应用鸭胚肝细胞培养鸭肝炎病毒的研究

利用鸭胚肝细胞成功地培养了鸭肝炎病毒．并呈现典型ＣＰＥ，向其细胞维持液中加入１％的鸭胚尿囊液，ＣＰＥ的维持时间可延长至６０小时．将该病毒的细胞培养物回归鸭胚和雏鸭，其致病力不见明显减弱．鸭胚中和试验证明，鸭肝炎病毒在鸭胚肝细胞上形成ＣＰＥ的能力能被特异抗血清所中和．     

河北省鸭肝炎病毒的分离鉴定和病毒的细胞培养

从某鸭场疑似鸭病毒性肝炎的发病雏鸭及病死雏鸭肝脏中分离到1株病毒，经鉴定为鸭肝炎病毒。利用鸭胚肝细胞培养病毒，呈现典型CPE，向细胞维持液中加入1％的鸭胚尿囊液，CPE的维持时间可延长至60小时。将病毒的细胞培养物回归鸭胚和雏鸭．其致病力不见明显减弱。     

应用葡萄球菌A蛋白协同凝集试验快速检测鸭肝炎病毒的研究

用提纯的鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）免疫家兔制备高免血清，常规方法提取ＩｇＧ，与１％葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）阳性菌悬液混合，以ＰＨ７．２０．２ｍｏｌ／ＬＰＢＳ作缓冲液，制成鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）ＳＰＡ协同凝集试验（ＳＰＡ－ＣｏＡ）诊断试剂，同时制备阴性对照试剂。用ＳＰＡ－ＣｏＡ检测人工感染致死的雏鸭肝脏、含ＤＨＶ强毒的鸭胚液、适应鸡胚的疫苗毒鸡胚尿囊毒的检出率均为１００％。用ＳＰＡ－ＣｏＡ检测强毒时，样品     

环磷酰胺预处理制备兔抗Ⅰ型鸭肝炎病毒高免血清

以正常鸡胚尿囊液和环磷酰胺预处理试验兔, 再以Ⅰ型鸭肝炎病毒（Ｄｕｃｋ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ Ⅰ, ＤＨＶ Ⅰ） 标准强毒（ＡＴＣＣ, Ｃ９／Ｄ２） 接种后致死鸡胚的尿囊液, 经灭活、乳化制成油佐剂抗原多次免疫试验兔, 获得了鸡胚中和效价（ＥＰＤ５０） 达１∶３２ 以上的兔抗Ⅰ型鸭肝炎病毒高免血清（ＤＨＶ ⅠＳ） 。     

新型鸭肝炎病毒疫苗候选株的筛选

本试验对临床患病鸭分离的一株疑似鸭肝炎病毒进行了血清型鉴定和毒力测定。利用Ⅰ型和新型鸭肝炎病毒鉴别引物对提取的病毒RNA进行RT-PCR扩增;将分离病毒分别与Ⅰ型和新型鸭肝炎病毒阳性血清进行中和试验;根据测定的病毒ELD50,进行雏鸭攻毒和鸭胚肝细胞接毒试验。结果表明:RT-PCR扩增出了与新型鸭肝炎病毒预期片段相符的705bp条带;分离病毒不能被Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清中和,新型鸭肝炎病毒阳性血清对该病毒的中和效价是1:200,说明该分离株属于新型鸭肝炎病毒。该毒株的ELD50为10-5.7/0.2mL,能引起攻毒鸭与临床病例一致的症状和病变以及显著的肝细胞病变,可作为新型鸭肝炎病毒的疫苗候选株开发应用。     

鸭肝炎病毒A66弱毒株在鸡胚成纤维细胞上的培养：张小飞

将鸡胚致弱的鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）Ａ６６侏接种于鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）进行细胞培养,通过对细胞培养物进行病毒滴度测定、鸡胚中和试验和电镜检查,证明了ＤＨＶＡ６６毒株能够在ＣＥＦ上增殖。试验还表明,犊牛血清对ＤＨＶ增殖具有明显的抑制作用。此外,还根据细胞培养物病毒滴度毒滴度测定结果绘制出了病毒在ＣＥＦ上的生长曲线。     

鸭浆膜炎、鸭病毒性肝炎二联灭活苗研究

将自然分离的2株鸭疫里默氏杆茵接种适宜培养基,收获茵液用甲醛灭活;用Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV)接种易感鸡胚收获含毒胚组液,经甲醛灭活后与灭活的鸭疫里默氏杆菌液混合,制备3批油乳剂灭活苗,并对其安全性和免疫原性进行测定。3批灭活苗通过接种2周龄雏鸭(0．5mL／只),2周后可测到DHV中和抗体,3周后攻毒保护率达80％以上。鸭疫里默氏杆茵3周后攻毒保护力80％以上。2周龄雏鸭每只皮下注射1ml,观察14d,免疫鸭全部健活,局部无不良反应。     

鸭肝炎病毒的分离与检测

在某养鸭场的雏鸭群当中出现了传染性疾病，其主要的临床特征表现为肝脏出血以及角弓反张，初步判断为鸭肝炎病毒感染症状。针对送行检测的病料采用无鸭肝炎病毒母源抗体的鸭胚实行病毒分离及检测。检测结果表明，接种病料的鸭胚均致死，且死亡鸭胚均出现了水肿、全身性出血等症状；采取解剖检验能够明显的观察到鸭内脏有明显的充血情况。在所采取的PCR扩增检测中得到了和预期大小相一致的440bp目的片段。基因测序的结果表明扩增出的基因部分和鸭肝炎病毒的同源性达到了98.5%，据此表明这一鸭群确认感染了鸭肝炎病毒。     

雏鸭病毒性肝炎的诊治

取疑似雏鸭病毒性肝炎病死鸭肝脏制成１：１匀浆，分别接种９日龄鸡胚和１１日龄鸭胚，鸡，鸭胚均于接种后２４～３６小时全部死亡，取鸡胚尿囊膜制成１：２匀浆 接种１１日龄鸭胚，鸭胚于接种后６４小时死亡，取鸡胚尿囊液回归４日龄雏鸭进行人工发病雏鸭于２４～９６小时全部死亡，用已知抗鸭肝病毒卵黄液对发病鸭群紧急被动免疫注射，病鸭群于注射后３天全面停止死亡，取鸡，鸭胚尿囊液制成油乳剂免疫注射后３天全面停止死亡，了     

夹心ELISA和斑点杂交试验检测鸭血清中鸭乙型肝炎病毒的比较

用单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ和斑点杂交试验分别对４６例鸭血清样品中的鸭乙型肝炎病毒表面抗原（ＤＨＢｓＡｇ）和鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ进行平行检测，并根据夹心ＥＬＩＳＡ测定的Ｐ／Ｎ值和斑点杂交试验的反应斑点进行薄层扫描所测定的峰面积值，比较了１９例带毒鸭血清中ＤＨＢｓＡｇ和ＤＨＢＶＤＮＡ的相对含量。结果表明，两种试验的结果判定具有高度一致性。ＤＨＢｓＡｇ与ＤＨＢＶＤＮＡ在带毒鸭血清中呈并存关系，但其含量相关不显著（Ｐ＞０．０５）。     

鸭冠状病毒的分离鉴定

鸭冠状病毒的分离目前国内外尚无报道。我们将回归发病鸭的肠粪及肠内容物处理后，经羊膜腔、尿囊腔接种１２￣１４日龄鸭胚，３７℃培养４８小时后取羊水和尿囊液继代，将第５代的鸭胚羊水、尿囊液混合并对其进行系统鉴定。结果表明：该病毒在鸭胚，其ＴＣＩＤ５０为５．０，电镜负染观察多呈不规整的圆形，直径８０￣１２０ｎｍ，有囊膜，病毒粒子外周有花瓣样突起，核酸型为ＲＮＡ型，对乙醚敏感、５６℃１５分钟即可使其失去感染     

鸭病毒性肝炎实验室诊断方法的研究

将鸭病毒性肝炎病毒（duck hepatitis virus DHV)(ATCC株）用鸡胚传一代后，测出此病毒的鸡胚半数致死量（ELD50）为10^-5.5。通过多次重复试验,闻利用鸡胚中和试验和雏鸭中和试验检测鸭病毒性肝炎（DVH）的诊断方法，7株DHV毒株在鸡胚中和试验中的结果是：胚传一代尿囊液死亡率为2／8－5／8，1：10血清中和保护率为8／8，1：1000肝病料死亡率为3／8－8／8，1：10血清中和保护率为8／8，正常对照全部存活，雏鸭中和试验的结果是：24小时内1：10肝病料死亡率为3／8－8／8，1：5血清中和保护率为8／8，正常对照全部存活。     

鸭病毒性肝炎的研究进展

鸭病毒性肝炎(Duck Hepatitis, DH)简称鸭肝炎,是由鸭病毒性肝炎病毒(Duck Hepati-tis virus, DHV)引起雏鸭的一种以肝脏呈现出血性炎症为特征的急性烈性传染病。鸭肝炎病毒有三个血清型,分别引起I型、Ⅱ型和Ⅲ型鸭肝炎。I型鸭肝炎病毒最早于1945年在美国发现,1950年用鸡胚分离     

鸡,鸭体内传染性法氏囊病病毒的分离及理化性质比较

从疑似传染性法氏囊病（ＩＢＤ）病鸡及同群饲养的鸭体内各分离到１株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ试验证明两病毒均为ＩＢＤＶ，病毒血清型为Ⅰ型。病毒可致死鸡胚，适应于鸡胚成纤维细胞并产生细胞病变（ＣＰＥ）。理化性质比较表明，两病毒为同源ＩＢＤＶ。研究表明，鸭可成为ＩＢＤＶ的携带者或传染源。     

从鸭腹水综合征病鸭体内分离鉴定到血清1型鸭肝炎病毒

2011年4月份,河北省某地一些鸭场饲养的20～45日龄的樱桃谷肉鸭发生了以腹腔中充满大量清亮、茶色或啤酒样腹水为主要病变特征的疾病,即鸭腹水综合征。采集两个不同日龄的病死鸭肝脏样品,接种SPF鸭胚进行病毒分离,获得两个病毒分离物（HB01和HB02）。这两个病毒分离物对鸡、鸭和鹅的红细胞均无血凝活性。RT-PCR或PCR检测表明,HB01和HB02中鸭肝炎病毒检测为阳性,而鸭呼肠孤病毒、鸭圆环病毒、鸭黄病毒等检测均为阴性。将HB02接种5日龄SPF鸭,致死率为40%;对20日龄的鸭不致死。HB02分离物中鸭肝炎病毒的序列分析表明其与鸭肝炎病毒NA株及弱毒疫苗株C80和F64遗传距离较近。根据试验结果,推测鸭肝炎病毒可能是诱发本次鸭腹水综合症的因素之一。     

新型鸭肝炎病毒流行病学调查及免疫防治试验

本试验通过鸭胚尿囊腔接种，对我国部分省市采集的死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离，获得9个病毒分离株。这些分离株对10日龄鸭胚的致死率为100％，人工感染6日龄雏鸭的致死率为0～100％不等。死亡鸭呈角弓反张姿势，剖检可见肝脏肿大，有出血点或出血斑。将9株分离株经鸭胚传至第5代，收集鸭胚尿囊液毒测定这些毒株的ELD50为10^-7.32／0．2ml～10^-3.5／0．2ml不等。用鸡抗1型DHV及新型DHV的血清进行中和试验，结果表明：有7株为新型DHV，有2株为1型DHV。对实验室早期分离的新型鸭肝炎病毒B株经过鸭胚传代致弱后，收集鸭胚尿囊液毒稀释成不同倍数对1日龄雏鸭进行免疫，并于10日龄时用新型鸭肝炎强毒进行攻毒保护试验，结果B20株在20倍稀释时，保护率达100％。采集免疫的雏鸭血清，中和试验测定血清的效价，雏鸭在免疫后可检测到中和抗体，第10天时抗体水平达到高峰，然后呈逐渐下降趋势。结果表明，B株经过鸭胚传代致弱后在毒力下降的同时仍保留一定的免疫原性．可以作为疫苗的候选株。     

新型鸭肝炎病毒的分离鉴定

为调查发病鸭场的病原,本试验从发病鸭场中分离到1株鸭肝炎病毒,Reed-Muench法测定该病毒对鸭胚ELD₅₀为10^-5.53/0.2 mL,动物回归试验显示攻毒雏鸭复制出原发病鸭场鸭的临床症状和病理变化,鸭病毒性肝炎病毒(DHV)Ⅰ型阳性血清对分离株病毒无中和作用,RT-PCR鉴定分离株病毒为新型鸭肝炎病毒。     

酶标SPA在鸭病毒性肝炎免疫检测上的应用研究

在酶标ＳＰＡ（金色葡萄球菌Ａ蛋白）的ＤｏｔＢｌｏｔＩｍｍｕｎｏａｓａｙ（免疫斑点试验）中,ＳＰＡ能与鸭血清中ＩｇＧ分子Ｆｃ段结合。这一点,在国内外尚未见报道。用酶标ＳＰＡ的ＤｏｔＢｌｏｔＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、ＤｏｔＢｌｏｔＥＬＩＳＡ及鸡胚中和试验,分别对ＤＨＶ（鸭肝炎病毒）Ａ毒株、及已知的Ｉ型ＤＨＶＲ毒株,进行交叉试验的结果一致。该试验以及病毒粒子的电镜观察,进一步表明,我们培育的优良鸭肝炎弱毒株Ａ６６确系Ｉ型ＤＨＶ。     

一株Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离与鉴定

近期,江苏连云港地区某雏鸭群中发生以角弓反张和肝脏出血为特点的传染病,疑似鸭肝炎病毒感染。对送检的病料用无鸭肝炎病毒母源抗体的鸭胚进行病毒分离与鉴定及RT-PCR方法检测。结果显示,接种病料的鸭胚出现死亡,死亡鸭胚发育不良,水肿,全身出血;剖检见肝脏充血、出血。RT-PCR成功扩增出与预期大小相符的440bp的目的片段。对扩增出道基因片段进行测序及BLAST分析表明,扩增的部分3D基因与GenBank上已公布的Ⅰ型鸭肝炎病毒C80株的同源性达到98.2%,由此确定该鸭群感染了Ⅰ型鸭肝炎病毒。     

间接ELISA检测鸭肝炎病毒抗体的研究

以蔗糖密度梯度离心法纯化的病毒作为包被抗原，建立了检测鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经特异性及重复性试验，效果良好。ＥＬＩＳＡ效价与琼扩、中和效价存在平行关系。经ＥＬＩＳＡ检测，１日龄雏鸭免疫后，４日龄可检出ＥＬＩＳＡ抗体，１０日龄达到峰值。ＤＨＶ高免血清在雏鸭体内作用维持时间为１０ｄ左右。攻毒保护试验表明，攻毒前雏鸭的血清抗体水平与攻毒后雏鸭存活率具直接相关性。