木瓜凝乳蛋白酶的单链单甲氧基聚乙二醇修饰产物的检测与分析

在底物保护下,采用三聚氰氯活化的单链单甲氧基聚乙二醇(mPEG1)对木瓜凝乳蛋白酶(Cp)进行了共价修饰,反应混合物经毛细管电泳(CE)分析及Sephadex G-75分离纯化获得修饰度为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1长链的修饰纯酶(mPEG1-Cp)．以三硝基苯磺酸(TNBS)法与CE法作对比测定了该修饰酶的平均氨基修饰度;以-ELISA法检测mPEG1-Cp的抗原性;用紫外吸收光谱和荧光发射光谱对mPEG1-Cp进行了结构的测定分析．结果表明：Cp的mPEG1修饰产物经毛细管电泳检测为多组分体系,最大产物峰为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1的低修饰度修饰酶,其相对分子质量为40712～46044;该修饰酶抗原抗体结合能力完全消失,体内活性半衰期是原酶的1．6倍,同时酶活力保持在36．5％;紫外吸收光谱和荧光发射光谱分析表明:mPEG1-cp结构有轻度的改变．     

木瓜凝乳蛋白酶基因的克隆及在原核细胞中的表达

以青番木瓜总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出木瓜凝乳蛋白酶基因CHY(chymopapain),构建带有His-tag的原核表达载体p EASY-E1-CHY。将该重组载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,重组菌株用IPTG诱导表达,在诱导6 h,IPTG浓度为0.05 mmol/L时重组蛋白表达量最高。SDS-PAGE凝胶电泳和West-ern-Blot杂交分析结果表明蛋白大小为45 k Da。用脱脂奶粉进行凝乳分析,证明此木瓜凝乳蛋白酶具有凝乳活性,此结果为今后利用生物技术进行木瓜凝乳蛋白酶工程化生产奠定了基础。     

生姜蛋白酶的部分纯化及酶学性质研究

对姜块中的生姜蛋白酶进行部分纯化，并对其主要酶学性质进行了研究。以酪蛋白为底物时，其最适pH值为6.0最适温度为60℃，30℃下保温30min，酶活力不变，高于72℃酶活力迅速下降，60℃、75℃、80℃时，该酶的半衰期分另为17、12和3min，Km值为0.270mmol/L；二硫苏糖醇（DTT）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）对酶有激活作用；对氯汞苯甲酸（PCMB）、氯化锌、硫酸铜等对酶有抑制作用；氯化钙、硫酸镁、三氯化铝对酶活影响不大。     

高产蛋白酶P5菌株的纯化及酶学性质

对高产蛋白酶细菌P5菌株发酵产生的蛋白酶进行初步分离纯化并研究其酶学性质。结果表明,硫酸铵饱和度为70%时,酶活性达到最高(310.44U/mL);该酶最适反应温度为40℃,在35～40℃保温5h,酶活性基本没变化;酶反应最适pH值为7.0,酶活性在pH值6.0～7.5时比较稳定。K+、Ca2+、Mg2+、Fe3+对酶活性有促进作用,Na+对酶活性基本没有影响,Hg2+和Mn2+对酶活性有抑制作用,其他金属离子对酶活性的影响随离子浓度的不同而不同。     

黑曲霉酸性蛋白酶酶学性质的研究

对黑曲霉菌株ANS1产酸性蛋白酶基本酶学性质的研究表明:酸性蛋白酶适宜pH在2.5～4.0之间,在pH为3.5时,相对酶活最高;适宜温度在40～50℃之间,在45℃时,相对酶活最高;酸性蛋白酶有着较好的热稳定性,曲酶粉在80℃保温至5min保留有51.4%的酶活,液态酶在80℃恒温水浴中保温1min保留有54.6%的酶活力,曲酶粉较液态酶有着更好的抗热性;金属离子对酸性蛋白酶活力有一定的影响,在2.0mmol·L-1的浓度下,Mn2 和Cu2 酸性蛋白酶有较强的激活作用,Fe3 对该酶表现出明显的抑制作用。研究结果表明,黑曲霉菌株ANS1产酸性蛋白酶可以作为生物饲料添加剂。     

蛋白酶产生菌的化学诱变及酶学性质

对1株产蛋白酶的枯草芽胞杆菌(Z5)进行化学诱变,筛选得到1株产较高酶活性、大分子质量蛋白酶的菌株。检测该蛋白酶对底物明胶的分解能力,发现该蛋白酶的分子质量约为100 ku,还原剂巯基乙醇对其活性的影响较大。在不同温度、不同pH值处理该蛋白酶后,用茚三酮法测定酶活性,发现该蛋白酶催化反应的最适pH为6,最适温度为50℃,并且该蛋白酶有较好的热稳定性,70℃处理10 min仍能保留50%左右的酶活性。由于此蛋白酶在分子质量及最适pH方面均不同于已报道过的枯草芽胞杆菌蛋白酶,推测其为一种新型的蛋白酶。     

菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质研究

[目的]研究菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质。[方法]从一株碱性蛋白酶生产菌株I13中得到了碱性蛋白酶粗酶液,并研究了温度和pH对该酶液酶活力的影响。[结果]所产碱性蛋白酶的最适反应温度为40℃,在20~30℃范围内仍保持了最大活力的40%以上;最适反应pH为10.5,在pH 8.0~11.0范围内保持了最大活性的90%以上,有较宽的pH谱。[结论]该碱性蛋白酶具有开发成为洗衣粉添加剂的巨大潜力。     

菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质研究

[目的]研究菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质.[方法]从一株碱性蛋白酶生产菌株I13中得到了碱性蛋白酶粗酶液,并研究了温度和pH值对该酶液酶活力的影响.[结果]所产碱性蛋白酶的最适反应温度为40℃,但在30～60℃范围内活力水平均较高,且在20～30℃范围内也保持了最大活力的40%以上;最适反应pH值为10.5,在8.0～11.0 pH值范围内保持了最大活性的90%以上,有较宽的pH值谱.[结论]该碱性蛋白酶具有开发成为洗衣粉添加剂的巨大潜力.     

嗜碱菌S9碱性蛋白酶酶学性质研究

对嗜碱微生物所产的碱性蛋白酶进行酶学性质研究。发酵液首先经硫酸铵盐析和缓冲液透析,获得粗酶。试验结果表明,该酶最适反应温度60℃,pH为9.0,酶蛋白稳定温度40℃,pH为8.0～10.0。K 、Ca2 、Mn2 和Mg2 对酶有激活作用,Zn2 、Fe3 和Cu2 有抑制作用,Pb2 和Hg2 有强烈抑制作用。     

海洋氧化短杆菌15E碱性蛋白酶的酶学性质

对氧化短杆菌15E菌株(Brevibacterium oxydans)所产的碱性蛋白酶酶学性质研究表明,15E菌株所分泌的碱性蛋白酶分子质量为49.0 ku、等电点为9.3.该酶的最适作用温度为60℃,最适pH值为7.0-9.0;Ca2+、Mg2+、K+对酶有激活作用.酶对一些变性剂如SDS、尿素、盐酸胍具有一定的耐受性;PMSF和AEBSF能抑制该蛋白酶,表明该酶属于丝氨酸蛋白酶;EDTA对该蛋白酶有抑制作用,说明该蛋白可能含有金属离子.     

抗四（4—三甲胺苯）卟啉抗体的酶学性质研究

制备了抗四 (4 三甲胺苯 )卟啉的单克隆抗体细胞株 3B6 ,测得了抗原 -抗体解离常数 (用ELISA法测定 )为 4 6 4× 10 -5;单抗 3B6为IgG2b ;抗体酶 3B6Km=33 0 0mmol/L ,Kcat=12 2 0 0min-1,说明该抗体酶是一种很好的新的生物催化剂     

2-(2-(1-取代-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-4,6-二甲氧基嘧啶类化合物的合成及其生物活性

【目的】寻找具有除草活性及抑菌活性的新型化合物。【方法】以2-羟基苯乙酮为原料,经缩合、环化、选择性氮烷基化、氧取代4步反应合成了2-(2-(1-取代-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-4,6-二甲氧基嘧啶类化合物,其结构运用1H NMR、MS和元素分析进行确认,并分别测定了合成化合物的除草活性及抑菌活性。【结果】经1H NMR、MS和元素分析确认,成功合成了5种新型的2-(2-(1-取代-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-4,6-二甲氧基嘧啶类化合物。在150 g/hm2的剂量条件下,新合成化合物没有表现出除草活性;在200 mg/L的质量浓度条件下,化合物4,6-二甲氧基-2-(2-(1-丙基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)嘧啶对黄瓜白粉病菌与水稻纹枯病菌的抑菌活性分别为78%和90%。【结论】2-(2-(1-取代-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-4,6-二甲氧基嘧啶类化合物具有一定的抑菌活性,该类化合物的结构改造与修饰值得进一步研究。     

5-对氯苯基-2-间甲基苯甲酰胺基-1,3,4-噻二唑对小麦种子萌发及幼苗生长的影响

用不同质量浓度(0、6、8、10、12、14mg/L)的5-对氯苯基-2-间甲基苯甲酰胺基-1,3,4-噻二唑对小麦进行浸种和苗期水培处理,研究了其对小麦种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明,5-对氯苯基-2-间甲基苯甲酰胺基-1,3,4-噻二唑处理后小麦种子发芽势(第3天)、发芽率(第7天)比对照显著增加,差异达极显著水平;处理组幼苗根长、芽长、根系活力以及叶片叶绿素、可溶性蛋白质含量(第7天)也显著增加。说明该药物处理对小麦种子萌发和幼苗生长具有明显的促进效应,其中以10mg/L效果最好。     

亚表层土壤修饰改性对镉离子的吸附影响

采用室内试验方法,研究了不同比例CTMAB单一修饰和CTMAB+SDS混合修饰的亚表层对金属镉离子的吸附影响。结果表明,吸附量顺序为CK>50%CTMAB>100%CTMAB≥120%CS,最佳吸附等温线模型可以用BET模型描述。热力学参数的研究表明,吸附自发性与吸附量具有相同的变化规律,反应的熵变对于反应的自发性具有决定作用。土样修饰改性后镉离子吸附的自发性减小,活性增加,淋溶性及对地下水的危害性增大。     

莲藕多酚氧化酶的酶学特性

鲜切莲藕褐变一直是生产中急待解决的关键问题。莲藕的护色主要表现为对组织中多酚氧化酶 (ＰＰＯ)活性的控制。ＰＰＯ是大多数果蔬中普遍存在并引起组织酶促褐变的一类氧化还原酶[1] 。鲜切果蔬由于组织经切分等使ＰＰＯ与底物的接触机会增加 ,加速了褐变反应 ,影响产品质量及     

邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)对土壤中微生物和动物的影响

在确定进入土壤系统中的邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)在土壤气、固、液三相间的分配率的基础上,主要研究了DEHP与土壤中微生物和动物的相互作用。结果表明,DEHP对土壤系统中所测试生物的生长和生理均有一定抑制作用。DEHP对微生物产生影响的最低可见效应浓度(LOEC)为0.01g·kg-1干土;在较低浓度下(<0.01g·kg-1干土),DEHP可促进细菌的生长,表明细菌可利用DEHP作为其生长的C源,而霉菌和放线菌均无此现象。DEHP对蚯蚓生长的LOEC为0.005g·kg-1干土,蚯蚓可从土壤中富集DEHP,试验进行50d,对于0.005g·kg-1干土的DEHP富集倍数为7.32。在所测试生物中,蚯蚓对DEHP的毒性反应最敏感。     

2-(2'-羟苯基)苯并噻唑氨基衍生物吸收与发射光谱的含时密度泛函研究

在量子化学B3LYP/6-31+G*和CIS/6-31+G*水平下分别优化了间位和对位2-(2'-羟苯基)苯并噻唑氨基取代衍生物(4-AHBT和5-AHBT)基态和第一单重激发态所有可能的稳定构型,利用含时密度泛函理论(TDDFT)的B3LYP和PBE1PBE泛函,计算了4-AHBT和5-AHBT各异构体在溶剂中的吸收与发射光谱.理论研究表明,两个泛函给出的计算结果相一致.4-AHBT的最强吸收来自于具有ππ*跃迁特征的局域激发S_1态,而次强吸收源于具有同样特征的电荷转移S_2态;5-AHBT则正好相反.4-AHBT和5-AHBT发射双荧光:长波区荧光来源于酮式构型的发射,短波区的荧光发射则可能由4种醇式异构体共同产生.

Abstract：

In this work, the geometries of the ground and the first excited states of the meta amino derivatives (4-AHBT) and the para amino derivatives (5-AHBT) of 2-(2'-hydroxyphenyl)benzothiazole are optimized using quantum chemical calculations. The absorption and emission spectra of the isomers of 4-AHBT and 5-AHBT in solvents are calculated by means of the time-dependent density functional theory (TDDFT) with B3LYP and PBE1PBE functionals. Theoretical investigations indicate that the results from both functionals are consistent. The intense absorption of 4AHBT is from the local excitation S_1 state with ππ * transition and its hypo-absorption is from the charge transfer S_2 state with the same transition; but the intense absorption of 5AHBT is contrary to that of 4AHBT. 4-AHBT (5-AHBT) shows dual fluorescence characteristics: the long wavelength fluorescence emission is from the keto tautomer, while the short wavelength emission is produced by the four enol isomers.     

对溴苯甲醛-4-苯基-2-噻唑脲与人血清蛋白相互作用的研究

采用荧光法研究了对溴苯甲醛-4-苯基-2-噻唑脲(BHP)与人血清蛋白(HSA)之间的相互作用。根据溴苯甲醛-4-苯基-2-噻唑脲与HSA相互作用的荧光敏华作用,利用Stern-Volmer方程及非辐射能量转移理论处理试验数据,采用同步荧光光谱探讨了BHP对HSA构象的影响。结果表明,BHP可以使HSA的荧光增强,表明两者之间发生了能量转移,能量转移的机理是BHP与HSA结合形成了复合物。荧光增强(敏化)效应主要源于给体-受体间的偶极-偶极作用的能量转移。能量转移的结果为内原发色基团(给体donor)的荧光被猝灭和外源发色基团(受体acceptor)荧光被敏化,计算得到其敏化常数为-2.494 5×104。同步荧光光谱表明,相互作用引起HSA构象变化,提示结合位点更接近于色氨酸。     

V2O5改性TiO2光催化剂制备及其对有机污染物光催化降解性能研究

[目的]研究V2O5改性TiO2光催化剂制备及其对有机污染物光催化降解性能.[方法]通过沉淀-浸渍法,利用TiCl4与NH4VO3制备了基于V2O5改性的TiO2光催化剂.以亚甲基蓝为模型化合物考察了改性方法及制备条件对光催化性能的影响,并进行了UV、XRD分析,初步探讨了光催化降解动力学行为.[结果]V2O5-TiO2催化活性大大高于TiO2,且焙烧前改性效果明显高于焙烧后改性;V2O5-TiO2最佳制备条件为pH =7、500℃焙烧4h、V2O5含量为5.2％;V2O5改性一定程度上扩大了TiO2光激发波长,提高了紫外光的吸收能力,但未改变TiO2的晶体结构及光催化降解的一级反应动力学特征.[结论]V2O5-TiO2对有机污染物光催化降解具有广阔的应用前景.