雏鸡感染E．maxima球虫后淋巴组织与外用血T细胞变化的观察

本试验对１５日龄雏鸡感染３０００Ｅ．ｍａｘｉｍａ球虫卵囊后外周淋巴组织与血液中Ｔ细胞的变化进行了观察．试验结果证实，感染球虫鸡的脾，盲肠扁桃体以及外周血中Ｔ淋巴细胞数量均显著增加．外周血Ｔ细胞的消长曲线远表现出与球虫内生性发育的相关性．     

马立克氏病强毒株感染鸡T细胞受体亚群动态变化的研究

为深入探讨鸡马立克氏病Ｔ细胞受体亚群的变化与疾病发生与发展的相互关系,本实验以马立克氏病强毒株人工感染１日龄ＳＰＦ雏鸡,在不同的感染期,以流式细胞仪分析脾脏、胸腺、外周血淋巴细胞中ＴＣＲ１和ＴＣＲ２Ｔ细胞的动态变化。结果表明,感染鸡脾脏中ＴＣＲ１Ｔ细胞异常增高,而ＴＣＲ２Ｔ细胞在脾脏和外周血中的表现为暂短的升高,其后迅速下降。ＴＣＲ１Ｔ细胞与ＴＣＲ２Ｔ细胞的这种异常变化是ＶＭＤＶ感染雏鸡后Ｔ细胞表     

H9N2亚型禽流感流行株灭活疫苗种毒的筛选

为研究中药对柔嫩艾美尔球虫感染鸡免疫水平的影响,本实验采用流式细胞技术检测柔嫩艾美尔球虫感染鸡外周血CD4^＋T细胞亚群,以及CD8^＋T细胞亚群数目的动态变化。结果表明,接种球虫后,     

vMDV感染鸡CD^4＋与CD^8＋T细胞动态变化

人工感染１日龄ＳＰＦ雏鸡马立克氏病强毒株（ｖＭＤＶ）,在不同的感染期,以流式细胞仪分析感染鸡脾脏和外周血淋巴细胞中ＣＤ４＋和ＣＤ８＋细胞的动态变化。结果表明,感染鸡脾脏和外周血中ＣＤ８＋Ｔ细胞异常增高,而ＣＤ４＋Ｔ细胞表现为暂短的升高,其后迅速下降。ＣＤ４＋与ＣＤ８＋Ｔ细胞的这种异常变化是ｖＭＤＶ感染雏鸡后Ｔ细胞表型变化的重要特征之一。     

氢溴酸常山酮对肉鸡球虫病的防制作用研究

为探究氢溴酸常山酮对多种鸡球虫的预防效果,试验在体外利用细胞毒性检测(CCK-8试验)及子孢子入侵DF-1细胞的抑制试验评估了氢溴酸常山酮对柔嫩艾美耳球虫入侵宿主细胞的抑制作用;在体内利用最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变计分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)及抗球虫指数(ACI)四项指标评估了高、中、低剂量氢溴酸常山酮对柔嫩、毒害、堆型、巨型艾美耳球虫混合感染的预防效果。结果显示,无细胞毒性浓度为0.01 mg/mL的氢溴酸常山酮在体外能有效抑制柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1细胞;同时发现高、中剂量氢溴酸常山酮(添加量分别为500 g/t、400 g/t)在体内能有效预防四种混合球虫的感染。研究结果提示氢溴酸常山酮在体内外均能有效抑制球虫感染,并且在临床应用中仍可以有效预防球虫感染。     

流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法检测猪生殖-呼吸道综合征(PRRS)外周血单个核细胞早期凋亡细胞的研究

细胞膜的改变是细胞死亡的一个基本过程，细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（ Ｐ Ｓ）由膜内侧面转移到膜外侧面是细胞凋亡早期的一个重要标志。 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ 是一种钙依赖的磷脂结合蛋白，与 Ｐ Ｓ有高度亲和性，因而用于早期凋亡细胞的检测。本试验用 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 经滴鼻和喷雾试验感染４０ 日龄 Ｓ Ｐ Ｆ仔猪，于感染后２４ ｈ、第７，１７，２８ ｄ采血分离外周血单个核细胞，细胞经 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ Ｆ Ｉ Ｔ Ｃ／ Ｐ Ｉ双染色法流式细胞仪检 测。结果显示， Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 感染后各期，外周血单个核细胞 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ＋ ／ Ｐ Ｉ＋ 细胞群（早期凋亡细胞群）的表达率均明显高于正常对照组（ Ｐ＜ ０．０１）。其中以感染后２４ ｈ的表达率为最高。结果表明， Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 可以诱导仔猪外周血单个核细胞早期细胞凋亡。     

感染球虫的肉鸡日粮中添加甜菜碱能够增加十二指肠上皮淋巴细胞数量并增强吞噬细胞功能

甜菜碱通常用于细胞渗透压的调节,本试验的目的在于探索甜菜碱、渗透压、球虫病之间的联系。试验一,肉鸡饲喂玉米-大豆型日粮,分为3个处理,基础日粮中分别添加甜菜碱0、0.5、1.0g/kg,其中一半肉鸡感染堆型艾美尔球虫。球虫感染降低了肉鸡增重和饲料效率,并且增加了十二指肠、空场黏膜的渗透压(P0.01)。甜菜碱降低了十二指肠渗透压(P0.01),特别是有球虫感染的时候。球虫感染增加了十二指肠固有层厚度(P=0.04)和白细胞的数目(P0.01),特别是在高甜菜碱水平时(互作p=0.05)。球虫可以使绒毛高度降低(p=0.05),但当添加1.0g/kg甜菜碱时情况得以改善(互作p=0.04)。试验二,将腹膜巨噬细胞和外周血异嗜细胞在渗透压分别为200、310、600或900mOsmol,甜菜碱含量分别为0、0.1、0.5或1.5mmol/L的(4×4因子)介质中培养6h,然后加入堆型艾美尔球虫。从结果来看,高渗透压介质与等渗透压介质比较,吞噬作用与NO的释放受到了抑制,而IL-1、IL-6的含量升高。0.1mmol/L甜菜碱组显著(p=0.04)增加异嗜细胞NO的产生,并具有增加巨噬细胞NO产生的趋势(p0.1)。甜菜碱可以促进异嗜细胞分泌趋化因子增强单核白细胞趋化性。除了增加白细胞的数目外,巨噬细胞增强单核白细胞趋化性和NO的释放或许可以解释感染球虫时添加甜菜碱能够降低肠道损伤的现象。     

雏鸡感染柔嫩艾美尔球虫局部黏膜免疫细胞的动态变化

本试验采用免疫组化法检测柔嫩艾美尔球虫感染雏鸡后盲肠黏膜sIgA+细胞和T细胞亚群的动态变化。结果发现:sIgA+细胞和CD4+T细胞数量在感染球虫后第2天就明显升高,第5天达到高峰,随后逐渐下降。而CD8+T细胞在感染球虫后第4天,才显著增加,感染后第7天达到高峰。表明雏鸡感染球虫后,机体能迅速启动黏膜免疫应答,不同的免疫细胞在抵抗柔嫩艾美尔球虫感染不同阶段发挥不同的作用。     

雏鸡感染巨型艾美耳球虫后肠道T淋巴细胞和上皮间淋巴细胞的变化

对１２日龄雏鸡初次感染巨型艾美耳虫后，盲肠扁桃体中Ｔ淋巴细胞数量显著增加，肠上皮间淋巴细胞在球虫内生性发育末期明显增多，再次感染后ＩＥＬ迅速增多，表明肠道淋巴组织的局部细胞免疫机制可能在机体抗球虫免疫中有重要意义。     

鸡球虫感染与宿主细胞凋亡的研究进展

鸡球虫感染引起的细胞凋亡是球虫与宿主细胞之间的相互作用,球虫感染宿主细胞后,可引发局部炎症进而诱发宿主细胞凋亡,也可抑制宿主细胞凋亡,维持细胞完整性。     

中药"球康"对E.tenella感染鸡肠道CD4+和CD8+T细胞的影响

本试验采用免疫组化方法检测球虫感染鸡肠道组织中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量,探讨中药“球康”抗球虫的作用机理。试验共设不感染不给药组、不感染给“球康”组（2％拌料）、感染给“球康”组和感染不给药组共4组。感染球虫后第2、4、5、7和9天,每组随机捕杀4只鸡,采取盲肠中段进行检测。结果,雏鸡感染球虫后,盲肠组织中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量显著高于不感染组,感染给中药“球康”组鸡CD4＋T细胞数量在第2,4,5和9天均高于感染不给药组,在第4天和第5天差异显著（P＜0．05）;CD8＋T细胞数量在第2,5,7和9天高于感染不给药组,第5天差异显著（P＜0．05）,第7天达到最高峰。说明中药“球康”通过增加球虫感染鸡肠道黏膜CD4^＋、CD8^＋T细胞数量,提高细胞免疫水平,以增强机体对球虫的抑杀作用。     

马立克氏病弱毒苗接种雏鸡T细胞亚群观察

为深入探讨马立克氏病疫苗的免疫保护机理,本实验以马立克氏病弱毒８１４株接种ＳＰＦ雏鸡,接种后不同时间以流式细胞仪分析脾脏、胸腺、外周血ＣＤ４＋、ＣＤ８＋及ＣＤ３＋Ｔ细胞的动态变化。结果表明,在接种病毒１０天测定,脾脏和外周血ＣＤ４＋Ｔ细胞略有下降,但以后逐渐升高,在２４～３１天测定时,外周血和脾脏ＣＤ４＋Ｔ细胞均明显增高;而ＣＤ８＋Ｔ细胞在接种后１０天在脾脏和外周血中明显增高,以后下降恢复于正常水平,在整个试验期间,ＣＤ３＋Ｔ细胞在脾脏和外周血中均保持较高水平,胸腺中各亚群Ｔ细胞均无明显变化。     

柔嫩艾美尔球虫（E．tenella）感染鸡IsG生成细胞及血清IgG变化

为了探明鸡球虫保护性免疫机制，通过人工复制的鸡球虫病鸡，利用免疫组化技术和斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA），分别检测了柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）初次感染雏鸡后，盲肠局部和免疫器官中IgG生成细胞数的动态变化，循环血液中特异性IgG水平的动态变化；雏鸡母源抗体的动态变化和不同抗体水平雏鸡的抗球虫能力。结果表明：（1）攻毒后雏鸡盲肠粘膜、脾脏、法氏囊、盲肠扁桃体中的IgG生成细胞早于第2～3d（d）开始增殖，在第9～12d达到峰值，随后即开始下降，盲肠扁桃体中的IgG生成细胞数在第22d仍高于对照组。（2）雏鸡感染E．tenella后第6d即可在循环血液中检测到特异性IgG，于第18d达到峰值，第30d降至感染后第7d时的水平。（3）特异性母源抗体IgG水平高的雏鸡，抗球虫水平高。雏鸡母源抗体IgG水平随日龄增长逐渐下降，同时雏鸡的抗球虫水平也随之降低，母源抗体IgG水平与抗球虫能力有明显的正相关性。     

中药对柔嫩艾美尔球虫感染鸡外周血T细胞亚群的影响

为研究中药对柔嫩艾美尔球虫感染鸡免疫水平的影响,本实验采用流式细胞技术检测柔嫩艾美尔球虫感染鸡外周血CD4+T细胞亚群,以及CD8+T细胞亚群数目的动态变化。结果表明,接种球虫后,感染给中药组鸡CD4+、CD8+T细胞亚群数目及百分比(CD4+T/CD8+T)均高于感染不给药组,9d时,感染给中药组最高,分别为9.77和7.53,与感染不给药组差异显著(p0.05)。感染球虫组CD4+T/CD8+T比值均低于不感染组,感染给中药组在接种后第6d和第9d均高于感染不给药组。感染给中药组、不感染给中药组和不感染不给药组CD4+T/CD8+T平均值均在2-1之间,分别为1.11、1.33和1.25,而感染不给药组仅为0.93。     

柔嫩艾美尔球虫在易感和非易感鸡的原代肾细胞培养中发…

易感和非易感来航鸡对柔嫩艾美尔球虫（下简称球虫）感染的抵抗力相差６倍，本研究在确定能否用宿主肾细胞来测定不同品种鸡球虫的抵抗力，球虫在宿主细胞培养中可避免体流和细胞免疫的影响，从而可以在细胞水平上研究宿上遗传因素对球虫发育的影响，接种后４８和９６小时，检查两种细胞系培养对球虫发育的影响，以及宿主细胞开始感染到出现裂殖生殖所需时间，通过液态闪烁计数测定其差别，结果证明，球虫在两个发育阶段在易感鸡宿主     

柔嫩艾美耳球虫与鸡体的相互作用

鸡吞食柔嫩艾美耳球虫卵囊后感染,子孢子穿过绒毛上皮和固有层,进入隐窝上皮细胞,经数次无性生殖和有性生殖,形成裂殖子和配子体。大配子被小配子受精后发育成卵囊,并脱落到粪便中,鸡感染球虫后,鸡体免疫系统抑制球虫的发育有三个时期：子孢子寻找穿透位点时;子孢子在绒毛上皮时;子孢子穿过固有层时。据此,我们研究了抗球虫免疫中诱导和效应阶段的决定因素。结果表明,子孢子在固有层中的穿透诱导了免疫;子孢子是免疫有关的最重要的发育阶段;细胞毒性Ｔ细胞对抑制球虫发育是必需的。     

猪T细胞表面抗原特异性单克隆抗体的研制及其特性鉴定

用从健康猪胸腺提取的 Ｔ 淋巴细胞作抗原免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠。取免疫鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／０ 骨髓瘤细胞融合，经 ３ 次克隆，共获得 １０ 株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。以细胞反应特异性试验、 Ｗ ｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ 分析、流式细胞计数（ Ｆ Ｃ Ｍ ）等方法，确定了对猪 Ｔ 细胞表面抗原特异性反应的单抗（ Ｍ ｃ Ａｂｓ），其中 ２ Ｄ９ 、３ Ｂ１ ０ 可以识别相对分子质量 ５０ ０００ 的 Ｔ 细胞膜蛋白，能标记 ９６％ 的胸腺细胞、８９％ 的外周血 Ｔ 淋巴细胞、８７％ 的脾 Ｔ 淋巴细胞，其特性与猪 Ｃ Ｄ２ 抗原相符；另一株 １ Ｇ１ ２ 可识别相对分子质量 ６３ ０００ 的 Ｔ 细胞膜蛋白，能标记 ９８％ 的胸腺细胞、９１％ 的外周血 Ｔ 淋巴细胞、７８％ 的脾 Ｔ 淋巴细胞，其特性与猪 Ｃ Ｄ５ 抗原相符。     

中药抗柔嫩艾美尔球虫机制研究

根据中兽医理论和鸡球虫病的特点，用纯中药组方，经组方药效筛选试验，选用抗球虫效果最佳的组方进行抗球虫机制研究，结果表明，所选中药组方具有明显的抑制未孢子化柔嫩艾美尔球虫卵囊的成熟，对孢子化孵囊具有杀灭作用，并且使外周血液中淋巴细胞尤其是Ｔ淋巴细胞增多，提高免疫器官中Ｔ和Ｂ淋巴细胞的数量和活性，从而提高机体的免疫能力，证明了该组具有高效抗球虫效果。     

通过血清中检查证实新孢子虫为英国牛流产的病原

用体外培养的新孢子虫作为抗原，用免疫荧光抗体试验（ＩＦＡＴ）检测流产的１２０头苏格兰牛，发现有１１头抗新孢子虫抗体有效价≥１：１２８０，而最近未流产的９７头牛仅有１头出那么高的抗体价，直接凝集试验证明，抗新孢子虫抗体价高的样本与弓形体之间无交叉反应，说明其抗体具有特异性，而实验感染弓形体，枯氏肉孢子虫，牛艾美尔球虫，阿拉巴艾美尔球虫，微小隐孢子虫和分歧巴贝西虫的牛恢复期血清ＩＦＡＴ效价为１：６４０     

甜菜碱对感染巨型艾美耳球虫雏鸡的生理生化参数影响研究

试验对雏鸡感染巨型艾美耳球虫后在饲料中添加甜菜碱和马杜拉霉素控制其感染过程，并对鸡血液中一些生理生化指标进行了研究。结果表明，雏鸡血液中白细胞，红细胞和血红蛋白的变化对该球虫感染非常敏感，这些指标监测操作简便，可作为评估球虫感染状况的监测指标。并认为感染雏鸡电解质的平衡紊乱是其死亡的主因之一，同时表明甜菜碱的抗球虫作用明显，对机体的电解质平衡有改善作用，而马杜拉霉素在控制虫感染时对机体的电解发质平