抗独特型抗体的制备和应用

抗独特型抗体的制备和应用（浙江省农科院牧医所）王一成抗独特型（抗－Ｉｄ）抗体是近年来生物技术研究的一个新领域，无论理论研究还是应用研究，都非常活跃，尤其作为人、畜疾病防治的一种新制剂，已展示出十分诱人的前景。关于独特型的结构基础，抗独特型抗体的分类和...     

抗独特型抗体的研究进展

近年来,随着重组DNA技术及单克隆抗体的应用,开创了疫苗发展的新时代。DNA重组疫苗、人工合成多肽疫苗、亚单位疫苗等新型疫苗相继问世。但是,疫苗接种的基本原理并没有突破,仍然要使用外源性抗原物质刺激机体,使机体主动建立对该抗原的特异性免疫应答,而且,减毒的病原体有时会恢复其毒力,许多抗原,尽管可用重组DNA技术合成,但提纯上仍很困难,许多细菌和寄生虫的保护性抗原,其组成是碳水化合物或脂类,这些成分目前还不能用重组技术或多肽合成技术来制成。     

抗独特型抗体疫苗的研制及应用

近几年,有关抗独特型抗体疫苗(Anti-idiotype,下称抗-Id)的研究十分活跃,无论在理论上或应用上都有新的突破,许多实验室的研究结果显示,抗-Id疫苗有着诱人的发展和应用前景。本文就抗-Id的定义、抗-Id的制备、检测和应用作一简述。一、抗-Id的定义和类型免疫网络学说认为机体内存在着一个复杂的免疫网络系统,受病原体侵入或用抗原免疫后,机体会产生针对外来病原体或抗     

抗旋毛虫循环抗原单克隆抗体的制备及初步应用

为评价单克隆抗体用于检测旋毛虫循环抗原（ＣＡ）的应用价值，作者利用淋巴细胞杂交瘤技术制备了４个抗旋毛虫ＣＡ的杂交瘤细胞系，建立了以单克隆抗体双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ＣＡ的方法，并初步应用于动物血清中ＣＡ的检测。应用该法检测旋毛虫病猪血清的阳性率为７２．１％（３１／４３）。６０头健康猪、３０头感染猪囊虫和３０头感染弓形虫的猪均为阴性。对流行地区河南邓县３４头和湖北囊樊１３４头屠宰猪进行流行病学调查，     

猪生长激素抗独特型抗体的制备及免疫学鉴定

应用猪生长激素（Ag）纯品，通过杂交瘤技术制备了猪生长激素单克隆抗体（Ab1）。Ab1经免疫亲和层析柱纯化后免疫新西兰白兔，其血清经饱和硫酸铵纯化后获得猪生长激素抗独特型抗体（Ab2）。再应用ELISA等方法进行鉴别。Ab2与Ab1呈阳性反应，与BALB／c小鼠r球蛋白呈阴性反应；Ab2与Ag竞争结合Ab1；Ab2抑制Ab1与Ag的结合。Ab1是针对猪生长激素纯品的单克隆抗体。Ab2是具有猪生长激素抗原内影像的抗独特型抗体。     

旋毛虫S_3抗原的免疫学特性及其在诊断中的应用

利用放射免疫的方法,对旋毛虫S_3抗原的特异性与敏感性进行了研究,并对实际样品进行了测定.实验结果表明,S_3抗原可检测抗血清的最低滴度为5×10~(-5),与弓形虫、隐孢子虫及锥虫无交叉反应.与猪囊虫、肉孢子虫的交叉反应率分别为10%和5%.对实际阳性样品可全部检出,阴性样品假阳性率为2.5%,对实验大鼠在72h后可全部测出循环抗原.     

肌旋毛虫免疫亲和层析抗原的制备及其特性

以Sepharose 4B为载体,兔抗旋毛虫多克隆抗体为配体,纯化了旋毛虫的S_3抗原,得到亲和层析抗原.本实验结果表明,存在于S_3抗原中的主要抗原成分,同样存在于亲和层析抗原中,亲和层析抗原的分子量范围在103000～40000 u之间,等电点范围在pH4.7～8.8之间.亲和层析抗原经转印后,在硝酸纤维素膜上至少有7条显色带,其中分子量为48000 u,50000u,58000u和87000u的4种蛋白的抗原性较强,而以分子量为48000u的蛋白抗原性最强.     

肌旋毛虫功能性抗原实验研究

本实验应用生化萃取技术和体外人工培养技术,制备了肌旋毛虫匀浆(HO)抗原和排泄—分泌物(ES)抗原,并对两种不同来源抗原的部分生化特性和免疫学特性进行了比较。HO抗原通过SephadexG—200又分为第一峰(FP)和第二峰(SP)。在5～20％的聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳上,ES和FP抗原出现许多条电泳区带。ES、FP和HO抗原对小鼠的保护力(肌幼虫减少率)分别为78％,76％和46％。     

旋毛虫新生幼虫期特异性T668全长cDNA的克隆及序列分析

利用旋毛虫新生幼虫期特异性 c DNA片段 T6 6 8- SS2作为核酸探针 ,在新生幼虫 c DNA文库中筛选出 10个阳性克隆。序列测定及分子生物学软件分析表明 ,克隆 G10 - 6的 c DNA片段全长 16 0 0 bp,含 12 90 bp的开放阅读框架 ,编码 1个由 4 30个氨基酸残基组成的多肽 ,其相对分子质量理论推导值为 4 6 84 0 ,等电点 (PI)为 9.6 5。主导氨基酸为Ser(11.39% )和 Thr(10 .93% )。开放阅读框架中具有丝氨酸蛋白酶保守功能区及酶活性位点结构 ,其 N末端的信号肽及 2个糖基化位点表明 ,其为分泌性糖蛋白 ,预示其可能在细胞外起着重要作用。DNA同源性分析表明 ,该 c DNA为一新的 c DNA分子。     

低温处理对猪肉中旋毛虫幼虫超微结构的影响

选用5头旋毛虫病猪胴体进行急冻冷藏处理,当肉尸最厚部位(臂部)中心温度达到-17℃时取样,以后每隔20d取样一次,共取5次作为5个试验组。用扫描电镜和透射电镜对低温处理后旋毛虫的超微结构变化进行了观察。结果:冷冻致死的旋毛虫主要表现虫体膨胀,体表凹凸不平,纹沟变浅,内容物逸出;杆状细胞的细胞器破坏,体壁结构模糊不清,甚至断裂,假体腔扩张。     

旋毛虫新生幼虫p46 000抗原基因的克隆及序列分析

应用旋毛虫感染猪血清，对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行了免疫筛选。对阳性克隆pBK-cMV-WN10的序列分析结果表明。cDNA全长为1352bp。含有1个1218bp的完整的开放阅读框架(ORF)，编码的多肽由406个氨基酸残基组成，其相对分子质量理论推导值为45900，等电点为5．43，N末端的信号肽及糖基化位点(NCS)表明其可能为分泌性糖蛋白，氨基酸序列19～156与158～295为重复区域，相似性为74％．C末端有1个半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域，但旋毛虫p46000抗原与其他线虫的半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白结构有很大差异，可能已经失去半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白的功能。PCR结果显示。从旋毛虫新生幼虫、肌幼虫、3日龄成虫和5日龄成虫cDNA中均扩增出此基因，表明此基因在旋毛虫各个时期均有表达。     

旋毛虫p53糖蛋白抗原研究进展

旋毛虫p53糖蛋白是旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原的主要抗原组分之一,具有肌幼虫期特异表达特性,主要定位在肌幼虫β-杆细胞.不同旋毛虫种p53糖蛋白氨基酸序列相对保守,但抗原性有差异,在同一种内变异极少,具有种及属特异性抗原表位.论文就旋毛虫p53糖蛋白抗原的分子结构、不同发育时期的特异性表达、抗原性等方面的研究进展进行综述...     

旋毛虫新生幼虫WN1抗原基因的克隆及表达

应用旋毛虫人工感染猪血清对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选，对阳性克隆WN1序列进行生物信息学分析。结果表明，WN1 cDNA全长为474bp，含有1个354bp的完整的开放阅读框架(ORF)，编码的多肽由117个氨基酸残基组成，其相对分子质量理论推导值为13200，等电点为4．25，N-末端的信号肽表明其可能为分泌性蛋白。GenBank数据库检索结果显示，此序列为一个新基因的全长cDNA。经PCR扩增WN1基因，将其克隆到原核表达载体pET28a，重组质粒经鉴定后，转化大肠杆菌BL21 star(DE3)并诱导表达出相对分子质量为15000的重组蛋白，与理论设计完全相符。     

抗旋毛虫单克隆抗体细胞林的建立及其特性鉴定

为筛选旋毛虫保护性抗原,建立了4株分泌抗旋毛虫McAb的细胞株。经连续培养30余代,仍稳定地分泌抗体。其中,2G3和2C10的靶抗原为旋毛虫幼虫表膜。免疫球蛋白 型及亚 鉴定表明,2G3和2C10为IgG_1,1D5为IgG_3,1C9为IgM。除2C10和IC9对伊氏锥虫可溶性抗原呈现阳性反应外,未见对猪圆线虫、猪囊尾蚴、伊氏锥虫表膜抗原和正常猪肉反应。经ELISA测定,2G3、2C10、1D5、1C9均可与施毛虫幼虫可溶性抗原作用,其腹水效价分别为1:50000、1:10000、1:1000、1:800。各McAb均与旋毛虫幼虫排泄分泌物抗原(ES抗原)作用,经ELISA测定表明,2G3腹水效价达1:320000。