鸡胚大头开孔加抽泵清原壳体外培养的研究

试验以3日龄种鸡胚蛋为实验材料,通过在小头抽取不同量的蛋清和在大头顶端开3种直径分别为0.5、1.0、1.5 cm圆孔的方法对3日龄鸡胚原壳体外培养进行研究.结果表明:(1)抽取9 ml蛋清后,鸡胚的发育受到的影响最大,孵化率为33.3%,明显低于3 ml和6 ml组(P＜0.01);抽取3 ml和6 nd蛋清对3日龄鸡胚的影响较小(P＞0.05).孵化率分别为74.3%和76.5%.(2)在小头抽垠6 ml蛋清后再在大头顶端开直径分别为0.5、1.0、1.5 cm的圆孔,以开孔直径为0.5 cm孵化率最高,随着开孔直径增大,鸡胚的孵化率呈现极显著下降的趋势.     

鸡胚大头开孔原壳体外培养方法的建立

通过原壳体外培养和抽蛋清的方法,就胚龄、蛋清抽取量对鸡胚发育的影响进行了研究。结果表明:①0日龄鸡胚抽取1mL、3mL和6mL蛋清后,其孵化率分别为38.6%,30.35%和8.6%。抽取蛋清1mL组(P<0.01)和3mL组种蛋(P<0.05)的孵化率明显优于抽取6mL组。②对3日龄鸡胚,抽取9mL蛋清后,鸡胚的发育受到的影响最大,其孵化率仅为33.3%,明显低于3mL和6mL组(P<0.01);而抽取3mL和6mL蛋清对3日龄鸡胚的影响较小,其孵化率仍高达74.3%和76.5%。③抽取6mL蛋清并在大头顶端开直径为1.0cm的圆孔进行鸡胚原壳体外培养获得成功,3日龄鸡胚的孵化率为18.5%。     

蛋清抽取量和蛋壳钙质开孔对Ⅹ期鸡胚发育的影响

试验以Ⅹ期种蛋为实验材料,研究了蛋清抽取量和蛋壳钙质开口对Ⅹ期鸡胚体外发育的影响.试验结果表明:(1)在小头抽取1mL和3mL蛋清后,其孵化率分别为37.9％和50.0％,抽取1mL蛋清组的孵化率显著低于抽取3mL的蛋清组(P＜0.05).(2)Ⅹ期鸡胚大头顶端蛋壳钙质层开直径为0.5cm的圆孔后,孵化率仅为15.0％,较对照组(70.0％)明显下降(P＜0.01).从发育过程看,开口组鸡胚的死亡主要集中在孵化15d之后,而且死亡鸡胚主要表现为气室显著增大,胚体体积明显缩小,质地变硬.据此推测,开口组鸡胚的死亡可能主要是鸡胚在孵化过程中水分丧失所致.     

鸡胚血液中PGCs的分离及原代培养

在鸡胚孵化48,50,54,56,60h的不同时期，分离血液中原始生殖细胞（PGCs)，分离前的浓度分别为0.011%,0.007%,0.006%,0.006%,0.004%,0.001%,分离后的浓度分别为0.245,1.21%,1.02%,0.64%,0.27%,孵化48－54h，血液中PGCs浓度差异不显著，但孵化48h的鸡胚液较少，PGCs绝对量较低。孵化52－54h的鸡胚血液量较大，获取PGCs的绝对值较高，故分离PGCs的时间以孵化52－54h为宜，鸡胚血液中PGCs在未中任何外源生长因子而含10％FCS的TCM－199培养基中体外培养，能够存活3－4d。     

E.tenella鸡胚盲肠上皮细胞体外培养的影响因素

研究E.tenella子孢子的纯化方法、接种剂量以及细胞生长状态对E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞体外培养中的影响,为E.tenella鸡胚盲肠上皮细胞体外培养模型的建立提供依据。以子孢子回收率和细胞感染率为指标,对DE52纤维素层析法、蔗糖密度梯度离心法和双层目筛过滤法纯化子孢子的效果进行比较;测定了子孢子接种剂量和细胞生长状态对虫体感染率的影响,并对各发育阶段的虫体进行观察。结果表明,采用双层目筛过滤法可得到纯净的子孢子,并且回收率和接种细胞后24、48h的虫体感染率均显著(P0.05)和极显著(P0.01)高于DE52纤维素层析法和蔗糖密度梯度离心法;在48孔细胞培养板中,子孢子的最佳感染剂量为每孔10万个;鸡胚盲肠上皮细胞覆盖率为85%~90%且贴壁细胞融合率在30%以上时接种子孢子,各时间段虫体的入侵率较高,且可以观察到E.tenella主要发育阶段的虫体。本研究获得了能使E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞完成整个内生发育的子孢子纯化方法、接种剂量和细胞生长状态。     

泰和乌骨鸡鸡胚皮肤黑色素细胞的分离与培养

为探讨泰和乌骨鸡鸡胚皮肤黑色素细胞的分离、培养及鉴定方法,取20日龄的泰和乌骨鸡鸡胚的背部皮肤,通过不同的消化酶处理皮肤分离乌骨鸡黑色素细胞,细胞培养于改良型的α-MEM完全培养液中,对黑色素细胞进行形态学观察,并通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察黑色素细胞的生长情况,用多巴染色和抗S-100免疫细胞化学染色法对培养的细胞进行鉴定。结果表明,用Dispase+胰蛋白酶消化皮肤可获得较好的分离效果,倒置显微镜下观察细胞呈树突状。培养液中添加碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和霍乱霉素(CT)可协同促进黑色素细胞的生长。MTT结果显示细胞生长良好,多巴和抗S-100蛋白染色呈阳性。本试验成功从20日龄泰和乌骨鸡鸡胚背部皮肤中分离得到黑色素细胞,经形态学观察、多巴和免疫细胞化学染色鉴定为黑色素细胞。     

鸡胚盲肠上皮细胞原代培养与鉴定

为研究鸡E.tenella的宿主细胞--盲肠上皮细胞体外培养技术,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型,分别用胰蛋白酶法、胶原酶Ⅰ法、嗜热菌蛋白酶法、嗜热菌蛋白酶+胶原酶Ⅰ法和中性蛋白酶Ⅰ+胶原酶Ⅺ法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过测定细胞活力、细胞团块比例、总细胞产量和细胞团块产量,筛选出鸡胚盲肠上皮细胞最佳分离方法,并进行了纯化和培养,对培养细胞进行了鉴定.结果表明:嗜热菌蛋白酶消化、低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,为最佳分离和纯化盲肠上皮细胞的方法;分离纯化的细胞接种后分别于第3-5天、第10-11天进入对数生长期,可存活14 d以上;经形态学观察、碱性磷酸酶染色、扫描电镜鉴定为盲肠上皮细胞,所分离的细胞培养至第4、7、11天时上皮细胞比例分别为81.67%、84.33%和72.00%.用该法可获得纯度较高的原代鸡胚盲肠上皮细胞.     

新城疫鸡胚免疫的研究

本文应用鸡新城疫（ＮＤ）Ⅱ系和Ｖ４弱毒疫苗分别气室接种不同孵化日龄鸡胚,出雏后计算其孵化率并在不同日龄测定血清ＨＩ抗体效价,结果表明,ＮＤⅡ系和Ｖ４疫苗１∶１０稀释,于１８、１９胚龄气室接种,对孵化率无显著影响（Ｐ＞００５）,两种疫苗间也无明显差异（Ｐ＞００５）,均能产生良好的免疫保护力。     

苏禽黑羽青壳蛋鸡产蛋性能及蛋品质分析

本研究选取苏禽黑羽青壳蛋鸡母鸡250只,统计21～66周龄产蛋率,运用McMillan模型、杨宁模型、Wood模型拟合产蛋曲线;并在21、32、36、40、44、48、52、56、60及66周龄测定鸡蛋品质.结果表明,黑羽青壳蛋鸡21～66周龄平均产蛋率为54.6％,产蛋高峰接近80％;3种模型中杨宁模型对产蛋曲线拟合度最高(R2=0.916),较适合用于产蛋曲线拟合;鸡蛋品质达到A级水平;随着日龄增加,蛋重逐渐增大,而蛋白高度、蛋黄色泽、哈氏单位等指标也呈现一定的变化规律.     

鸡胚成纤维细胞原代培养及应用

原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方向。     

X期鸡胚原壳体外发育影响因素研究

试验以X期鸡胚为材料,研究了翻蛋时间、封口材料及封口胶对X期鸡胚体外发育的影响.试验结果表明:X期鸡胚抽取1 mL蛋清后,0 d(对照组)、0～3 d、3～6 d和6～9d不翻蛋组的出雏率分别为33.3%、24.2%、55.9%和23.5%,3～6 d不翻蛋组出雏率极显著高于对照组、0～3 d及6～9 d不翻蛋组(P<0.01);3种封口材料中,2种塑料片封口组明显优于蛋壳皿封口组(P<0.01),塑料输液瓶片封口组的出雏率为16.7%,雪碧饮料瓶片封口组的出雏率为9.5%,而蛋壳皿封口组的出雏率则为0.0%;4种封口胶中自制新胶的效果最好,出雏率高达53.3%;自制水洗胶、自制旧胶和AAA超能胶的出雏率则较低,分别为51.7%、45.0%和40.0%.自制新胶组的出雏率明显优于自制旧胶和AAA超能胶(P<0.05),而自制新胶与自制水洗胶之间以及自制旧胶与AAA超能胶之间出雏率则没有明显差异(P>0.05).     

用异源蛋白和蛋壳体外培养鹌鹑胚胎的研究

将50个鹌鹑胚胎在鸡蛋壳中用鸡稀蛋白培养,对种蛋产出体外阶段裸黄状态的鹌鹑胚胎进行培养的方法进行了探讨。1～2.5d、2.5～14d和15～17d胚胎培养温度分别是38.0℃、37.8℃和37.5℃,相对湿度分别是60%、55%和70%,1～14d每小时翻蛋1次,翻蛋角度1～2.5d为90°,2.5～14d为50°,15d后静止落盘。2.5d和15d胚胎存活率以及孵化率分别为92%、78%和28%。结果表明裸黄状态的鹌鹑胚胎不排斥鸡稀蛋白,用鸡稀蛋白培养鹌鹑胚胎可行。     

陕北土鸡蛋与芦花鸡蛋中蛋清蛋白质比较分析

采用醋酸纤维薄膜电泳的方法,用考马斯亮蓝G250(CBB G250)染色,对陕北土鸡蛋与芦花鸡蛋的蛋清蛋白进行电泳分析.结果表明,陕北土鸡蛋蛋清与芦花鸡蛋蛋清中都含有7种蛋白质,它们的种类相同,但其相对含量稍有差异,从蛋白质组成及含量比较,两种鸡蛋的营养价值无大的差异.     

白牦牛早期胚胎发育条件的初步研究

研究了卵母细胞质量和体外受精卵培养温度对白牦牛早期胚胎发育的影响。结果表明:白牦牛体外受精时要选择A级质量的卵母细胞,体外受精胚胎发育的最适温度为38℃。为完善白牦牛胚胎的体外生产体系提供了实验依据。     

鸭蛋壳与鸡蛋壳超微结构比较研究

电镜扫描显示,鸭蛋壳和鸡蛋壳由内向外均可分为壳膜层、锥体层、柱状层、晶体层和表层。鸭蛋壳与鸡蛋壳厚度分别为340μm、280μm。鸭蛋壳各层分别占总厚度的101%、176%、655%、47%和21%。鸡蛋壳各层则分别占102%、20%、64%、43%和15%。鸭蛋壳表面裂纹更粗、更深、更长,其气孔也更大、更深。鸭蛋壳膜纤维较粗、较长,交织较为均匀紧密,而鸡蛋壳膜纤维更为细短且呈放射状。两种蛋壳锥体层和柱状层的微观结构也存在较大差异。