饲料中间隔添加壳寡糖对仿刺参生长、非特异性免疫和抗病力的影响

壳寡糖是良好的免疫增强剂,但在水生动物的应用还十分有限。本研究通过间隔投喂方式研究壳寡糖对仿刺参生长性能、非特异性免疫能力、消化能力、组织学和抗病力的影响。实验挑选体质量(18.51 ± 0.28)g仿刺参,对照组饲喂基础饲料,实验组以3天1次的饲喂频率饲喂含0.5%的壳寡糖饲料,其余时间饲喂基础饲料,进行8周的养殖试验后,测定该饲喂方式下仿刺参的生长性能、非特异性免疫能力、肠道消化酶、肠道和呼吸树组织学以及对灿烂弧菌的抗病力。结果显示,3天1次的饲喂频率下,仿刺参特定生长率和存活率几乎未受影响,但显著提高了脏壁比和肠壁比(P < 0.05);在免疫指标方面,显著提高了仿刺参体腔细胞的吞噬活性和呼吸爆发能力(P < 0.05),以及体腔细胞和肠道的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)和总一氧化氮合酶(T-NOS)的活性(P < 0.05),其中肠道AKP和LZM活性分别提高了70.06%和156%,且acp、akp、lzm基因表达量显著提高(P < 0.05),其中肠道akp和lzm基因表达量分别提高了13.47%和22.36%;抗氧化指标结果显示,显著提高了仿刺参体腔细胞过氧化氢酶(CAT)活性(P < 0.05),而体腔细胞和肠道的丙二醛(MDA)含量无显著差异(P > 0.05);组织学结果显示,该饲喂频率显著提高了前肠肌肉层厚度和浆膜层厚度,中肠和后肠的皱襞高度和宽度;灿烂弧菌(Vibrio splendidus)攻毒结果显示,实验组仿刺参的相对保护率达到66.67%。综上,3天1次的饲喂频率能够一定程度上提高仿刺参的生长性能,非特异性免疫酶活性,明显改善肠道结构,研究结果可为壳寡糖对仿刺参作用机制的研究及投喂频率的确定提供数据支撑和理论依据。     

不同免疫增强剂对仿刺参肠道消化酶活性及组织结构的影响

在15±0.5℃条件下,向初始体质量为(21.00±2.00)g的仿刺参(Apostichopus japonicas Selenka)体内注射400μL(质量浓度为1.2 mg·mL-1)几种免疫增强剂(黄芪多糖、枸杞多糖、黄柏提取物、苦参提取物、党参提取物、菊粉、天蚕素、神曲提取物、山楂提取物),第1、3、5d时测定仿刺参肠道消化酶活性,第5d时制作前肠组织切片,研究不同免疫增强剂对仿刺参肠道消化酶活性及组织结构的影响。结果表明,在注射免疫增强剂后第3d,菊粉组仿刺参肠道蛋白酶活性最高,达15.16μg·g-1·min-1,与对照组7.07μg·g-1·min-1差异显著(P<0.05),而黄柏提取物抑制了蛋白酶活性;神曲组淀粉酶活性达72.57 U·dl-1,与对照组(53.2 U·dl-1)差异显著(P<0.05);菊粉和山楂提取物对仿刺参肠道纤维素酶活性影响显著(P<0.05),其他处理组与对照比较无明显变化(P>0.05);黄芪多糖组褐藻酸酶活性最高,达2.06μg·g-1·min-1,其次是菊粉组。在养殖试验期间淀粉酶比活力变化趋势较稳定,纤维素酶次之,褐藻酸酶和蛋白酶变化幅度较大。各种免疫增强剂对仿刺参肠道组织结构的影响不同,黄柏、苦参提取物损伤了组织结构,而黄芪多糖、菊粉等促进了细胞分泌。     

四种因子对仿刺参幼参牛长的影响

以益生菌、水温、寡糖和配合饲料为因素,仿刺参幼参的特定生长率为指标,通过L9(34)正交试验方法,研究4种因子对仿刺参幼参生长的影响,获得各因子的最佳组合参数.试验结果显示,4种因子对幼参特定生长率的影响均极显著(P＜0.01),影响因素为益生菌＞水温＞寡糖＞配合饲料.最佳的因素搭配为益生菌5 mL/m3,水温24℃,壳寡糖+褐藻胶寡糖混合0.002 g/L,幼参B型配合饲料.各因素水平对仿刺参幼参特定生长率影响为益生菌5 mL/m3＞15 mL/m3＞10 mL/m3,水温24℃＞17℃＞10℃,壳寡糖+褐藻胶寡糖＞褐藻胶寡糖＞壳寡糖,幼参饲料B型＞幼参饲料加强型＞稚参饲料.     

黄芪多糖对仿刺参非特异性免疫功能的影响

向刺参体腔中注射相同体积(500 μl)的无菌黄芪多糖溶液后第1、3、6 d,测定体腔液中溶菌酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶活性及补体C3的含量,研究黄芪多糖对刺参免疫系统的影响.每头刺参多糖含量分别达0.2、0.4、0.6 mg,溶菌酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶活性及补体C3含量均在注射后第3 d达到最高,且前3种指标以0.6 mg/头剂量组最高,分别达到232.25 U/ml,45.1 U/ml,966.5 nkat/L;C3含量则以0.4 mg/头剂量效果最好,达到0.09 g/L.经SPSS软件分析,均与对照组差异显著(P<0.05),表明黄芪多糖具有增强刺参免疫功能的作用.     

低聚果糖对仿刺参生长及生长免疫因子的影响

在基础饲料中分别添加0(对照组)、0.20%、0.40%、0.60%、0.80%、1.00%的低聚果糖,制作6组等氮、等能的试验饲料,投喂初始体质量约20 g的仿刺参14周,研究低聚果糖对仿刺参生长、体成分、机体生长免疫因子及肠道糖代谢酶活力的影响。试验结果表明,低聚果糖添加量对仿刺参的成活率无显著影响(P>0.05),但显著影响了仿刺参的质量增加率和特定生长率(P<0.05);仿刺参体壁基本成分不受低聚果糖添加量的影响(P>0.05),总糖含量随低聚果糖的升高而升高(P<0.05);体壁中甘氨酸、半胱氨酸及精氨酸含量随低聚果糖含量的增加呈先升后降的趋势,分别在0.40%、0.50%、0.80%组达到最高,显著高于0%组(P<0.05);体腔液中生长激素、补体C3、补体C4及一氧化氮合酶含量均随低聚果糖的升高呈先升后降的趋势,但肠道丙酮酸激酶和己糖激酶活力均随低聚果糖的升高而升高(P<0.05)。以质量增加率为评价指标,经二次曲线回归分析,仿刺参饲料中低聚果糖的适宜添加量为0.55%。     

维生素C剂型和剂量对仿刺参幼参免疫的影响

水温11.0～14.0 ℃,将平均体质量2.29 g的仿刺参幼参随机放入39个容水50 L的塑料水槽中,投喂以玉米蛋白为蛋白源,分别添加0、500、1000、2000、4000 mg/kg VC-2-三聚磷酸酯、 VC-棕榈酸酯和VC-磷酸酯镁的13种饲料.90 d的饲养结果表明,摄食添加VC-2-三聚磷酸酯、VC-磷酸酯镁和VC-棕榈酸酯饲料幼参的体腔液中平均过氧化物歧化酶(SOD)的活性分别为0.514、0.458 U/ml 和0.438 U/ml,分别比对照组(0.391 U/ml)高30.18%、17.31%和12.21%;平均溶菌酶活性分别为5.435、5.297 U/ml 和4.161 U/ml,分别比对照组(2.699 U/ml)高101.39%、96.29%和54.17%;摄食添加VC-2-三聚磷酸酯饲料的幼参体腔细胞中溶酶体膜的平均稳定性最高(90.60%)、VC-棕榈酸酯(87.52%)次之,VC-磷酸酯镁最低(85.91%),分别比对照组(79.16%)高14.45%、10.56%和8.53%.提高免疫力效果,VC-2-三聚磷酸酯> VC-磷酸酯镁> VC-棕榈酸酯.     

两种饲料对海上筏式吊笼养殖仿刺参生长的影响

以福建冬季海上筏式吊笼养殖的仿刺参为对象,采用传统海带饲料和市面销售的凝胶状海参配合饲料对三种规格的仿刺参幼参(平均体质量分别为105.57、73.15和52.89 g)进行了为期60 d的投喂试验,比较了两种饲料对仿刺参幼参生长的影响。结果表明,传统海带饲料投喂组大、中、小三种规格仿刺参的特定生长率分别为(0.69±0.04)、(0.87±0.05)和(0.99±0.02)%·d-1,凝胶状海参配合饲料投喂组的特定生长率分别为(0.65±0.03)、(0.86±0.05)和(0.81±0.10)%·d-1。传统海带饲料投喂组小规格仿刺参的平均个体增重率和特定生长率均显著大于凝胶状配合饲料投喂组(P0.05),而两种饲料投喂组大、中规格间的差异不显著。因此,传统海带饲料可用于仿刺参海上筏式吊笼养殖生产,而凝胶状海参配合饲料可作为传统海带饲料的辅助饲料。     

仿刺参对盐度的耐受能力研究

设置不同的盐度梯度(10～45),根据仿刺参的存活、溃烂、着壁状态、活力、排便和疣刺伸展情况,进行仿刺参的耐盐范围和耐盐能力分析.结果表明,仿刺参适宜生长的盐度为20～35,最适生长盐度为25～30.研究发现,仿刺参在盐度为15和40下生长一段时间后,就会逐步适应其所生长的环境.     

混合微生态制剂对幼刺参生长免疫的影响

将3种微生态制剂产品（免疫增强剂,复合芽孢杆菌,EM菌）以不同浓度（0,2μl/L或mg／L,4μl/L或mg／L）按L9（3^4）正交设计法配制成9种混合制剂进行刺参饲养试验。结果表明,3种菌制剂对幼刺参生长的影响显著性的顺序为：免疫增强剂〉复合芽孢杆菌〉EM菌;对酸性磷酸酶影响显著性的顺序为：免疫增强剂〉EM菌〉复合芽孢杆菌;对过氧化氢酶影响显著性的顺序为：免疫增强剂〉复合芽孢杆菌〉EM菌;对溶菌酶影响显著性的顺序为：复合芽孢杆菌〉EM菌〉免疫增强剂。     

Effects of light intensity on daily activity rhythm of juvenile sea cucumber,Apostichopus japonicus (Selenka)

Eight light‐intensity treatments (natural light, continuous darkness, and 15, 30, 60, 125, 250 and 500 lx under LD 12:12 cycle) were used to investigate the effects of light intensity on the daily activity of 30.27±3.08 g sea cucumber Apostichopus japonicus (Selenka). Cyclic nocturnal activity patterns of behaviour were observed at different light intensities in the range of 15–500 lx under LD 12:12 cycle. And an ongoing nocturnal cycle persisted in DD cycle for up to 8 days, but longer feeding time and less marked rhythm occurred at continuous darkness. Under poor light conditions (I<5.18 lx), the daily activity rhythm of A. japonicus was governed by an innate biological clock and the effect of light intensity was not significant among different treatments. And more individuals tended to retreat to shelters (from 56.04% to 91.83%) with the increase of light intensity within the weak light condition (from 5.18 to 278 lx). However, the daily behaviours of A. japonicus were influenced under strong light conditions (>278 lx). Less than 8.17% individuals kept actively feeding and the proportion was not decreased with the increase of light intensity.     

不同密度的仿刺参与皱纹盘鲍和紫贻贝混养试验

在水温15.0～23.0℃、容积50L(45cm×31cm×30cm)的塑料水槽中,分别放养3组共15头单重2.24g的仿刺参和3个单重19.99g的紫贻贝,再分别混养2组共5个单重8.75g的皱纹盘鲍,定期投喂海带。120d的饲养表明,混养组间鲍的特定生长率差异不显著(P>0.05),但显著低于单养组(P<0.05),混养C组鲍的成活率显著低于其他组(P<0.05)。混养组中海参的成活率差异不显著(P>0.05),但生长速度随密度增加而降低(P<0.05)。将海参产量计算在内,3种密度下,鲍的饲料系数分别降低11.84%、4.03%和4.51%;海参的放养密度为3个/箱时,鲍的饲料系数接近单养鲍;紫贻贝生长停滞,成活率随海参密度的增加而降低。     

Effects of light intensity on larval development and juvenile growth of sea cucumber Apostichopus japonicus

The growth rate, survival rate, development and setting rate of larval sea cucumber Apostichopus japonicus were measured under four light intensities (0, 50, 500 and 2,000 lx), and the growth rate and metabolism of the juvenile sea cucumbers were investigated under four light intensity treatments (0, 100, 1,000 and 2,500 lx). The light requirements (i.e. intensity) of the sea cucumber changed as they grew. Better growth performance, development and survival rate were observed in embryos and larvae under 500 lx treatment. However, reduced light intensity (50 lx) increased the settlement rate of the larvae. The highest specific growth rate occurred in juvenile sea cucumbers under 1,000 lx. The sea cucumbers in this group also had the lowest oxygen consumption rate and ammonia excretion rate, but the highest O:N ratio, indicating that the optimal light intensity for the juvenile sea cucumber culture was 1,000 lx. Therefore, appropriate light intensities were suggested to provide larval and juvenile sea cucumbers with better growth and development conditions.     

不同光照强度对刺参幼参生长的影响

采用室内受控的实验方法研究了不同光照强度对刺参幼参生长的影响。实验设暗光、微强光、强光3个光照处理,同时每个光照处理组分别投喂两种饵料(人工配合饲料、人工配合饲料加底栖硅藻)。研究结果表明,不同光照强度下,幼参的生长差异显著(P<0.05),每种饵料处理下强光处理组幼参的特定生长率和日增重明显高于暗光处理组,而相同光照强度下两种饵料处理对幼参生长的影响差异不显著(P>0.05)。3个光照处理下幼参的特定生长率平均分别为0.26%、0.63%、0.98%/d,日增重为0.53、1.39、2.26 g/d。     

即食海参加工工艺的研究

传统工艺加工的海参干制品烹调时需要水发,本试验拟解决由于干制品给食用带来的不便,以冷鲜海参作为研发对象,从原料的特性和功能入手,利用海参特殊的营养结构和组分等特点,采用了科学合理的加工技术,对传统的海参加工方法进行了全面的技术改造,通过正交试验对焖煮、浸渍等关键技术的探讨,成功的研制出即食海参间断式加热焖制工艺,且焖制水温为90℃、焖制时间为4 h、循环次数为3次,加工的成品即食海参不但肉质富有弹性、色泽较好、风味独特,而且最大程度地减少了营养成分损失。     

仿刺参肠道潜在益生菌对稚参生长、免疫及抗病力的影响

以稚参期仿刺参为研究对象,探讨了分离自仿刺参肠道的潜在益生菌在稚参养殖中的应用效果。采用16S rDNA序列分析法将3株潜在益生菌分别鉴定为Bacillus sp.(GSC-1)、Bacillus sp.(GSC-2)和Enterococcus sp.(GSC-3)。分别以10³、10⁵或10⁷ CFU/mL的GSC-1、GSC-2、GSC-3或灿烂弧菌浸浴稚参以检验潜在益生菌对稚参期仿刺参的安全性,7 d后各潜在益生菌浸浴组的稚参成活率均高于同浓度的灿烂弧菌处理组;GSC-1和GSC-3在实验浓度下对稚参成活率无显著影响(P>0.05),可作为稚参的潜在益生菌;而10⁷ CFU/mL GSC-2浸浴组稚参的成活率显著低于对照组(P<0.05),因此GSC-2不适合作为稚参的潜在益生菌。将潜在益生菌GSC-1和GSC-3以10⁹ CFU/g的比例与鼠尾藻粉混合后饲养稚参20 d,潜在益生菌处理组的稚参成活率、特定生长率和变色率均高于对照组,其中GSC-1处理组稚参的成活率和变色率显著提高(P<0.05),GSC-3处理组稚参的成活率和特定生长率显著提高(P<0.05);与对照组相比,潜在益生菌GSC-1和GSC-3均有效增加了稚参的总菌数(P<0.05),GSC-1还有效降低了稚参的弧菌数(P<0.05);潜在益生菌GSC-1和GSC-3均可显著提高稚参体组织中的酚氧化酶和溶菌酶活力(P<0.05),GSC-1亦显著提高了其酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活力(P<0.05);GSC-1和GSC-3处理组稚参的抗灿烂弧菌感染能力均高于对照组,其中GSC-3显著降低了灿烂弧菌攻毒后稚参的死亡率(P<0.05)。综上所述,潜在益生菌GSC-1和GSC-3对稚参期刺参安全无毒,能够促进稚参的健康生长并提高其抗病能力,因而GSC-1和GSC-3均可作为益生菌应用于稚参养殖中。     

双螺杆挤压对低值海参多肽提取率及抗氧化活性的影响

海地瓜(Acaudina molpadioides)属低值海参产品,为了提高其使用价值,本研究以海地瓜为原料,利用双螺杆挤压辅助不同浓度亚硫酸钠(Na2SO3)处理,并对挤出物多肽提取率、游离巯基含量和蛋白质溶解度进行测定;利用DA201-C型大孔吸附树脂对挤出物多肽进行分离纯化,并对多肽纯化组分的分子量分布和抗氧化能力进行测定。结果显示,双螺杆挤压辅助3.0% Na2SO3处理组多肽提取率、游离巯基含量和蛋白质溶解度分别为(57.12±0.62)%、(110.32±0.07)%和(28.72±0.13)%,较空白对照组(control check, CK)分别显著提升(7.66±0.35)%、(105.32±0.01)%和(4.91±0.15)% (P<0.05);粗肽经纯化得到纯化组分Ⅰ(1000~3000 u)和纯化组分Ⅱ(<1000 u)。CK组、双螺杆挤压辅助3.0% Na2SO3处理组及其经分离纯化后得到的的纯化组分Ⅰ、Ⅱ海地瓜多肽的DPPH自由基清除率的IC50值分别为25.51、12.72、6.58和9.02 mg/mL,对超氧阴离子自由基清除率的IC50值分别为25.56、13.51、11.87和8.44 mg/mL。纯化组分Ⅰ在浓度为80 μg/mL时,人正常肝细胞(human normal liver cell, LO2)细胞存活率较损伤组最大提高(20.33±0.41)%;纯化组分Ⅱ在浓度为20 μg/mL时,LO2细胞存活率较损伤组最大提高(17.07±1.18)%。综上所述,双螺杆挤压辅助亚硫酸钠处理海地瓜提高了多肽的提取率,并增强了海地瓜多肽抗氧化活性。     

Effects of dietary lipid level on growth performance,body composition and digestive enzymes activity of juvenile sea cucumber,Apostichopus japonicus

A feeding trial aimed to determine the effects of dietary lipid level on growth performance, body composition and digestive enzymes activity of juvenile sea cucumber, Apostichopus japonicus. Diets with six crude lipid levels (1.9, 13.8, 29.1, 43.6, 59.6 and 71.6 g kg^?1) were fed to sea cucumbers (initial weights 0.65 ± 0.01 g) at a density of 30 juveniles, once a day. After 60 days, body weight gain (BWG), specific growth rate (SGR), feed intake (FI) and protein efficiency ratio (PER) decreased with increasing dietary lipid levels. The sea cucumbers fed 1.9 g kg^?1 crude lipid showed significantly higher (P < 0.05) BWG than those of the sea cucumbers fed 59.6 and 71.6 g kg^?1 crude lipid. Intestinal protease and lipase activities generally increased with increasing dietary lipid levels. Eicosapentaenoic acid (EPA) content of body walls generally increased with increasing dietary lipid levels. Docosahexaenoic acid (DHA) content of body walls reached the maximum value at a dietary lipid level of 13.8 g kg^?1. N‐3 highly unsaturated fatty acid content followed the same pattern of DHA. According to the growth performance and body composition of sea cucumbers, it can be indicated that the optimum dietary lipid level for juvenile sea cucumbers is between 1.9 and 13.8 g kg^?1.     

刺参机械去脏工艺的试验研究

刺参(Stichopus aponicus)去脏是刺参前处理加工的重要环节.目前刺参去脏加工多采用手工开腔去脏的方式.为提高刺参前处理加工效率,实现机械化加工,以辽宁大连、浙江嵊泗出产的刺参为试验对象,利用刺参特有的排脏生理特性,设计机械模拟装置(滚筒机构和振动机构)对刺参进行刺激.试验结果显示,滚动和振动刺激都能使刺参排脏,排脏率达到90%.刺激强度是刺参机械去脏的重要工艺指标,直接影响刺参机械去脏的效率.     

Vitamin E requirement of sea cucumber (Apostichopus japonicus) and its' effects on nonspecific immune responses

This feeding trial was conducted to determine the vitamin E requirement of sea cucumber (Apostichopus japonicus) and to study the effects of vitamin E on nonspecific immune parameters. Commercial sea cucumber diets supplemented with 0, 50, 100, 200, 500 or 1000 mg kg^?1 vitamin E were fed to juvenile sea cucumber (7.96 ± 0.01 g) for 60 days. Specific growth rate and total coelomocyte counts were maximized in sea cucumber fed diets supplemented with 100 mg kg^?1 vitamin E. Reactive oxygen species production was maximized at 50 mg kg^?1 vitamin E, whereas superoxide dismutase activity was the highest in sea cucumber fed diets supplemented with 100 mg kg^?1 vitamin E. The vitamin E concentration in the body wall of the sea cucumber increased as the vitamin E level in the diet increased. Analysis of specific growth rate and total coelomocyte counts of the sea cucumber indicated that 88–92 mg kg^?1 vitamin E is required for maximal growth and nonspecific immune responses of A. japonicus and that 114.7 mg kg^?1 vitamin E is required to minimize lipid peroxidation levels.