空肠弯曲菌PEB1A蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

为了建立检测血清中空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）抗体的间接ELISA方法,试验通过PCR扩增并克隆空肠弯曲菌PEB1A基因,构建原核表达载体pET32a-PEB1A,将该表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,诱导表达获得约47 ku的可溶性目的蛋白,通过Western blotting证明所表达的重组蛋白具有良好的生物学活性。以纯化后的重组蛋白作为包被抗原,建立空肠弯曲菌抗体间接ELISA方法,对其特异性、敏感性、重复性进行检测。结果表明,本试验建立的空肠弯曲菌抗体间接ELISA检测方法临界值为0.3424,本方法仅与空肠弯曲菌阳性血清发生特异性反应,与其他抗血清无交叉反应,具有较强的特异性,批内、批间的重复性试验变异系数均<5%,具有较好的重复性和稳定性。该方法的建立可应用于血清中空肠弯曲菌抗体的快速检测,为进一步防制空肠弯曲菌腹泻提供依据。     

酵母多糖对空肠弯曲菌感染獭兔生产性能、载菌量和抗菌肽表达的影响

试验旨在研究酵母多糖对空肠弯曲菌感染獭兔生产性能、载菌量、盲肠和皮肤抗菌肽的影响。选取断奶獭兔180只,随机分为5组,每组6个重复,每个重复6只。对照组饲喂基础日粮,其他4组空肠弯曲菌感染,并于基础日粮中分别添加0、200、400、600 mg/kg酵母多糖。饲养试验起始日诱导空肠弯曲菌感染,饲养试验持续35 d。结果显示,空肠弯曲菌感染降低了獭兔结束体重、日增重和日采食量,提高了料重比（P < 0.05）,添加酵母多糖改善了这些指标（P < 0.05）,且日增重和料重比达到了对照组水平。酵母多糖降低了獭兔盲肠食糜、皮肤、肝脏、脾脏的空肠弯曲菌载菌量（P < 0.05）。空肠弯曲菌感染诱导内源性抗菌肽的Cathelicidin、Galectin-3和LEAP2基因表达量显著上调（P < 0.05）,对DEFA4基因无显著影响,而添加酵母多糖对基因表达量具有进一步上调作用（P < 0.05）。酵母多糖添加剂量与结束体重、日增重呈现线性和平方效应关系（P<0.05）;与皮肤、肝脏和脾脏载菌量呈现线性效应（P<0.05）;与盲肠和皮肤抗菌肽Cathelicidin和Galectin-3基因表达水平呈现线性效应（P<0.05）;与盲肠抗菌肽Galectin-3、LEAP2和DEFA4基因呈现平方效应（P<0.05）。表明日粮添加酵母多糖可以降低空肠弯曲菌感染獭兔组织载菌量,提高内源抗菌肽活性,不影响獭兔生产性能。     

空肠弯曲菌FliD蛋白的原核表达与抗原性分析

为获得空肠弯曲菌FliD蛋白并分析其抗原性,研究扩增空肠弯曲菌标准菌株11168 fliD基因并构建原核表达质粒pColdⅠ-fliD和pGEX-6p-1-fliD,将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达并纯化FliD重组蛋白;纯化后的His-FliD蛋白免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后收集小鼠血清,间接ELISA结果显示小鼠多抗血清效价为25 600,Westernblot结果显示多抗血清能够与重组蛋白His-FliD特异性结合。研究成功表达空肠弯曲菌FliD蛋白并初步分析其抗原性,为进一步研究空肠弯曲菌与宿主间相互作用及FliD蛋白作为候选亚单位疫苗奠定理论基础。     

FHIT基因和Fhit蛋白在犬淋巴瘤细胞系中的畸变

空肠弯曲菌是人类主要食源性病原菌之一，其主要的储存宿主是家禽。据研究空肠弯曲杆菌主要定植于肉仔鸡的盲肠。从7个鸡群采集20份样本来检测弯曲杆菌，结果表明，平均发病率为65％。本试验还研究了48株空肠弯曲菌对INT～407细胞的黏附力和入侵力。用检测庆大霉素抗性的INT-407细胞对从盲肠内容物分离的48株空肠弯曲菌进行分析，盲肠分离菌株呈现出广泛的黏附力和入侵力，且菌株间的黏附力和入侵力呈显著相关（P〈0．01）。用PCR方法检测到空肠弯曲杆菌的毒力相关基因dnaJ、cadF、pldA、ciaB，检出率分别为100％、76％、31％、41％，     

空肠弯曲菌病流行病学研究进展

空肠弯曲菌（campylobacterjejuni）是近十几年来被认识的世界范围广泛流行的人兽共患病原菌,主要引起人类急性肠炎和食物中毒［1－2］,该菌可引起肠炎,并可伴发反应性关节炎、瑞特氏病和格林巴列氏综合症等［5］免疫损伤性疾病。在兽医学上,弯曲菌一向被认为是动物的病原体,可引起家畜流产不孕、乳房炎及幼畜禽腹泻和家禽肝炎［7,16,17］。越来越多的人认识到空肠弯曲菌是人类肠炎的重要病原菌,英美流行病学研究表明本菌作为肠炎的病因,仅次于沙门氏菌、志贺氏菌,在美国每年用于此病的费用为7—14亿美元［7］（Morrisong,1985…     

禽弯曲菌病的最新研究进展

禽弯曲菌病的最新研究进展吴传清，谢三星（安徽农学院２３００３６）禽弯曲菌病是由弯曲菌属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）空肠弯曲菌（Ｃ．Ｊｅｊｕｎｎｉ）引起的一种肠道传染病。本病以腹泻和肝炎变化为主要特征。在引起人类食物中毒的细菌中，由弯曲菌引起人们肠炎...     

部分省市鸡群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的流行状况分析

本研究采用多重PCR方法对我国部分省市不同品种、不同类型的鸡群进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行病学调查。结果发现,在3132份鸡肛门棉拭样品中,检测出583份空肠弯曲菌阳性样品,平均阳性率18.61％;48份结肠弯曲菌阳性,平均阳性率1．53％。鸡饲养环境样品217份,6份空肠弯曲菌阳性,阳性率2．76％。不同鸡群感染率悬殊较大,空肠弯曲菌阳性率从0％-73．3％、结肠弯曲菌阳性率从0％-7．4％。30个鸡群中空肠弯曲菌阳性率为86.67％,结肠弯曲菌阳性率43．33％。本调查结果表明我国鸡群中空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的流行呈现多样化。     

禽源空肠弯曲杆菌ERIC-PCR分型及毒力因子研究

[目的] 通过对禽源空肠弯曲杆菌分子分型和毒力研究,了解禽源空肠弯曲杆菌在禽肉产品生产过程中的主要传播途径和携带的主要致病因子。[方法] 对从家禽养殖场、屠宰场等采集的720份泄殖腔拭子和禽肉表面拭子样品分离的311株空肠弯曲杆菌进行ERIC-PCR分型和16种毒力因子检测。[结果] 禽源空肠弯曲杆菌的分离率为43.19%;肉鸡生产链中空肠弯曲杆菌沿生产链传播,且有优势菌株型;90%以上分离菌株携带11种毒力基因。[结论] 肉鸡生产链中空肠弯曲杆菌存在水平传播现象,且没有外源性污染;16种毒力基因中,14种毒力基因的携带率均在50%以上。加强禽源空肠弯曲菌的监测是控制空肠弯曲菌的前提,对公共卫生具有重要意义。     

空肠弯曲杆菌病在食物链的传播路径

空肠弯曲杆菌是一种广泛分布的人兽共患病原体,它是发达国家细菌性胃肠炎的主要病原,系统发育研究显示,对人类有致病性的弯曲杆菌基因型最可能来自于非家畜来源。英国兰卡斯特大学采用多位点测序分型技术对1231个来自病人的空肠弯曲杆菌分离株进行了鉴定。他们模拟了空肠弯曲杆菌的DNA序列进化以及细菌在宿主和环境闻的传播情况。结果表明,高达97％的散发病例均归结于提供肉产品的农场动物。     

家鸭胴体空肠弯曲菌及沙门氏菌污染情况调查

作者曾在《畜牧与兽医》1990年第4期发表了“家鸭空肠弯曲菌带菌率的研究”一文,对合肥市禽蛋公司宰杀鸭盲肠内容物中空肠弯曲菌(以下简称空弯菌)带菌率进行了调查。鸭盲肠空弯菌检出率平均为77.3%。     

多重PCR-变性高效液相色谱检测食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌

本研究应用多重PCR反应(mPCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测方法.以编码嗜热弯曲菌属的16S rRNA基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码结肠弯曲菌的cdt真基因为靶基因,选择3对引物,建立并优化了鉴别空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的mPCR体系,扩增产物分别为287 bp、159 bp和173 bp.采用22株细菌验证了该mPCR具有特异性.mPCR检测的灵敏度在DNA水平上达到空肠弯曲菌10pg/μL、结肠弯曲菌1 pg/μL;在人工模拟污染样品起始污染浓度为1.5个/mL时,42℃微需氧条件下培养24 h即可被检出.在随机采集的172份冷冻鸡肉类样品中,检出了18份样品为空肠弯曲菌阳性,7份样品为结肠弯曲菌阳性.本研究建立的mPCR-DHPLC方法可特异、灵敏地实现对空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测.     

弯曲杆菌能够垂直传播

感染了空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)的肉种鸡可通过受精卵将病菌传染给后代，但由于菌组织不能够在雏鸡中生长，此传播途径总是被切断。但最新研究报道，应用新技术探测到空肠杆菌垂直传播的可能性。研究者将种鸡及其后代隔离饲养，结果通过采用短可变区DNA测序法检测种鸡及其后代的新鲜粪便，发现种鸡及其后代感染了相同的空肠弯曲杆菌菌株。此资料首次为弯曲杆菌可垂直传播提供了证据。     

空肠弯曲菌对大环内酯类药物耐药性的产生、稳定及其分子机制

过去对空肠弯曲菌对大环内酯类药物耐药性的研究主要集中在不同来源或体外培养系的菌株方面。本研究用来自同一母系菌株的红霉素耐药（Ery（r））变异菌株同时进行体外和体内试验来研究空肠弯曲菌对大环内酯类药物耐药性的产生、稳定及遗传基础。给15日龄鸡接种低剂量Ery（r）变异菌株（MIC=32或64μg/mL）,然后持续暴露在低剂量泰勒菌素下,但没有出现耐更高剂量的Ery（r）变异菌株（MIC〉512μg/mL）。在缺乏大环内酯类药物选择压力的情况下,低剂量的红霉素耐药性在体内或体外都不稳定。但是,高剂量的红霉素耐药性在体内和体外都表现出显著的稳定性。69株被选Ery（r）变异菌株的核糖体序列分析表明特异性点突变（A2074G或者A2074C）在所有高耐药性Ery（r）变异菌株中都存在。在体外选择的Ery（r）变异菌株中没有观察到核糖体蛋白L4突变。但是,在体内选择的Ery（r）变异菌株中,在核糖体蛋白L4上发现了3种特异性突变：G74D、G57D、G57V。仅在体外选择菌株中发现了1株变异菌株,该变异菌株在核糖体蛋白L22的98位上插入了3个氨基酸,TSH。CmeABC外排泵的缺失显著降低了Ery（r）变异菌株的红霉素MIC值。结果表明,鸡中高度耐药性Ery（r）弯曲菌的出现是由多因素造成的,揭示了空肠弯曲菌大环内酯类耐药性的耐药剂量依赖的稳定性,也揭示了空肠弯曲菌在体内和体外利用外排泵及不同机制产生红霉素耐药性。     

空肠弯曲菌致病机理研究进展

空肠弯曲菌是一种人畜共患病病原菌 ,可以引起人和动物发生多种疾病 ,并且是一种食物源性病原菌 ,被认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要原因 ,对空肠弯曲菌的致病机理的研究越来越多。其致病因素包括粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制等四个方面 ,通过分子分子模拟机制可以引起最严重的并发症 -格林 -巴利综合征。空肠弯曲菌可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病。就空肠弯曲杆菌致病机理研究现状作了概述。     

山东省鸡源空肠弯曲菌喹诺酮类药物耐药机制研究

通过对采集于山东省肉鸡屠宰场的202株空肠弯曲菌进行喹诺酮类耐药分子机制的研究,包括7种可以移动耐药基因筛查,喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变检测和parC的筛查,确定了我国山东省鸡源空肠弯曲菌对喹诺酮类药物的耐药表型主要为gyrA中QRDR C-257-T突变所造成.并发现在空弯中存在于gyrA和gyrB基因上的部分沉默突变有着地域流行性特点.这些观察结果为解释我国食品动物源空肠弯曲菌耐药性现状,防控耐药空肠弯曲菌传播和流行提供基础数据.     

空肠弯曲菌荧光偏振抗体检测方法的建立

为建立血清中空肠弯曲菌抗体的荧光偏振检测(FPIA)方法,本研究对空肠弯曲菌的黏附蛋白PEB1A进行原核表达。Western blot鉴定显示该重组蛋白具有良好的抗原性;FITC标记空肠弯曲菌黏附蛋白PEB1A形成示踪物,通过确定示踪物的最佳反应浓度、反应时间及血清最佳稀释度,建立空肠弯曲菌的FPIA抗体检测方法。结果显示:本实验建立的空肠弯曲菌FPIA抗体检测方法的检测标准为FP值≥150m P为阳性,FP值150为阴性。该方法仅与空肠弯曲菌阳性血清发生特异性反应,与产肠毒素型大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、金黄色葡萄球菌的抗血清均无交叉反应,具有较强的特异性。该方法对抗体的最低检测效价为1∶80,批内和批间的重复性试验变异系数均小于10%,具有较好的重复性。表明本研究建立的FPIA方法为血清中空肠弯曲菌抗体的快速检测提供了一种可行的方法。     

猕猴腹泻的诊断和治疗浅谈

<正>腹泻是猕猴的一种常见病症,俗称"拉肚子",是指排便次数明显超过平日习惯的频率,粪质稀薄,水分增加,或含未消化食物及脓血、黏液。1病因有资料表明猕猴发生腹泻常与细菌,如福氏志贺氏菌、空肠弯曲杆菌、空肠弯曲菌和小肠结肠炎耶尔森菌或原生动物,如贾第鞭毛虫和隐孢子虫卵囊、内阿米巴虫等病原体有关。各种相关肠道病毒包括:轮状病毒(EV),杯状病毒(CV),诺洛病毒(NV),肠道病毒(EV),腺病     

鸡源弯曲菌毒力基因和耐药性的相关性

为了解鸡源弯曲菌分离株中毒力基因携带情况和耐药现状，探讨毒力基因的存在与耐药性的关系，本试验通过PCR方法对贵州省9个市(州)禽类养殖场分离的96株弯曲菌进行毒力基因检测，采用琼脂稀释法进行药敏试验，通过分类变量的关联性分析，计算关联系数(Cramer’s V)后分析毒力基因与耐药性的相关性。结果显示，在弯曲菌分离株中携带率位于前3名的毒力基因是sodB、cheY、fur(99.0%、96.9%、96.9%),ciaB、virB11的携带率均为0;空肠弯曲菌优势毒力基因谱为flaA-cadF-cheY-cdtA-cdtB-cdtC-fur-katA-sodB,结肠弯曲菌优势毒力基因谱为flaA-cadF-cheY-fur-katA-sodB,结肠弯曲菌毒力基因谱型多于空肠弯曲菌。空肠弯曲菌和结肠弯曲菌分离株耐药率位于前3名的抗菌药均为萘啶酸(88.2%、93.5%)、四环素(85.2%、90.3%)和环丙沙星(73.5%、87.0%);结肠弯曲菌对红霉素、阿奇霉素、链霉素、氯霉素、泰利霉素和克林霉素的耐药水平高于空肠弯曲菌。红霉素与cdtC基因，阿奇霉素与cdtA、cdtB基因，环丙沙...     

绵羊弯曲杆菌和李氏杆菌的诊疗方法

<正>1弯曲杆菌病据报道,在英国弯曲杆菌是引起绵羊流产的第三大主要原因,也是新西兰造成绵羊流产最常见的原因。胎儿弯曲杆菌和空肠弯曲杆菌均可引起母羊流产,其中前者是分离到的主要病原菌。1.1流行病学母羊感染弯曲杆菌病后通常无临床症状,但可随粪便排出病菌。空肠弯曲杆菌主要来自野生动物,而胎儿弯曲杆菌则来自带菌绵羊。牛的感染途径主要是通过交配传播,而绵羊则不同,主要是由肠道摄入。一旦发生流产,可横向传播给     

蛋鸡的弯曲杆菌感染

弯曲杆菌病已充分证明可危害肉食、海产食品和家禽产品的消费者.流行病学研究表明.空肠弯曲杆菌造成的散发感染,70％都和食用未熟透的禽肉有关。空肠弯曲杆菌可引起人类的小肠结肠炎。空肠弯曲杆菌虽然不能垂直传播,但却可通过污染的垫料而污染鸡蛋,该菌可在垫料上存活两星期之久.污染的食用蛋可能是人类感染的一个来源,对这一