ICHV在MDCK细胞上增殖的研究

采用免疫组化ＢＡ法进行了犬传染性肝炎病毒（ＩＣＨＶ）在ＭＤＣＫ细胞上定位的研究．结果表明，接毒后１０小时可见细小阳性反应颗粒出现于肿胀的病变细胞核中．ＨＥ染色所见包涵体形态与临床发病犬肝实质细胞包涵体形态相似，提示可能是ＩＣＨＶ感染细胞所引起的特征性变化．同时测定的病毒血凝滴度结果表明，包涵体的形成与病毒增殖有一定关系，８４～９６小时收毒较为适宜．     

犬实验性感染ICHV的病理学研究

采用北京地区分离的犬传染性肝炎病毒ＢＪ－１株经口服感染１月龄幼犬，对死亡犬和濒死犬进行病理形态学观察和脏器组织中抗定位的研究。表明，肝脏是ＩＣＨＶ侵害的主要靶器官，胆囊的病理改变和脏器组织中的包涵体形态具有一定的诊断意义；采用ＢＡ法诊断犬传染性肝炎，具有特异性强，结果确实可靠，标本易于长期保存等优点。     

CDV93039株在Vero细胞上增殖的研究

ＣＤＶ９３０３９株感染Ｖｅｒｏ细胞后主要表现细胞变性,坏死,空泡化,合肥体形成和包涵体的出现。感染后４天可见胞浆包涵体,８天可见核内包涵体,核内包涵体的产生可能与病毒的毒力有关。与文献报道的ＣＤＶ其他毒株相比,ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的感染速率属中间型。     

CDV93039株在Vero细胞上增殖的研究

ＣＤＶ９３０３９株感染Ｖｅｒｏ细胞后主要表现细胞变性、坏死,空泡化、合胞体形成和包涵体的出现。感染后４天可见胞浆包涵体,８天可见核内包涵体,核内包涵体的产生可能与病毒的毒力有关。与文献报道的ＣＤＶ其他毒株相比,ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的感染速率属中间型。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上增殖后的毒力较高,除不同毒株间可能存在差异外,培养温度的高低亦是原因之一。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的最佳增殖条件是在３３℃培养８～１２天。     

H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞中增殖最佳条件研究

为了探讨H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞中增殖的最佳条件,将不同毒株、不同接种量的H9N2亚型禽流感病毒接种MDCK细胞单层,接毒后直接加入或吸附lh后加入含有10 μg/mL胰蛋白酶的DMEM维持液,每隔24 h观察细胞病变,并测定细胞上清液中HA滴度.结果表明,分离株HN04在MDCK细胞中增殖能力较其他2株强...     

犬呼肠病毒3型在BHK-21细胞上增殖的研究

采用酶标ＳＰＡ法进行了犬呼肠３ 型病毒在ＢＨＫ２１ 细胞上定位的研究。结果表明：接毒后６ ｈ 即可在胞浆见到絮状阳性反应,２４ ｈ 后呈强阳性着染;Ｈ．Ｅ．染色在胞浆内可见强嗜酸性着染或嗜酸性包涵体,提示可能是病毒感染引起的特征性病变,感染后细胞病变发展较快,６０ ｈ 细胞大部脱落;病毒血凝滴度结果也证实了细胞病变与病毒增殖有关。     

猪传染性胃肠炎病毒在组织细胞上增殖的研究

从组织细胞制备,不同试验细胞及不同维持液组成成份三个方面对ＴＧＥＶ在组织细胞上增殖情况进行了比较。结果表明,用含１５％ＦＢＳ培养液进行了ＳＴ或ｐｋ１５细胞传代并制备悬液,操作方便,能形成良好单层,利用ＴＧＥＶ ＣＰＥ判定;ＳＴ细胞在病毒增殖和检测毒价两方面均较ｐｋ１５细胞分别高２个滴度和１个滴度以上;维护液中提高血清含量或含一定量胰酶对ＴＧＥＶ增殖效果影响不大。     

猪细小病毒CG-05株在ST细胞上的增殖规律研究

通过将猪细小病毒CG-05株同步接种于ST细胞,测定不同时间收获的病毒液的TCID50和HA,研究了CG-05株病毒在ST细胞上的增殖规律。病毒接种后镜检观察接毒细胞,在接种病毒后24 h,即可在细胞较少的区域看到非常轻微的病变。测定病毒TCID50,检测到接毒后培养17h病毒已经明显增殖;当培养到40h左右,其TCID50即接近高峰,达到10-7.2/0.1mL以上,并进入平台期;继续培养,TCID50最高可达到10-8.5/0.1mL,且直到122 h也不见明显降低。病毒HA价也出现同样的平台期,但比TCID50的平台期出现得晚,到50 h才进入平台期。结果表明,用ST细胞培养CG-05株病毒,接种病毒培养56～96 h后,如病变达到80%以上,且细胞脱落已形成20%以上空斑,此时收获病毒可获得高效价的病毒液。该研究可为制备高效价的PPV病毒抗原提供数据资料。     

犬瘟热病毒在不同组织细胞上增殖特性的研究

将犬瘟热病毒(CDV)分别接种于长满单层的鸡胚成纤维细胞(CEF)、非洲绿猴肾细胞系(Ve-ro)、犬肾细胞系(MDCK),观察其病变时间、病变特征,并对其进行RT-PCR鉴定和TCID50测定。结果表明,CDV在这3种细胞上均能增殖,并产生明显的细胞病变(CPE),但在Vero细胞上产生病变的时间短,病变明显,且TCID50最高;RT-PCR检测CDV在不同细胞上的病毒培养液,均能扩增出337bp的片段;CDV在Vero细胞上的增殖滴度明显高于在CEF、MDCK细胞上的增殖滴度。表明本试验所选用的3种细胞中,Vero细胞最适宜培养CDV,所获得的CDV的毒价最高,病变最明显。     

鸽痘病毒在鸡胚上的增殖和纯化研究

通过实验建立了鸽痘病毒的鸡胚绒毛尿囊膜和鸡胚尿囊腔培养方法，并对这两种方法的病毒收获量进行了比较研究。结果表明：这两种培养方法实用易行，实验所收集的病毒可以满足电子显微镜观察、核酸分析等科研及疫苗生产的需要。为鸽痘病毒的深入研究提供有利的试材。     

重组禽流感病毒H5亚型Re-7株在MDCK细胞上增殖条件的研究

为了探索重组禽流感病毒H5亚型Re-7株在MDCK细胞上的增值规律,确定最适的接毒量与最佳收获时间。将重组禽流感病毒H5亚型Re-7株接种至100 L生物反应器全悬浮无血清培养的MDCK细胞进行增殖试验,检测不同病毒感染量,接种后不同时间病毒的HA、TCID50以及EID50。根据确定的最佳增值条件将病毒接种到MDCK细胞中进行大规模增殖培养。确定最适接毒量MOI为10~(-2),最佳收获时间为60 h。在100 L生物反应器中进行重复验证,获得稳定的试验结果,病毒HA达到1∶1024,每1 m L病毒含量达到107.33TCID50,每0.1 m L病毒含量达到106.83EID50。研究为重组禽流感病毒H5亚型Re-7株的全悬浮规模化生产提供了相对稳定的参数指标。     

犬瘟热病毒在Vero细胞上培养条件的优化研究

犬瘟热病毒(CDV)在Vero细胞上增殖条件研究结果表明，血清含量5％，2倍的细胞密度，24h接毒，48～96h有利于CDV的增殖。     

犬传染性肝炎的防治法

犬传染性肝炎是犬传染性肝炎病毒引起的一种急性败血性的传染病。本病分布广、无季节性、不分品种、性别、年龄的犬都具有易感性特别是离乳后至未满一年的幼犬其感染率、死亡率都很高。传播途径主要是健犬接触病犬发热时的呕吐物、唾液、鼻液、粪、尿等及其所污染的食     

鸡新城疫病毒LaSota株在BHK-21细胞上增殖条件的优化

本研究旨在对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株在BHK-21细胞上的增殖条件进行优化,为实现应用细胞系生产NDV提供参考。在确定BHK-21细胞TPCK-胰酶耐受浓度的基础上,在培养基中添加不同浓度的TPCK-胰酶、新生牛血清及调节不同pH,通过对细胞培养液细胞半数感染量(TCID₅₀)的测定,确定最适胰酶浓度、血清浓度及pH;通过固定接毒量而添加不同数量细胞或固定细胞数量而接种不同量的病毒,确定最适细胞量及接毒量;将BHK-21细胞接种NDV LaSota株后,通过测定不同时间细胞上清液TCID₅₀绘制增殖曲线,确定最佳收毒时间;应用转瓶对该病毒进行扩大培养,并进行TCID₅₀、鸡胚半数感染量(EID₅₀)与血清凝集价(HA)的测定。结果显示,NDV LaSota株在BHK-21细胞上增殖的最适TPCK-胰酶浓度为3μg/mL,最适接毒量为10^6.375 EID₅₀,细胞数量为1×10~6个,培养基pH为7.2,且可用无血清培养基进行培养,BHK-21细胞接种NDV LaSota株后最佳收毒时间为34～36 h。应用BHK-21细胞采用转瓶培养的方式对NDV LaSota株进行增殖,结果显示,细胞培养液TCID₅₀值为10^7.0/0.1 mL,EID₅₀为10^7.5/0.1 mL,HA效价为1∶256。因此,应用以上条件增殖培养NDV LaSota株,完全适用于该病毒的规模化生产,且符合现行的兽医生物制品与检验制造规程。