松材线虫及其近缘种热激蛋白90基因(hsp90)克隆与序列分析

热激蛋白90家族(heat shock protein 90(HSP)family)是一种进化保守的蛋白质,在分子伴侣功能、细胞循环调控、抗原传递方面发挥着重要作用。本研究用RT-PCR和RACE技术,克隆得到了松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)、拟松材线虫(Bursaphelenchus mucronatus)和豆伞滑刃线虫(Bursaphelenchus doui)热激蛋白90基因的cDNA全长序列,分别命名为Bx-hsp90、Bm-hsp90和Bd-hsp90,(GenBank登录号分别为:GU013561、HMO34943和HM347331),其cDNA全长分别为2255、2193和2232bp,开放阅读框均为2127bp,编码708个氨基酸,5'端非编码区的长度分别为33、13和13bp,3'端非编码区的长度分别为95、53和92bp。其DNA全长分别为2440、2388和2407bp,包含3个内含子。三者氨基酸序列的一致性为98.78%。进化分析表明,松材线虫、拟松材线虫、豆伞滑刃线虫与秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)的亲缘关系较近,推测三...     

松材线虫单克隆抗体的研制

利用松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)匀浆液免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得一株能稳定传代并分泌抗松材线虫单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为1D3，经ELISA检测其特异性好、效价达到1∶5.12×105，抗体类型为IgG1亚类。Western blot 分析表明，1D3 单克隆抗体株与松材线虫匀浆液有明显反应。单克隆抗体的制备成功为准确地鉴定松材线虫提供了一种快速、灵敏和有效的诊断方法。     

松材线虫入侵后马尾松根际土壤性质相关分析

通过松材线虫入侵林地内马尾松根际(rhizophere)土壤物理性质、化学性质及林地地形因子调查,利用典型性相关分析法分析土壤性质各因子和地形因子之间的相关性.发现速效K含量与海拔,速效磷含量与坡向、破位以及有机质与坡度之间呈现强相关性;土壤质地与海拔,枯落物厚度与坡向,含水量与坡度等之间表现出强相关性.另外通过对松材线虫入侵林地内松树根际和非根际土壤含水量显著性检验,发现根际和非根际之间土壤含水量无显著性差异.     

松材线虫入侵林地土壤因子相关性分析

松材线虫是松树的毁灭性病害,松树占我国森林资源的1/4,松林的存亡直接关乎林业的兴衰。本研究以松材线虫入侵林地内的土壤因子为主要研究对象,意图通过对得到的土壤样品理化性质的分析,探究受到该病害入侵的不同生态系统中土壤因子的差异性。结果表明,在研究受松材线虫病入侵的生态系统的土壤因子时,P含量、全N量和有机质含量这三个指标是非常重要的。     

松材线虫重度危害区水土保持植被恢复技术与推广

为了探索松材线虫重度危害区水土保持植被恢复重建技术,在江西省兴国县塘背水土保持科技示范园开展了试验研究,采取竹节水平沟整地改良土壤结构、施放发酵生物有机肥料增加土壤微生物活性、乔灌草混播混种快速恢复植被等技术,经过土壤改良、植物调节、微生物净化等综合作用,有效改善林地生态结构,加强了抵御疫情能力,提高了生态、经济效益,使松材线虫带来的危害得到了有效控制。研究成果还在兴国县永丰镇焦溪村、荷岭村巩固拓展脱贫攻坚成果衔接推进乡村振兴(水保)项目中得到了推广应用。     

基于rDNA的PCR-RFLP及序列分析对四种螺旋线虫的分子鉴定

利用rDNA ITS-PCR-RFLP及序列分析等技术对来自国内浙江、山西、山东以及德国等地6个不同螺旋线虫地理群体进行了分类和鉴定.结合形态学特征分别鉴定为小头螺旋线虫(Helicotylenchus microcephalus)、双角螺旋线虫(H.digonicus)、双宫螺旋线虫(H.dihystera)和翅尾铗螺旋线虫(H.pteracerus).其中3个不同地理群体的双角螺旋线虫PCR产物片段长度和限制性内切酶酶切图谱相同,其余3个种的PCR产物长度稍大,4个螺旋线虫种的酶切图谱各不相同.选用的6种限制性内切酶(Alu Ⅰ、Ava Ⅰ、HaeⅢ、Hinf Ⅰ、Msp Ⅰ和Rsa Ⅰ)组合能有效地鉴别四种螺旋线虫.这是我国有关该属线虫分子特征的首次报道.     

黄秋葵对南方根结线虫抗性的转录组分析

为了解黄秋葵抗南方根结线虫相关基因组学,利用Illumina Hi-seq TM2500高通量测序技术研究受南方根结线虫侵染后黄秋葵种质12C2转录组基因的差异表达。结果表明,接种南方根结线虫18 h后,从接种和未接种的黄秋葵种质12C2根尖中共获得71.49 Gb有效数据,Q30碱基百分比均达到94.0%以上。共获得2 318个差异表达基因(DEGs),包括1 156个上调基因,1 162个下调基因,其中功能注释基因2 202个。根据unigene库序列进行GO、KOG和KEGG注释,细胞壁代谢相关基因——内切葡聚糖酶基因家族、聚半乳糖醛酸酶基因家族、葡聚糖内-1,3-β葡糖苷酶基因家族和果胶裂解酶基因家族下调表达,植物激素代谢相关基因——生长素响应蛋白基因、生长素流入运输载体基因下调表达,茉莉酸合成酶基因上调表达,调控相关基因表达的WRKY和MYB转录因子基因家族上调表达,参与植物细胞的膜联蛋白基因家族上调表达,植物细胞周期蛋白基因家族下调表达。本研究结果为开展黄秋葵抗南方根结线虫基因组学和分子生物学研究奠定了基础。     

对根结线虫高毒力芽胞杆菌的鉴定及其活性测定

为筛选高效安全的杀虫资源,从海底淤泥中分离到一株对根结线虫(Meloidogyne spp.)高毒力的芽胞杆菌YBf-10,PCR扩增16S rRAN基因,经测序、序列比对分析和系统进化树构建,发现其与坚强芽胞杆菌(Bacillus firmus)Z1-7菌株16S rDNA同源性为99%,初步确定所分离的菌株为坚强芽胞杆菌。将该菌株培养至芽胞成熟,离心取上清,10倍稀释后进行生物测定,发现其对北方根结线虫二龄幼虫有很高的毒力。处理24h校正死亡率达到50%以上,72h达到100%。对根结线虫虫卵进行毒力测定表明,作用48h后能显著抑制虫卵孵化达到80%以上。在培养过程中分不同时段取样,并用所取样品上清进行生物测定,发现从稳定期开始表现出了对北方根结线虫的毒力,在整个稳定期毒力持续增强,直到衰亡期后期,毒力达到最高,表明坚强芽胞杆菌所产生的杀线虫活性物质主要是在稳定期合成的。将发酵上清80℃处理30min毒力无明显变化,通过饱和硫酸铵沉淀上清中蛋白,该蛋白对线虫无明显毒力,但是去蛋白后的上清对线虫仍然具有与未经处理上清相似的杀线虫活性,表明坚强芽胞杆菌产生的杀线虫活性物质是一种非蛋白类的小分子化合物。研究结果提示,本研究所分离的坚强芽胞杆菌在稳定期能够大量合成对线虫具有毒杀活性的小分子化合物,对根结线虫表现出极高毒力,为利用该菌株开发植物寄生线虫生防制剂提供了杀虫资源。     

抗线虫基因表达载体构建与转化甘蔗研究初报

试验研究利用德国引进的抗线虫基因Hs1pro 1构建表达载体并转化甘蔗 (SaccharumofficinarumL .) ,以获得抗线虫转基因植株。提取克隆载体P1832用NcoⅠ酶切、Klenow补平和SacⅠ酶切 ,回收基因片段 ;提取表达载体pBIL 1用KpnⅠ酶切、T4DNApolymerase补平和SacⅠ酶切 ,回收大片段 ;目的片段用T4DNAligase连接并转化E .coli,鉴定重组质粒 ;用基因枪轰击转化甘蔗品种“ROC”16获得 16株再生苗 ,其中 4株经PCR检测呈阳性 ,通过Southern杂交 ,证明Hs1pro 1基因已整合到其中 3株甘蔗基因组中     

捻转血矛线虫雌、雄成虫galectin基因的克隆、鉴定及序列分析

根据GenBank中发表的捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)雌、雄混合虫体的半乳糖结合凝集素(galectin)基因序列设计1对引物，分别以山羊捻转血矛线虫雌、雄成虫的总RNA为模板，采用RT-PCR技术，均扩增出约880bp的产物。将其分别克隆入pMD18-T载体，经双酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列测定，表明扩增片段为捻转血矛线虫galectin cDNA。经核苷酸序列、氨基酸序列和抗原性比较分析发现，雌、雄成虫的galectin基因存在一定差异，在开放阅读框内二者有3个核苷酸的差异，2个氨基酸的差异。与已发表的其它galectin相比，雌、雄成虫的galectin与Hco-ga1-3b的同源性最高。二级结构及蛋白质特性预测分析发现，雌、雄成虫的galectin均具有α螺旋、β折叠和β转角，雌虫的galectin蛋白比雄虫的分别多出一个α螺旋和β折叠区。二者的亲水性存在一定差异，但抗原性几乎无差异，且抗原表位比较集中。如同其它galectin一样，在雌、雄成虫的galectin蛋白的N末端不存在信号肽序列。