牛重组型生长激素抗独特型抗体的产生与鉴定

利用纯化的兔抗牛生长激素抗体ＩｇＧ来免疫３只绵羊以制备抗独特型血清。间接ＥＬＩＳＡ法和琼脂糖双扩散法测定抗血清滴度分别达到或超过１：１２８０００和１：６４以上。之后用硫酸铵沉淀法和亲和层析法纯化抗独特型抗体。采用间接ＥＬＩＳＡ法来研究抗独特型抗体与第一抗体ＩｇＧ成分特异性结合及生长激素与第一抗体中ＩｇＧ结合的影响,结果显示出它不但能ＩｇＧ成分特异性结合。而且能与生长激素竞争性结合第一抗体ＩｇＧ成分     

抗独特型抗体的制备和应用

抗独特型抗体的制备和应用（浙江省农科院牧医所）王一成抗独特型（抗－Ｉｄ）抗体是近年来生物技术研究的一个新领域，无论理论研究还是应用研究，都非常活跃，尤其作为人、畜疾病防治的一种新制剂，已展示出十分诱人的前景。关于独特型的结构基础，抗独特型抗体的分类和...     

重组型牛生长激素抗独特型抗体促生长作用机理研究

选用六月龄内蒙古半细毛羯羊8只按体重相近原则分为3组 :(1)对照组、(2)生长激素处理组、(3)抗独特型抗体组。各组动物日粮组成、营养水平及饲养管理相同。研究抗独特型抗体对动物蛋白、糖、脂肪代谢的影响 ,从而确定其促生长作用机理。结果表明 ,这种免疫调节剂发挥了与生长激素类似的促生长、改善胴体品质的效力 ,尽管其效力较弱(特别在提高日增重方面) ,但在氮代谢效率方面二者相当。进一步研究发现这种促生长作用是在组织代谢层次上实现的 ,具体讲就是通过降低尿素再循环、增加糖异生、提高组织氮沉积量途径来达到增加蛋白组织合成目标。     

用抗原免疫构建分泌免出血症病毒抗独特型抗体的杂交瘤细胞

用纯化的兔出血症病毒免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。正如网络学说所指出的,从免疫鼠的杂交瘤细胞克隆中,不仅筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ抗体的细胞克隆,同时也筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞,用抗原而不用单克隆抗体免疫,诱导产生抗独特型抗体是一种具有广阔的应用前景的新技术。     

分泌抗IBDV单抗的杂交瘤细胞的代谢调控研究获成功

鸡传染性法氏囊病是目前严重危害养鸡业的一种烈性传染病,它侵害机体的免疫器官,使免疫接种失败,造成重大经济损失。目前,治疗此病尚无很好的方法。该项目通过对杂交瘤细胞生长代谢方面的研究、细胞反应器的改进、单抗高效表达到单抗治疗制剂的扩大应用研究等,所获制品在临床治疗上取得很好的效果,这将为产品的产业化奠定了基础。□分泌抗IBDV单抗的杂交瘤细胞的代谢调控研究获成功     

MD病毒抗独特型抗体的研制

制备鸡马立克氏病病毒(MDV)抗独特型抗体(Ab2),探讨Ab2模拟抗原诱导免疫应答的能力.用MDV免疫SPF鸡,分离提纯鸡抗MD-IgG(Ab1),Ab1免疫BALB/C鼠,用鼠脾细胞与SP2/0细胞制备Ab2杂交瘤细胞株,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,经克隆、纯化2×株抗MDV独特型抗体杂交瘤细胞株(6E5,7A12),其中6E5培养上清、腹水ELISA效价分别为4000×、10000×,免疫20 d攻毒,具有抗MDV感染保护.     

用抗原免疫构建分泌兔出血症病毒抗独特型抗体的杂交瘤细胞

用纯化的兔出血症病毒（ｒａｂｂｉｔｈａｅｍｏｒｈａｇｉｃｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ,简称,ＲＨＤＶ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。正如网络学说所指出的,从免疫鼠的杂交瘤细胞克隆中,不仅筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ抗体（Ａｂ１）的细胞克隆,同时也筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ独特型抗体（ａｎｔｉ－ｉｄｉｏｔｙｐｉｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ,Ａｂ２）的杂交瘤细胞,用抗原而不用单克隆抗体（Ａｂ１）免疫,诱导产生抗独特型抗体（Ａｂ２）是一种具有广阔的应用前景的新技术     

四种凝集试验检测牛布鲁氏菌病血清抗体的比较

牛布鲁氏菌病主要由流产布鲁氏菌引起的传染病,严重危害着养牛业的发展和人类健康。检测牛布鲁氏菌病血清抗体的方法主要有：试管凝集试验（SAT）、H流基乙醇试管凝集试验（ME—SAT）、虎红平板凝集试验（RBPT）、致敏红细胞凝集试验（SRAT）,平板凝集试验,抗球蛋白凝集试验、补体结合试验、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验等［’3。作者选用了SAT、ME－SAT、RBPT、SRAT等四种简单常用的方法来检测牛布鲁氏菌病血清抗体,并比较了四种方法的检出率、符合率及优缺点,现将试验结果报告如下。l材料和方法1．l血清正．亚．l待…     

分泌抗IBDV独特型抗体细胞株的建立

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶ ＩｇＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得了２株（２Ｂ６株、５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，并能诱生Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独型抗体腹水。     

抗旋毛虫单克隆抗体细胞林的建立及其特性鉴定

为筛选旋毛虫保护性抗原,建立了4株分泌抗旋毛虫McAb的细胞株。经连续培养30余代,仍稳定地分泌抗体。其中,2G3和2C10的靶抗原为旋毛虫幼虫表膜。免疫球蛋白 型及亚 鉴定表明,2G3和2C10为IgG_1,1D5为IgG_3,1C9为IgM。除2C10和IC9对伊氏锥虫可溶性抗原呈现阳性反应外,未见对猪圆线虫、猪囊尾蚴、伊氏锥虫表膜抗原和正常猪肉反应。经ELISA测定,2G3、2C10、1D5、1C9均可与施毛虫幼虫可溶性抗原作用,其腹水效价分别为1:50000、1:10000、1:1000、1:800。各McAb均与旋毛虫幼虫排泄分泌物抗原(ES抗原)作用,经ELISA测定表明,2G3腹水效价达1:320000。     

稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体细胞株的筛选与应用

研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体,并应用其建立检测布病的双夹心ELISA方法。本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16M菌株)的脂多糖抗原,并经SDS-PAGE鉴定。用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16M作为免疫抗原,交替免疫6～8周龄BALB/c雌鼠,第1次免疫用羊种布鲁菌标准菌16M全菌加等量弗氏完全佐剂;第2次免疫用脂多糖加等量弗氏不完全佐剂。将脂多糖作为包被抗原建立间接ELISA方法,筛选针对抗羊种布鲁菌(16M菌株)脂多糖的单克隆抗体杂交瘤细胞株。筛选出3株能稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5H3、6B8和3H7,细胞培养上清的ELISA效价在1∶1 000～1∶5 000,小鼠腹水单克隆抗体ELISA效价在1∶10 000～1∶160 000;抗体亚类鉴定表明:5H3、6B8属于IgM亚类,3H7属于IgG3亚类;特异性试验结果显示:3株杂交瘤细胞分泌的抗体不与大肠杆菌O157裂解抗原、鸡白痢沙门氏菌裂解抗原、鸭源鸡杆菌脂多糖抗原以及福氏志贺菌裂解抗原反应,仅与灭活的羊种布鲁菌(16M)发生反应。布鲁菌虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测结果显示,获得的单抗可与标准检测抗原形成明显的颗粒凝集物和伞状凝集物。利用所建立的单克隆抗体细胞株,建立了一种检测布鲁菌的双夹心间接ELISA方法,并进行了特异性和敏感性检测。对模拟样品和临床样品进行检测,准确性均很高。     

奶山羊布鲁氏菌病抗原与抗体双检测的效果分析

为了有效检测净化奶山羊布鲁氏菌病群体,加快奶山羊产业健康稳步发展。本文采用布鲁氏菌病抗原与抗体双检测方法对陕西某奶山羊场进行了检测分析。结果表明,在某奶山羊场引入羊时,采用抗体单一检测发现全群228只羊感染了36只,感染率达到15.79%,发现感染后对本群感染羊进行了无害化处理和圈舍清洗消毒,3个月后对剩余的192只羊有进行了一次全群检测,结果检测出18只阳性羊,与上一次的净化方式一样处理后,同样又在3个月后对剩余的174只羊采用抗原与抗体双检测方法,布病抗体检测卡检测出8只羊,布病抗原检测卡检测出10只羊,而且用布病抗体检测卡和布病抗原检测卡检测出来的羊只编号完全不同,3个月后对剩余的156只羊进行同样的方法进行检测,结果仅检查出1只阳性羊,6个月后对剩余的155只羊进行同样的方法进行检测,未发现布病阳性羊只。利用抗原与抗体双检测继续在3个月、6个月进行检测均未发现阳性羊只。本试验得出结论,相比于抗体单一的布鲁氏菌病检测法,抗原抗体共同使用的检测方法布病阳性率明显的降低,且能短期内达到预期净化的效果,说明双抗使用在羊布鲁氏菌病检测中效果更好,更具有推广使用的意义。     

酵母蛋白促杂交瘤细胞和骨髓瘤细胞克隆化和诱生腹水的作用

从隐球酵母科酵母菌提取的酵母蛋白对杂交瘤细胞和骨髓瘤细胞具有促生长、促克隆率和诱生腹水的作用.在单个细胞克隆化不加饲养细胞的情况下,克隆率在50％以上.酵母蛋白对抗李氏杆菌杂交瘤细胞促生长作用为对照组的9.8倍,应用ELISA法测定培养上清抗体反应结果,吸光度值平均增加0.20.在不预先注射液体石蜡的情况下,将杂交瘤细胞或骨髓癌细胞悬于含酵母蛋白的培养液中,直接注入BALB/c小鼠腹腔,无论腹水出现时间还是产量收获均与预先注射液体石蜡常规对照组相似(P>0.05),且腹水效价实验组较常规液体石蜡对照组增加近1倍.     

分泌抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

利用超速离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）广东地方分离株Ｄ４１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合,经筛选及克隆,成功地建立了６株可分泌抗ＩＢＶＤ４１株的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞：Ｂ５、Ｂ８、Ｃ７、Ｄ８、Ｄ９、Ｇ１１。其中Ｂ８、Ｃ７、Ｇ１１的稳定性最好,腹水ＭｃＡｂ效价高达１０１０,无血清培养上清ＭｃＡｂ（浓缩３０倍）效价达４×１０４以上。６株杂交瘤细胞的特异性均很好。     

Preparation and Identification of Monoclonal Antibody Against Swainsonine

In this test,BALB/c mice were immunized by SW-OVA for the preparation of monoclonal antibody against swainsonine (SW). Hybridoma cells that could secrete specific antibody against SW were prepared by hybridoma technique,and then the strain that secreted monoclonal antibody against SW designated 1F10 was prepared,and the chromosome average number of 1F10 cell was 45 to 50 couples. The ELISA titers of cell supernatant were 1:25 600, and that of ascites were 1:80 000.The subclasses of monoclonal antibody was IgG1,and the affinity constant was 1.14×10¹⁰,the purity of ascites antibodies was up to 98%,and the recovery rate was 80%.The result of sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis proved that purified antibody had been obtained that the molecular weight of H-chain and L-chain of antibody was about 50 and 25 ku. The monoclonal antibody against SW specifically bound to SW determined by Western blotting. The linear range was 4 to 128 μg/mL (R²=0.9969) and no cross-reactivity was detected with BSA,gelatin,polylysine,me-Gal,etc. The result laid the foundation for immunodetection on SW and immunological prevention of animal toxic disease.     

苦马豆素单克隆抗体的制备与鉴定

本试验采用苦马豆素（swainsonine,SW）人工抗原SW-OVA免疫接种BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株能稳定分泌SW单克隆抗体的杂交瘤细胞1F10,杂交瘤细胞染色体数目为45~50对。经间接ELISA检测,该株细胞培养上清中抗体效价为1：25 600,诱生腹水效价为1：80 000。单克隆抗体的亚型为IgG1,亲和力解离常数为1.14×10¹⁰,腹水抗体纯化后纯度可达98%,回收率80%,SDS-PAGE凝胶电泳可见单克隆抗体的轻链、重链分子质量分别为25和50 ku,Western blotting检测抗体能特异性的识别SW。其线性检测范围为4~128 μg/mL（R²=0.9969）,与BSA、明胶、多聚赖氨酸、α-甘露糖苷等无交叉反应。本试验制备的SW单克隆抗体为免疫学检测SW和免疫学防制家畜疯草中毒奠定基础。     

猪RNA聚合酶Ⅱ单克隆抗体的制备与应用

旨在制备猪RNA聚合酶Ⅱ的单克隆抗体并进行初步应用。本研究采用生物信息方法预测免疫原，将其化学合成后免疫5只4~8周龄Bal b/c雌性小鼠，对免疫后呈现阳性的小鼠进行细胞融合试验，取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合并获得能稳定分泌抗RNA PolⅡ的杂交瘤细胞。鉴定结果显示，RNA PolⅡ单克隆抗体的重链为IgG 2A型，轻链为Kappa型。利用间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆，获得了8株稳定分泌RNA PolⅡ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。将其初步应用到染色质免疫共沉淀（ChIP-seq）技术，并与商业化抗体的富集性进行比较，结果表明，本研究得到的单克隆抗体富集性更强。本研究获得的猪RNA PolⅡ单克隆抗体可为表观遗传学的研究提供理论基础，并且提供重要的生物学材料。     

小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内代谢消长规律的研究

为研究小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内的代谢消长规律,试验通过建立小反刍兽疫N蛋白双抗原夹心ELISA抗体检测方法、H蛋白阻断ELISA抗体检测方法与血清中和抗体试验方法,分别检测了羊免疫疫苗后体内N蛋白抗体与H蛋白抗体在每个免疫阶段的代谢消长变化。结果表明:羊免疫小反刍兽疫疫苗后,血清内的N蛋白抗体与H蛋白抗体在6~8周时血清抗体效价较高,对应的羊体内中和抗体效价为1∶512,且效价至少可以持续到10周以上,2种抗体具有一定消长代谢规律的相关性。该研究结果也为以N抗原与H抗原为基础建立相应的抗原捕获ELISA方法、竞争ELISA检测方法、间接ELISA检测方法以及双抗原夹心ELISA检测方法奠定了一定的理论依据。