昆明鼠超数排卵影响因素研究

为探讨昆明鼠超数排卵的最佳条件,提高超排效果,比较促性腺激素使用剂量、孕马血清促性腺激素(PMSG)与人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射间隔时间、超排小鼠所处发情周期阶段及小鼠周龄等因素对昆明鼠超数排卵结果的影响。PMSG 8IU+hCG 8IU、间隔46h～48h注射组超排效果最好;3周龄、8周龄～10周龄雌鼠较4周龄～7周龄雌鼠超排效果好,小鼠发情间期或发情前期开始超排的效果显著高于发情周期的其他时期。     

谷胱甘肽对蒙贝利亚种公牛性控精液冻后效果的影响

本研究通过两个试验探讨谷胱甘肽(GSH)对蒙贝利亚种公牛性控精液冻后效果的影响。试验一,在冷冻稀释液中添加GSH,最终浓度分别为0(对照)、0.5、0.75和1.0mmol/L,观察对性控精液冷冻效果的影响。结果表明,0.75mmol/L组的性控精液冻后精子活率(42.2%)极显著高于对照组(39.2%)(P0.01);0.5mmol/L组冻后活率(40.9%)与对照组相比没有显著差异(P﹥0.05);0.75mmol/L组冻后活率优于0.5mmol/L组,但二者差异不显著;1.0mmol/L组冻后活率(34.90%)极显著低于对照组和其他试验组(P0.01),说明GSH添加量过大对性控精液冷冻效果不利。试验二,在分离前、分离后和冷冻前分别添加GSH,研究对蒙贝利亚牛性控精液冷冻效果影响。即在原精液分离前,在染色液中添加GSH,使最终浓度达0.75mmol/L,然后进行分离;在分离后平衡前精子的缓冲液中添加GSH使其最终浓度达0.75mmol/L,然后平衡;离心后冷冻前在冷冻保护液中再次添加GSH使其最终浓度达0.75mmol/L。对照组不添加GHS,然后分别观察冻精解冻效果。结果表明,试验组性控精液冻后活率(43.5%)显著高于对照组(40.5%),此外,与对照组相比,添加GSH组的精子运动状态表现更加强劲,持续力强。两个试验结果都表明,GSH对性控精液细管剂量、前进运动精子数以及性别准确率等指标没有影响。     

小鼠GV期卵母细胞体外成熟及受精研究

本试验对不同培养液以及添加不同浓度的生殖激素对6～8周龄雌鼠GV期卵母细胞成熟培养效果以及肝素钠对其成熟后体外受精效果的影响进行了研究。结果表明:以TYH为基础培养液的培养方式更适合于体外成熟培养;培养液中单独添加LH或同时添加LH和FSH对昆明小鼠卵母细胞体外成熟有促进作用,但只添加FSH对卵母细胞的成熟促进作用不明显;在小鼠受精液中肝素浓度应控制在10μg/mL为宜。     

稀释液中添加谷胱甘肽和透明质酸对猪精液超低温保存效果的影响

本试验在冷冻液中分别添加不同含量谷胱甘肽(GSH,1、3、5、7、9 mmol/L)和透明质酸(HA,300、600、900、1 200μg/m L)及联合添加GSH和HA,研究其对猪精液冷冻后活力、顶体完整率、体外受精胚胎卵裂率、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明,添加GSH以5 mmol/L浓度效果较好,除卵裂率与未添加GSH组无显著差异外(P>0.05),活力、顶体完整率、SOD活性及MDA含量均与未添加GSH组存在统计学差异(P<0.05);添加HA以900μg/m L组效果较好,除卵裂率与未添加HA组不存在显著差异(P>0.05),其冻后活力、顶体完整率、SOD活性及MDA含量均与未添加HA组存在统计学差异(P<0.05);联合添加GSH和HA,以添加GSH 5mmol/L和HA 900μg/m L组效果较好,且其各指标与未添加GSH和HA组均存在显著差异(P<0.05)。结果说明,冷冻液中联合添加GSH 5mmol/L和HA 900μg/m L可有效改善猪精液冷冻效果。     

猪卵母细胞体外受精条件的优化

猪卵母细胞体外受精(in vitro fertilization,IVF)技术为受精和胚胎早期发育机理等基础理论的研究及生产实践提供了重要的研究手段。虽然猪IVF的研究已经取得了一些进展,但其囊胚发育率仍然较低,亟需建立更为稳定、高效的体外受精方法。本试验通过比较精子浓度,精子获能处理,不同精卵共孵育培养体系以及在卵母细胞成熟过程中添加不同激素等影响猪卵母细胞体外受精胚胎发育能力的因素,以求找到最佳的猪卵母细胞体外受精体系。结果显示:在精子浓度为1×10~5~1×10~7/mL,5×10~6/mL的精子浓度显著提高体外受精效率(P<0.05);以茶碱、咖啡及咖啡因联合使用肝素作为获能物质处理精子,发现2.5 mmol/L茶碱处理组体外受精效率显著提高(P<0.05);通过比较不同的受精体系,发现使用40个卵/500μL体系显著提高体外受精效率(P<0.05);在卵母细胞成熟液中添加不同激素组合,发现添加10IU/mL PMSG,10IU/mL HCG和2.5IU/mL FSH激素组合,体外受精效率显著提高(P<0.05)。本试验结果表明,在M199中添加10IU/mL PMSG,10IU/mL HCG和2.5IU/mL FSH体外成熟培养卵母细胞,以5×10~6/mL精子浓度,2.5mmol/L茶碱作为获能物质处理精子,40个卵/500μL共孵育的IVF体系效果最佳,其卵裂率为(61.33±0.77)%,囊胚率为(28.33±1.08)%。本试验将为深入研究猪IVF提供理论参考。     

冷冻液中添加硫代甘油对小鼠冷冻解冻精子体外受精的影响

为了研究在冷冻液中添加硫代甘油(MTG)对小鼠冷冻精液解冻后受精能力的影响,试验采用在精液冷冻液中添加不同浓度MTG(160,320,480,640μmol/L)的方法冷冻C57BL/6小鼠和昆明白小鼠的精子,然后用解冻的精液进行体外受精,检测受精率和2-细胞发育率,还检测了添加480μmol/L组的C57BL/6小鼠体外受精胚胎移植后的出生率。结果表明:在冷冻液中添加MTG后C57BL/6小鼠和昆明白小鼠冷冻解冻精液的受精率和2-细胞发育率均显著升高(P0.05),说明在冷冻液中添加MTG能够支持体外受精后正常的胚胎发育。通过添加MTG能显著提高这2个品系小鼠冷冻解冻后精子的体外受精能力。     

谷胱甘肽对杜洛克猪精子冷冻保存效果的影响

为了探讨冷冻保存Ⅰ液中添加不同浓度谷胱甘肽(GSH)对杜洛克公猪精子冷冻保存效果的影响,试验将冷冻-解冻处理的精液分为6组,分别为对照组(冷冻保存Ⅰ液)和试验组(分别在冷冻保存Ⅰ液中添加1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 mmol/L的GSH),在液氮中保存,然后检测精子活力、运动参数、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性,活性氧(ROS)水平,丙二醛(MDA)和ATP含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,以此来评价解冻后的精液品质。结果表明：与对照组相比,除GSH添加浓度为3.0 mmol/L时精子活力降低外,其他添加浓度精子活力均提高,其中添加浓度为2.5 mmol/L时提高最显著(P<0.05)。与对照组相比,GSH添加浓度为2.5 mmol/L时猪精子在解冻后各项运动参数均显著提高(P<0.05),添加浓度为2.0,3.0 mmol/L时对猪精子部分运动参数也有一定提高,而添加浓度为1.0 mmol/L时各项运动参数降低。与对照组相比,添加不同浓度GSH时精子质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性均提高,其中...     

柠檬苦素对小鼠卵母细胞体外成熟及其体外受精胚胎发育的影响

【目的】研究柠檬苦素(limonin,Lim)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)及后续体外受精(IVF)胚胎发育潜能的影响,旨在为体外成熟培养系统的优化提供参考。【方法】在小鼠体外成熟培养液中添加不同浓度的Lim(0、10、20、50 μmol/L),成熟培养12 h后统计小鼠卵母细胞第一极体(PBI)排出率,筛选体外成熟培养液中添加Lim的最适浓度;在体外成熟培养液中添加最适浓度的Lim,以0 μmol/L Lim为对照组,成熟培养12 h,通过免疫荧光染色检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)以及线粒体膜电位(MMP)水平;通过实时荧光定量PCR检测卵母细胞抗氧化及凋亡相关基因的mRNA表达水平。将最适Lim组及对照组卵母细胞体外成熟24 h后进行体外受精,于体外受精24 h和3.5 d分别统计胚胎卵裂率和囊胚率,并用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342染色分别检测囊胚总细胞数及囊胚内凋亡细胞比率。【结果】与0 μmol/L Lim组相比,20 μmol/L Lim组小鼠卵母细胞PBI排出率显著升高(P＜0.05),后续试验均用20 μmol/L Lim进行处理。与对照组组相比,20 μmol/L Lim组小鼠卵母细胞内ROS水平显著降低(P＜0.05),GSH、MMP水平均显著增加(P＜0.05),抗氧化相关基因(GPx3、CAT和Prdx3)、抗凋亡相关基因(Bcl-2、Bcl-xl)表达水平均显著上调(P＜0.05),促凋亡相关基因(Caspase-3)表达水平显著下调(P＜0.05);体外受精胚胎的卵裂率、囊胚率、囊胚总细胞数均显著增加(P＜0.05),囊胚内细胞凋亡比率显著下降(P＜0.05)。【结论】在体外成熟培养液中添加20 μmol/L Lim可以通过抑制氧化应激和细胞凋亡、增加MMP水平提高小鼠卵母细胞质量,从而提高体外受精胚胎的发育潜力。     

灌胃左旋甲状腺素(L-T4)对妊娠小鼠胎盘中DIO3基因表达及胚胎数的影响

旨在探究小鼠胚胎发育过程中DIO3的表达模式和灌胃左旋甲状腺素(L-T4)对孕鼠胎盘中DIO3基因表达和胚胎数的影响,以期为研究妊娠期母体甲状腺激素异常提供基础数据.本研究以6周龄健康昆明小鼠(雌鼠70只,雄鼠35只)为试验对象.雌鼠经适应性饲养1周后,腹腔灌胃10 U PMSG(溶于0.3 mL生理盐水),正常饲喂4...     

C57BL/6J小鼠促性腺激素注射时间对诱导超排卵的影响

目的:确定4周龄C57BL/6J小鼠注射促性腺激素的最佳间隔时间,提高超排效果,从而优化C57BL/6J近交系作为供体鼠的生物净化体系。方法:70只4周龄的C57BL/6J雌鼠随机分为5组,腹腔注射10IU的PMSG,10IU的h CG注射间隔时间分别为47h,47.5h,48h,48.5h,49h,比较超排的卵母细胞数和受精率等数据。结果:第1组与第5组的卵母细胞数有极显著差异,其他数据差异不显著。结论:4周龄C57BL/6J小鼠对PMSG应答产生的内源性黄体生成素(LH)释放量不足以引起排卵,因而h CG注射时间无需严格控制在注射PMSG后46~48h内。     

黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

氧化应激是阻碍胚胎体外发育的重要因素之一,减少氧化应激可能是提高胚胎体外培养效果的途径。本文探讨了不同浓度黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,为体外抗氧化性研究及抗氧化物选择提供参考。试验选择4～6周龄雌性昆明小鼠获取GV期卵母细胞,在体外成熟培养液中分别添加不同浓度(0、20、40、60μmol/L)的黄芩苷,经37℃、5%CO₂、饱和湿度培养条件体外成熟12 h,统计卵母细胞第一极体排出率,检测卵母细胞胞质内活性氧(ROS)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及培养液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC),并采集8～10周龄雄性昆明小鼠精液,进行体外受精(IVF),分别于受精后6、24、96 h统计受精率、卵裂率和囊胚率。结果表明：体外成熟液中添加40、60μmol/L黄芩苷后,卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),且浓度为40μmol/L极体排出率显著高于60μmol/L,但对成熟后的卵母细胞体外受精率、卵裂率、囊胚率无显著性影响(P>0.05),卵母细胞胞质RO...     

有机硒的急性毒性试验及对老龄小鼠抗疲劳、抗氧化功能的影响试验

为了解地肤子有机硒产品的急性毒性和对老龄小鼠抗疲劳及抗氧化功能的影响及其安全性,进行了急性毒性短期喂养试验,将28只10月龄以上小鼠根据雌雄不同随机分为6组,分别为雌鼠对照组、雌鼠低硒组(0.2%)、雌鼠高硒组(1%),雄鼠对照组、雄鼠低硒组(0.2%)和雄鼠高硒组(1%)。试验组小鼠自由采食对应的有机硒饲料,饲喂3周试验结束前用转棒疲劳仪测定了小鼠的抗疲劳能力;剖检小鼠,测定了脏器指数和主要脏器的抗氧化指标。结果表明:添加地肤子有机硒组小鼠没有出现急性毒性;通过短期喂养试验,发现地肤子有机硒对老龄小鼠有抗疲劳作用,并且对雌性小鼠的抗疲劳作用优于雄性,对雌雄小鼠肝脏、肾脏抗氧化指标都有良好的影响。     

还原型谷胱甘肽对氟中毒小鼠睾丸的影响

研究不同剂量还原型谷胱甘肽(GSH)对氟中毒小鼠睾丸的影响。将50只3周龄ICR雄性小鼠随机分为5组,其中1组为对照组,其余4组为高氟组。对照组给予蒸馏水,染氟组给含100mg/L NaF的蒸馏水,自由饮用30d。在染氟组中选取3组分成100mg/L NaF+200mg/kg GSH组、100mg/L NaF+400mg/kg GSH组和100mg/L NaF+800mg/kg GSH组,这3组小鼠每只每日分别以200、400、800mg/kg GSH的剂量进行灌胃,同时这5组小鼠再自由饮含氟水30d。饲养结束后,摘取小鼠睾丸进行活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、GSH含量及谷胱甘肽过氧化氢酶(GPx)、谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)、谷胱甘肽还原酶(GR)的活性检测;制作石蜡切片,HE染色进行组织形态结构分析。结果显示,与对照组相比,100mg/L NaF组ROS和MDA含量显著升高,GSTs和GR活性显著降低;与100mg/L NaF组相比,添加GSH组100mg/L NaF+800mg/kg GSH组GR活性显著升高。与对照组相比,100mg/L NaF组曲细精管结构稀疏,细胞壁细胞层厚度变小,各级生精细胞排列紊乱,还有部分生精细胞脱落,管腔半径变大且管腔中央精子数量明显减少;随着GSH浓度的增加,100mg/L NaF+800mg/kg GSH组得到最大程度的恢复。添加GSH后氟中毒小鼠谷胱甘肽抗氧化系统酶活性有所升高,睾丸组织形态结构一定程度上有所恢复,对睾丸功能有一定的改善作用。     

周龄对昆明小鼠超排效果及胚胎体外发育的影响

试验探讨超数排卵效果较好及进行胚胎体外培养研究最佳的昆明小鼠周龄。结果表明,8和10周龄与其他周龄在排卵数和受精卵数方面均差异极显著(P0.01),而在受精率方面8周龄除与10周龄差异不显著外(P0.05),与其他周龄相比均差异显著(P0.05),其中8周龄排卵数为(68.00±10.74)个/只,受精卵数为(58.75±7.97)个/只;6周龄小鼠的1-细胞(92.80%)和2-细胞卵裂率(95.65%)最高;在同周龄情况下,1-细胞与2-细胞的卵裂率差异极显著(P0.01),其中2-细胞的卵裂率高。综上所述,6~8周龄的雌鼠所获得的受精卵个数多且稳定性高。     

还原型谷胱甘肽对氟中毒小鼠附睾的影响

试验旨在研究还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)对氟中毒小鼠附睾的影响。将50只3周龄ICR雄性小鼠随机分为5组,分别为对照组和4组染氟组。对照组饮用蒸馏水,染氟组分别供给含100mg/L NaF的蒸馏水,自由饮水30d。之后在染氟组中选择3组每日分别灌胃200、400和800mg/(kg·只)GSH,同时各组小鼠再自由饮含氟水30d。试验结束后,摘取小鼠附睾进行活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、GSH含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测,同时制作石蜡切片,HE染色后进行组织形态结构分析。结果显示,与对照组相比,100mg/L NaF组精子密度、精子活力、GSH含量、GPx和GR活性均显著下降(P0.05),而GSH添加组较100 mg/L NaF组均有所升高;100 mg/L NaF组精子畸形率、ROS和MDA含量较对照组均显著升高(P0.05),而GSH添加组较100mg/L NaF组均降低,其中800mg/kg GSH组效果明显。与对照组相比,100mg/L NaF组附睾头、附睾体及附睾尾管腔厚度升高,管腔内精子数量下降;GSH添加组附睾头、附睾体及附睾尾的管腔厚度与管腔内精子数量都有所恢复,其中800mg/kg GSH组效果较好。综上所述,添加GSH后氟中毒小鼠谷胱甘肽抗氧化系统酶活性有所升高,附睾组织形态结构一定程度上有所恢复,对附睾有一定的改善作用。     

氟中毒对小鼠肾脏ROS、MDA和GSH含量的影响

为了研究氟中毒对小鼠肾脏活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量的影响,并研究添加GSH后是否有缓解作用,试验建立氟化钠(NaF)+GSH模型,将50只小鼠分为对照组、100 mg/L NaF组、100 mg/L NaF+200 mg/kg GSH组、100 mg/L NaF+400 mg/kg GSH组和100 mg/L Na F+800 mg/kg GSH组,饲养结束后断颈处死小鼠,采集肾脏测定ROS、MDA和GSH含量。结果表明:与对照组比较,100 mg/L Na F可极显著增加肾脏MDA含量,降低GSH含量(P 0. 01);加入GSH后,与100 mg/L NaF组比较,100 mg/L NaF+800 mg/kg GSH组的GSH含量显著增多(P0. 05);而对于ROS,氟摄入和添加GSH均未发现明显变化(P0. 05)。说明添加GSH可以缓解氟中毒引起的肾脏损伤。     

幼龄羊的周龄及卵母细胞体外培养体系对JIVET技术的影响

为了探讨周龄及卵母细胞体外培养体系对幼龄羊胚胎体外生产技术(JIVET)的影响,试验对10只5~10周龄杜寒杂种羔羊进行激素诱导,获取卵母细胞,分别在基础成熟液和含200μmol/L半胱氨酸的成熟液里成熟,再分别在含2%发情羊血清(ESS)的Ⅰ受精液和含3 mg/m L牛血清白蛋白(BSA)的Ⅱ受精液里受精,测定不同周龄羔羊的采卵数量、卵母细胞成熟率和卵裂率。结果表明:5,7,8,10周龄羔羊获得卵母细胞数分别为(111.00±16.97)枚/只、(139.50±28.99)枚/只、(108.50±17.68)枚/只、(42.00±11.31)枚/只,5,7,8周龄羔羊显著高于10周龄羔羊(P0.05),而5,7,8周龄羔羊之间差异不显著(P0.05);试验成熟液获得的卵母细胞成熟率比基础成熟液高3.64百分点;Ⅰ受精液获得的卵母细胞卵裂率极显著高于Ⅱ受精液(P0.01)。说明选择5~8周龄羔羊、卵母细胞体外成熟液添加一定量半胱氨酸和体外受精液含一定量ESS可以改善JIVET体系。     

不同浓度的大蒜溶液对小鼠小肠黏膜上皮内淋巴细胞和杯状细胞数量的影响

试验利用组织化学法和图像分析法研究不同浓度的大蒜溶液对小鼠小肠黏膜上皮内淋巴细胞、杯状细胞数量的影响.选用8周龄Balb/c小鼠(均为雄鼠)50只,随机分成5组,每组10只,分别饲喂5种不同浓度的大蒜溶液,80 mL/d,试验期为10 d.试验结果显示:各试验组小鼠小肠黏膜上皮内淋巴细胞数量由十二指肠向空肠、回肠逐渐减少;杯状细胞的数量由十二指肠向空肠、回肠逐渐增加. 1%浓度的大蒜溶液对小鼠小肠黏膜上皮内淋巴细胞、杯状细胞数量的影响明显高于对照组、2%组、5%组、10%组,且差异极显著(P<0.01).     

复方生石膏对热应激蛋鸡生产性能和血液生化指标的影响

将300只体质良好、平均体重为1585 g、60周龄海兰褐蛋鸡,随机分为5组,在试验组日粮中分别添加0.5%、1%、1.5%的复方生石膏及0.04%的维生素C,观察热应激蛋鸡生产性能和血液生化指标的变化情况.结果与对照组相比,复方生石膏高浓度组(1.5%)可显著增加日采食量4.41 g/d(P<0.05),提高产蛋率4.38%(P<0.05),增加蛋壳厚度0.022mm(P>0.05),提高血糖浓度3.02 mmol/L(P<0.01),提高总蛋白浓度19.48 mmol/L(P<0.01)、白蛋白浓度2.70 mmol/L(P<0.01);降低甘油三酯1.20 mmol/L(P<0.01)、总胆固醇含量0.32 mmol/L(P<0.01).结果显示,复方生石膏高浓度组(1.5%)对热应激蛋鸡生产性能和血液生化的改善效果最佳.     

芝麻素对小鼠早期胚胎体外发育的影响

本试验旨研究在体外培养(in vitro culture,IVC)中添加芝麻素(sesamin,SES)对小鼠早期胚胎体外发育的影响。采集6周龄雌性昆明小鼠受精卵,随机分为对照组和不同浓度(10、50、100μmol/L) SES组。采用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342免疫荧光染色分别检测囊胚内细胞凋亡率和总细胞数;采用DCFH-DA检测早期胚胎内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用CMF_2HC检测早期胚胎内谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;采用JC-1检测早期胚胎线粒体膜电位强度。结果显示,不同浓度SES组分裂率和囊胚率较对照组均有提高,但无显著差异(P0.05);50μmol/L SES组细胞数较对照组显著提高(P0.05),细胞凋亡率较对照组显著降低(P0.05);与对照组相比,50μmol/L SES组ROS水平显著降低(P0.05),GSH水平和线粒体膜电位水平显著提高(P0.05)。结果表明,在IVC中添加SES可提高囊胚内细胞数、减少细胞凋亡率,降低细胞内ROS水平,提高细胞内GSH水平,改善早期胚胎线粒体功能,减少胚胎氧化应激的损伤,提高小鼠早期胚胎发育质量。