玉米预防转基因漂移试纸条快速检测方法

本研究旨在使用试纸条检测方法在玉米苗期从常规玉米育种材料中发现转基因植株,以预防非预期的转基因漂移。以转基因和非转基因玉米为材料,以笔者过去开展转基因玉米材料筛选的经验总结为基础,开发出试纸条快速检测方法。本研究介绍了检测所需用品和取样方法,并且详细讨论了样品数量、操作步骤及注意事项等。还具体演示分析了2个典型检测案例的过程和结果。本方法的操作步骤简便易学,适合专业和非专业育种者或检测人员对田间材料在自查或检验中使用。熟练掌握试纸条快速检测法,能有效筛查和预防由于花粉或种子非预期混杂造成的转基因漂移。     

玉米种子生产基地品种转基因成分快速检测的策略

近年来,种子监督管理过程中发现部分地区存在非法繁育转基因作物的现象.为了打击转基因玉米非法繁育的行为,更好地保障农业转基因安全,对玉米种子生产基地的品种进行转基因成分的现场快速检测十分重要.本研究检索已知商业化转基因玉米的外源目的基因信息,构建了转基因玉米常用外源目的基因数据库,建立了玉米品种转基因成分快速检测的策略.研究发现,利用Cry 1 Ac/Ab、CP 4 EPSPS、Pat/Bar3个快速检测试纸组合可完成20个转基因玉米转化事件的现场快速检测.     

用试纸条快速检测盐酸克伦特罗的试验

本试验以盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸条来对动物尿液中盐酸克伦特罗(Clenbuersl,CL)进行快速检测.试验结果证明这种快速检测试纸条能够有效检测尿液中的残留物,检测灵敏度达到2～3ng/mL.     

牛妊娠相关糖蛋白6快速检测试纸条的制备及应用

奶牛妊娠的早期诊断至关重要,妊娠相关糖蛋白6(PAG6)是母体胎盘组织分泌至外周循环中的特异蛋白质,因此,本研究致力于制备牛妊娠相关糖蛋白6快速检测试纸条。制备牛妊娠相关糖蛋白6多克隆抗体,将其稀释后加样至NC膜上,通过固定和封闭制备出一种可检测boPAG6的快速检测试纸条,在试纸条上加入待检血清进行孵育后洗涤,再加入二抗孵育后洗涤,最后加入显色液显色后进行快速检测。标准化快速检测试纸条是将抗体用PBS稀释成10μg/mL点样至NC膜上,在37℃温箱中固定抗体30 min,经5%的脱脂奶粉封闭后制成。待检血清滴加至试纸条后,在37℃温箱中孵育1 h后,进行洗涤和二抗孵育,最后在DAB显色试剂盒作用下显色3 min即可判定。临床检测的初步应用表明,在未孕与怀孕奶牛的混合血清中仍然可以判定是否怀孕,快速检测试纸条特异性强;血清在稀释3200倍的最低检测限时,快速检测试纸条的敏感性良好;而且该结果与ELISA的符合率在80%之上。试验重复性良好,并能在4℃和-20℃条件下保存2周。建立了一种奶牛早期妊娠诊断的快速检测试纸条并应用于初步的妊娠诊断。     

氯霉素单克隆抗体免疫金标快速检测试纸的研制及性能测定

以分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株的建立为基础,应用胶体金免疫层析试验(GICA)成功研制出CAP残留快速检测试纸(CAP_Strip),并对其性能进行了测定。结果表明,CAP_Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0.5μg/L;与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应为160%,与其他酰胺醇类和抗菌药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%;10 min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合CAP残留快速检测的推广应用。     

同步检测马铃薯 6 种病毒试纸条与ELISA 方法比较分析

为了尽快地将同步快速检测马铃薯 6 种病毒试纸条推广应用到全国各地的基层单位、马铃薯的种薯种植企业、合作社、种植大户、种子管理部门,以提高马铃薯的质量和产量,进一步完善马铃薯种薯的质量认证体系;将同步快速检测马铃薯 6种病毒试纸条与国内外通用的 ELISA 检测方法进行比较分析。比较分析表明,任何马铃薯种植者可以利用马铃薯病毒快速检测试纸条在田间地头检测马铃薯病毒的发生情况;可以通过肉眼直接判断出病毒检测结果;5~10min 即可完成马铃薯病毒的检测;试纸条的检测成本低,灵敏度高。     

链霉素金标单克隆抗体快速检测试纸的研制及其特性鉴定

建立了分泌抗链霉素单克隆抗体(STR mAb)杂交瘤细胞株并生产了STR mAb,采用胶体金免疫层析试验(GICA)技术成功研制出STR残留快速检测试纸(STR-Strip),并对其性能进行了鉴定.结果显示,目测检测限为12.5 μg/kg;与氯霉素等药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%.研制的快速检测试纸可以在10 min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合STR残留的现场快速检测.     

免疫检测试纸条法检测西瓜子中的瓜类果斑病菌

将西瓜子进行表面消毒后破碎,用无菌水于4℃浸泡4h,取300μL浸提液加入250mL细菌液体培养基中,28℃150r/min培养3d,取培养液0.7mL与Agdia公司提供的瓜类果斑病菌检测试纸条样品浸提网袋中的缓冲液混匀,取混合液1mL用于免疫检测试纸条检测.该方法可有效检测出西瓜子中是否带有瓜类果斑病菌(Acidovorax avenae subsp.citrulli(Schaad et al.)Willems et al.).     

中国农科院推出新型转基因快速检测试纸条

<正>农业部日前印发了《2015年农业转基因生物安全监管工作方案》,建议充分利用试纸条等快速检测方法,降低成本,扩大监测范围。在该方案中,中国农科院油料作物研究所研制的新型转基因试纸条成为推荐使用的首选产品。据了解,农业部于2月初举办了首次转基因快速检测产品征集和测试验证现场会,中国农学院油料所研制的     

快速检测玉米种子发芽率方法研究

为检测玉米种子的发芽率,帮助农户完成种子前期管理,相关人员应提高对快速检测玉米种子发芽率方法的关注。围绕快速检测玉米种子发芽率,以种子活力测定法及浸种时间阶梯法作为对象开展深入研究,为相关人员提供借鉴。     

玉米种子纯度快速分子检测技术研究

种子纯度检测是产品质量检测的中心,检验种子纯度是促进农业发展和维护种业秩序的必经之路。随着信息化发展,种子纯度快速分子检测技术不断更新优化,如何使用现代化纯度快速分子检测技术验证玉米种子纯度是值得思考的问题。文章阐述了机器视觉技术、分子标记技术、DNA快速提取法,分析了玉米种子纯度快速分子检测技术应用方法,结合试验结果得出玉米种子纯度快速分子检测技术步骤以及梯度要求。     

孟山都转基因玉米种子进入我国广西

目前,孟山都公司在中国的主打产品是玉米种子,即使是玉米种子也只在广西开始了试点,像吉林等玉米主产区还没有覆盖到一,“我们目前还不生产转基因水稻种子,但已经与科研院所开始了合作,并计划在未来5年内投入1000万美元进行相关研发,将来转基因水稻种子对待中国农民也是这样的政策．”孟山都公司大中华区总裁MikeFrank说.     

多重RT-PCR快速检测转基因油菜

全球转基因油菜的数量和种类日益增多,其所带来的潜在风险也备受人们的关注,迫切需要开发一套精准、高效、便捷检测转基因油菜的技术体系。本研究针对花椰菜花叶病毒35 S启动子(pCaMV 35S)、膦丝菌素乙酰转移酶(bar)、5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(epsps)3个目标基因的序列,以及油菜内源基因cruciferinA (CruA)序列设计四重实时荧光定量聚合酶链式反应(Multiplex real-time fluorescence quantitative,PCR)特异性强的引物和多重荧光探针。通过对多个转基因油菜材料验证,结果表明该方法检测特异性强,重复性好,4个基因的扩增效率都在90%～105%之间,标准曲线相关系数R2都大于0.99。转基因成分bar,epsps和pCaMV35S的检出限为0.1 ng/μL,内参基因CruA的检出限为0.01 ng/μL。本研究建立了一种能快速、高效、准确检测转基因油菜四重实时荧光定量PCR技术的检测体系。     

克伦特罗残留GC-MS检测方法的建立及对自制试纸条性能的确证

建立了猪尿液中盐酸克伦特罗（CL）残留的GC-MS检测方法,并对自主研制的CL残留快速检测免疫金标试纸条（CL-Strip）进行了比较分析。结果表明,GC-MS的检测限为0.5ng/ml,CL-Strip的检测限为1.0ng/ml;CL-Strip与GC-MS两者的加标测定实验结果完全一致;用CL-Strip检测出的100份阴性尿样和18份阳性尿样,与GC-MS检测结果完全一致。说明CL-Strip与GC-MS同样灵敏、准确、稳定,由于CL-Strip具有简便、直观、快速、敏感、特异、准确等优点,建议在CL残留快速检测中推广应用。     

双重检测马铃薯X和Y病毒试纸条制备技术研究

为了实现在马铃薯种薯生产田现场同时快速检测马铃薯X（PVX）和Y病毒（PVY）,利用胶体金标记和免疫层析技术研制了PVX-PVY双重检测试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,在波长526nm处有最大吸收值,金颗粒直径约25nm。同时标记PVX和PVY兔多克隆抗体,将抗体标记物喷射于玻璃纤维纸上,作为金标垫。将PVX和PVY抗体分别划线于硝酸纤维素膜上作为检测线,将羊抗兔抗体划线于硝酸纤维素膜上作为质控线,制备胶体金试纸条。结果表明,研制的双重试纸条能够在2min之内同时检出PVX和PVY。PVX病汁液检测稀释限度可达10⁶倍（W/V）,PVY可达10⁵倍（W/V）,其中对PVX检测更灵敏。用其他4种常见病毒（PVS、PLRV、PVA和PVM）检测,未出现交叉反应。在田间采集马铃薯叶片,分别利用试纸条与DAS-ELISA检测,结果一致性非常高。由此可知,该试纸条具有操作简便、反应快捷的特点,特别适用于田间及口岸一线对于马铃薯X和Y病毒的同时检测。     

转基因棉子油的快速PCR检测研究

 以棉子油为原料,探索出了一种快速、简便的转基因棉子油的PCR检测方法。该方法能从15 mL棉子油中提取0.4 μg高纯度DNA,用于PCR检测。针对18S rDNA、CaMV35S、NOS、NPTⅡ和Cry1A（c）等基因进行了棉子油中内外源基因PCR检测,分别扩增出不同的目的片段。本研究为油脂类产品的外源基因检测提供了可行方法。     

美国提出解除新转基因大豆和玉米种子管制

<正>据中华粮网消息,美国农业部下属动植物卫生检验局近日发布声明,提出解除三种新的转基因大豆和玉米种子的管制,并邀请公众对此提建议,这是转基因作物在美国批准种植前的最后步骤之一。美国动植物卫生检验局表示,此次涉及的包括两种大豆和一种玉米种子,都由陶氏益农公司研发,它们对多种除草剂具有耐受性,包括2,4-D除草剂。抗2,4-D除草剂种子之所以必要,是因为美国的许多杂草已对其他除草剂产生     

玉米种子DNA快速提取及杂交种纯度的快速鉴定

本研究用玉米杂交种渝单8号及其双亲的干种子作为材料,使用NaOH溶液研磨玉米种子胚,提取基因组DNA,并利用多重PCR扩增进行玉米杂交种子的纯度鉴定.结果表明,利用玉米种子快速提取方法获得的DNA可进行正常的SSR扩增,并且从20对玉米核心引物中筛选出了8对扩增谱带呈双亲互补型的引物,将其中3对引物YISSR、phi072和phi299852组合起来扩增,扩增谱带清晰可辨,对渝单8号杂交种子的纯度进行准确鉴定.初步表明利用多重PCR技术鉴定玉米种子纯度是可行的,不仅简便快速,而且降低了检测成本.     

农作物转基因商业化应用及检测方法综述

我国在玉米、水稻等主要农作物转基因研究方面取得了较大的进展。农作物转基因监管需要高效、准确的检测技术;而我国农作物转基因快速检测技术尚不成熟。本文总结了当前农作物转基因检测的相关技术,为快速高效的转基因检测技术研究提供参考。     

饲料及饲料添加剂转基因成分检测及对策分析

饲料及饲料添加剂转基因检测是转基因检测难点之一.该文就深圳出入境检验检疫局对饲料及饲料添加剂的检测情况进行了总结和分析,并对该类样品转基因检测存在的问题及其相应的对策进行了探讨,对今后饲料及饲料添加剂的转基因检测工作有参考和借鉴作用.