动物病毒疫苗的研究现状与展望

１　动物病毒疫苗的发展概况动物病毒疫苗的研制大致分为四代。由感染组织和随后以感染鸡胚的胚液或组织制备的疫苗，如兔病毒性出血症组织脏器苗，鸡新城疫鸡胚苗等被视为第一代疫苗；以人工感染的细胞培养物制成的弱毒疫苗或灭活疫苗、以及筛选异源或同源自然弱毒株研制的弱毒苗，如猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞苗为第二代；这两代疫苗统称为传统疫苗。目前常用有湿苗、冻干苗、灭活油乳剂苗等。由于是用完全病毒制备而成，故不可避免有一些与特异性免疫无关的成分存在，可能引起局部或全身不良反应，因此人们急需获得一种只含有特异性抗原的新…     

鸡传染性喉气管炎病毒适应性细胞的筛选

为了克服鸡传染性喉气管炎弱毒活疫苗产品制备中存在的缺陷,通过对BHK-21细胞、Vero细胞、DF1细胞、原代鸡胚成纤维细胞(CEF)、原代鸡胚肝细胞、原代鸡胚肾细胞等六种细胞进行病毒适应性培养,采用PCR和免疫荧光(IFA)跟踪检测的方法成功筛选出具有稳定病毒滴度的病毒适应性细胞——鸡胚肝细胞。然后采用新的克隆方法缩短了克隆时长并对筛选的鸡胚肝细胞进行克隆纯化,通过与原代鸡胚肝细胞进行比较,结果显示本试验所采用的克隆方法具有高几率的特点,并且能够克隆出高活性的鸡胚肝细胞,并能够繁殖较高效价的鸡传染性喉气管炎病毒,为解决鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗在生产上存在的瓶颈问题提供了重要的基础条件。     

鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗免疫异常的分析

鸡传染性喉气管炎(ILT)弱毒疫苗系用鸡传染性喉气管炎病毒弱毒株接种SPF鸡胚，收获感染鸡胚的绒毛尿囊膜，混合研磨，加适宜稳定剂，经冻干制成。该苗用于预防鸡传染性喉气管炎。     

鸡新城疫-传染性支气管炎二联油乳剂苗的研制

以NDVLaSota株,IBV呼吸道型H120株和肾型SN9301株为制苗毒株,病毒经鸡胚繁殖后甲醛灭活,灭活毒液依毒价按比例混合加入油佐剂中,乳化制成ND-IB二联油乳剂疫苗。对该疫苗的安全性、稳定性和免疫效果等进行了测定。结果表明:疫苗安全稳定,物理性状良好;将该苗与相应弱毒苗配合用于雏鸡首免,可获得稳定的免疫保护;单用该苗给雏鸡首免,或用相应弱毒苗免疫雏鸡,免疫效果均较差。     

鸡新城疫-传染性支气管炎二联油乳剂苗的研制

以NDV La Sota株，IBV呼吸道型H120株和肾型SN9301株为制苗毒株，病毒经鸡胚繁殖后甲醛灭活，灭活毒液依毒价按比例混合加入油佐剂中，乳化制成ND—IB二联油乳剂疫苗。对该疫苗的安全性、稳定性和免疫效果等进行了测定。结果表明：疫苗安全稳定，物理性状良好；将该苗与相应弱毒苗配合用于雏鸡首免，可获得稳定的免疫保护；单用该苗给雏鸡首免，或用相应弱毒苗免疫雏鸡，免疫效果均较差。     

新型鸡传染性喉气管炎活毒疫苗

一、苗毒的性状1.苗毒的特征这是将强毒在鸡胚肾细胞内传代,进行到38代后再用鸡胚(CE)细胞传代所得的弱毒苗。这种苗毒有几个特征。野毒在 CE 细胞内的增殖性差,感染价仅有10~(3.0)—10~(4.0)TCID_(50)/毫升不产生细胞致病作用(CPE)。但苗毒在CE 细胞内的增殖性好,增殖量是野毒的100～1,000倍,并可在 CE 细胞内发现 CPE。这一特性是在发育鸡胚或鸡肾细胞内完成了20次传     

鸡的马立克氏病疫苗

1.概况:马立克氏病疫苗,目前已知有三种,一种是用从患马立克氏病的鸡体内分离出来的强毒,通过鸡的肾细胞再通过鹌鹑胚细胞继代减弱的所得弱毒株制成的苗。这种苗具有一定免疫力,其缺点是注苗后的鸡易脱毛,在日本个别鸡场有激发其他病发生的现象。1970年后,日本已不用这种苗了。第二种是从火鸡身上分离出来的马立克病毒     

鸡痘病毒河南株的分离与鉴定

从发病鸡病变组织采集病料,通过鸡胚接种和细胞培养分离病毒,经电镜观察、包涵体检查和理化特性检查证明分离病毒为鸡痘病毒,用分离毒株研制出鸡痘油乳剂灭活苗,配合鸡痘鹌鹑化弱毒苗使用,用于鸡痘的预防,经临床应用效果良好。     

犬瘟热病毒的分离及部分特性研究

本试验通过消除组织培养中某些干扰因素,用鸡胚成纤维细胞(CEF)直接从水貂病料中分离出3株犬瘟热病毒,即QM—CDV、YM—CDV和ZM—CDV,并以3株国外犬瘟热弱毒作为参考株,对所分离毒株的部分生物学特性进行了研究.结果表明,QM—CDV、YM—CDV和ZM—CDV在鸡胚成纤维细胞上生长良好,产生明显的细胞病变(CPE),也可在猴肾传代细胞(Vero)和人羊膜细胞(FL)上增殖并出现细胞病变;在电镜下观察,病毒粒子具有囊膜和纤突,直径在130～180nm之间;细胞中和试验表明,分离毒与国外弱毒具有相同的血清型;分离毒株的水貂病料经脑内接种均使幼犬发病,出现明显的临床症状.     

传染性法氏囊病病毒Gt株基因组A节段的克隆和序列分析

利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDV-Gx株进行培育,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱,使其成为弱毒株IBDV-Gt.从细胞适应毒中提取病毒dsRNA,通过反转录,使用Long-accurate PCR(LA-PCR)用一对引物一步直接扩增IBDV-Gt基因组A节段全长cDNA的方法,得到一约3.30kb的片段.测序结果证明已获得3255bp的A节段全长,对vvIBDV-Gx株和IBDV-Gt株的全部核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析,结果表明IBDV-Gt株与国内外数株IBDV弱毒株的同源性在99%以上.     

NDV不同浓度接种鸡胚后的HA效价比较

鸡新城疫是一种急性高度接触性传染病,为危害鸡群的主要传染病之一.近年来,在生产上出现了高致病性的强毒株,甚至超强毒株,一旦发生,难于控制,往往出现极高的死亡率,给养鸡业带来毁灭性的打击.防制本病的有效方法是对鸡群进行免疫接种,常用的疫苗有弱毒疫苗和灭活疫苗.随着毒株毒力的加强,用弱毒疫苗免疫接种经常出现免疫失败或保护不完全的情况,常常要结合ND油乳剂灭活苗接种才能取得较好的效果.而在强毒力的灭活苗的生产中,目前仍主要采用鸡胚作为病毒的繁殖载体.因此,获得高效价的病毒液（尿囊液）是制苗的关键.试验对如何获得高效价的尿囊液,确定接种时种毒的最佳浓度及鸡胚尿囊液的最佳收集时间进行探讨.     

犬瘟热弱毒株CDV3生物学特性鉴定

以SPF鸡胚成纤维细胞 (CEF)从国外引进的疫苗中分离到犬瘟热弱毒株CDV3 。对犬瘟热弱毒株CDV3 的理化特性 ,细胞病变规律 ,病毒毒价 ,核酸型、血清学交叉反应 ,试验动物的安全性及免疫原性等内容进行了试验 ,结果表明 ,犬瘟热弱毒株CDV3 可作为狐犬瘟热疫苗生产用毒种。     

臭氧对鸡新城疫Ⅳ系弱毒的作用研究

通过观察臭氧对鸡新城疫Ⅳ系弱毒的杀灭作用来揭示臭氧对新城疫病毒的灭活效果。以微量法测定鸡新城疫Ⅳ系弱毒苗和鸡胚接种后尿囊液中病毒效价,臭氧消毒机开启10、20、30、40、50和60min,观察在不同作用时间臭氧对病毒的杀灭效果。结果表明,随着臭氧消毒机开机时间(臭氧浓度)的增加,鸡新城疫Ⅳ系弱毒苗的效价呈下降趋势,并且当臭氧通过50min后,鸡新城疫弱毒苗的效价和接种鸡新城疫弱毒苗鸡胚的效价都降低到0,表明臭氧对新城疫病毒有明显的灭活作用。     

鸡新城疫北京株强毒理化及生物学特性的测定和鉴定

现有鸡新城疫强毒是我国于1944年从北京郊区病死鸡脑内分离的,用鸡体传代毒在鸡胚上繁殖的病毒(简称北京株强毒)。其毒力稳定,是一株广泛用于国内的攻毒用强毒株。本试验对该毒株某些未曾试验的理化及生物学特性进行测定和鉴定。     

鸡新城疫病毒的分离鉴定与交叉免疫保护试验

为了评价疫苗免疫保护效果,进而筛选出最佳的免疫方案,将分离到的鸡新城疫病毒(Newcas-tle disease virus,NDV)流行毒株制备成灭活疫苗进行交叉免疫保护试验研究。把采集到的疑似发生新城疫的病鸡肺、气管环等组织经处理后接种10日龄SPF鸡胚进行病毒的分离和增殖,并用血清学和分子生物学方法进行毒株的鉴定;用分离到的NDV/Chicken/TC/1/2011毒株制成油乳剂灭活苗,与La Sota疫苗以不同的疫苗组合免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果显示,共分离到9株新城疫病毒,其F蛋白裂解位点的氨基酸均为112 R-R-Q-K-R-F117,表现为强毒株的分子特征,与致病指数结果一致。分离株灭活苗组和分离株灭活苗+La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最高,其次是La Sota灭活苗+La Sota弱毒苗和LaSota灭活苗,La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最低。NDV分离株与疫苗株La Sota存在明显抗原性差异,这将对新城疫疫苗的发展和疾病控制策略制定至关重要。     

鸡马立克氏病病毒耐高温毒株的培育及其主要生物学特性

用强毒MDV京-1株通过鸡胚皮肤细胞(CES)培养物连续传代.并在F_(11)～F_(43)之间以逐步提高温度的方法进行处理和克隆,培育了一株能耐受60℃30分钟的毒株。该毒株经进一步培育后,其毒力丧失速度比常规致弱毒株明显地减慢;在一定代次后,繁殖速度大大增加;而免疫原性在100代以内却不及常规致弱的毒株。木试验第一次直接用CES从鸡体分离MDV并获得了成功,MDV在CES培养物上第1代即可产生典型的致细胞病变作用(CPE)。     

鸭肝炎病毒FC64株的全基因组序列测定与分析

鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒(DHV)引起的一种鸭的重要传染病,弱毒苗可有效预防该病的发生.从临床上分离获得一株DHV强毒株,经SPF鸡胚传64代后,培育成为弱毒株,命名为FC64.为了对该弱毒疫苗进行遗传背景分析,测定了该毒株的全基因组序列,经分析表明,FC64属于血清1型DHV弱毒株,基因组长度为7 692 bp(未...     

鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗病毒释放工艺探索

在鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗生产中,一般将收获的细胞培养物反复冻融释放细胞结合病毒,然后进行配苗冻干。为了确定合适的冻融次数和测定冻融对病毒的影响,我们以超声波裂解的细胞毒液为对照,通过对不同处理方法的原苗冻干前后毒价的多重比较,发现冻融对鸡痘病毒影响较大,因此试验确立了新的释放病毒方法(即超声波裂解法),现总结如下。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 SPF鸡胚 由辽宁省益康生物制品厂SPF中心提供,孵化10～11日龄备用。1.1.2 种毒 鸡痘鹌鹑化弱毒(F_(282)E_4),由中国兽药监     

鸡传染性喉气管炎-鸡痘细胞弱毒二联苗的研究

鸡传染性喉气管炎(ILT)和鸡痘(AP)弱毒株能在鸡胚皮肤(CES)细胞中增殖,并引起典型的致细胞病变效应(CPE)。ILT细胞毒含毒量高于鸡胚毒1个滴度(EID_(50)),AP细胞毒含毒量高于鸡胚毒0.79个滴度(EID_(50))。应用鸡胚皮肤细胞同时增殖鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)和鸡痘病毒(APV),其细胞毒毒价较单株接毒的细胞毒有所降低,ILTV的含毒量EID_(50)下降0.03个滴度,CCID_(50)下降0.28个滴度,APV的含毒量EID_(50)下降0.24个滴度,CCID_(50)下降0.25个滴度,但仍分别高于鸡胚毒,ILTV EID_(50)比鸡胚毒高0.72个滴度,CCID_(50)高0.93个滴度。APV EID_(50)高0.55个滴度,CCID_(50)高0.17个滴度,其各自的抗原性和免疫原性都不变。将ILT和AP的第3代细胞毒在CES细胞上同时增殖,待细胞出现75％病变对收获、冻融、加入双抗及防腐剂配制成苗。联苗毒对细胞的感染阶分别为CCID_(50) 7.49(ILTV)和CCID_(50) 7.58(APV),以10倍稀释0.2ml剂量肌肉接种鸡,通过11批108只不同月龄鸡的免疫效力检验,对ILT保护率为83.0％,对AP为82.8％,免疫期均在6个月以上。安全可靠。为防制ILT和AP提供了新途径。     

水貂犬瘟热免疫的研究 Ⅱ、制苗工艺、免疫、毒价、保存期试验

前报己报导从引进的貂瘟疫苗中分离的弱毒株已很好地在鸡胚组织培养上生长繁殖,具备了作为制苗用种毒的条件,并通过实验室检定和安全试验证明,所试制的弱毒冻干苗是安全的。在上述基础上,1981年进行了貂瘟弱毒冻干苗生产、定型、免疫、免疫期、最小免疫剂量、毒价及疫苗保存期等项补充试验,取得了满意的效果,为貂瘟冻干苗的制造和检验规程的制订提供了依据。