品种试管苗的生长,其茎长和平均芽数高于其它培养基;（3）培养基NRM+5 mg·L^-1 6-BA+0.01 mg·L^-1 IBA+32.21 mg·L^-1 腐胺+29.05 mg·L^-1亚精胺+ 10.10 mg·L^-1精胺有利于外植体芽体的萌发与生长;（4）试管苗蘸1 g·L^-1IBA 20 s进行试管外扦插生根,15 d后生根率可达95%以上,移栽成活率在97%以上。     

芜菁高频率再生体系的建立及优化

以3个品种芜菁的带柄子叶和胚轴为外植体,采用苯基噻二唑基脲（thidiazuron,TDZ）配合NAA以及BA配合NAA两种组合研究了适于芜菁离体再生的外植体类型和激素组合。发现带柄子叶为外植体,TDZ 7.0 mg·L^-1 + NAA 1.0 mg·L^-1的组合对不定芽分化最为有利。以此离体再生体系为基础,针对AgNO3浓度、苗龄、2,4-D预培养时间3个因素进行优化,得到了芜菁高频率离体再生体系。结果表明：采用5 d苗龄的带柄子叶作为外植体,在含有2,4-D 1.0 mg·L^-1的MS培养基上预培养2 d,添加TDZ 7.0 mg·L^-1 + NAA 1.0 mg·L^-1 + AgNO3 5.0 mg·L^-1的MS培养基为分化培养基对芜菁离体再生最为有利。依品种不同,最高分化率可以达到90%左右。分化后得到的不定芽在IBA 0.1 mg·L^-1的MS培养基上可以100%生根,移植成活率达95%。     

根癌农杆菌介导Cry1Ac基因转化‘雪青’梨获得转基因植株

 以‘雪青’梨叶片愈伤组织为外植体, 经根癌农杆菌介导将CaMV35S启动子调控下的Cry1Ac基因导入‘雪青’梨。698块愈伤组织和231个Kan^r芽与携带表达载体质粒pBX203的根癌农杆菌菌株LBA4404共培养3 d后, 转入含50 mg·L^-1 Kan的筛选培养基培养30 d, 15 d转接1次。结果表明,在MS + 5 mg·L ^-1 6-BA + 0.1 mg·L^-1 IAA筛选培养基中, Kan^r芽率为34.24% , 在1/2MS + 2 mg·L^-1 IBA+ 0.5 mg·L^-1 6-BA + 500 mg·L^-1AC筛选培养基中, 15.58% Kan^r芽生根。共获得再生植株32株, 经PCR和Southern-blot分析证明, 其中4株的基因组已成功导入和整合Cry1Ac基因。